郭飛波

(天門市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，天門431700)

慢性乙肝患者血清補(bǔ)體C3、C4與肝炎分級(jí)程度以及肝纖維化程度的關(guān)系研究

郭飛波

(天門市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，天門431700)

目的：研究血清補(bǔ)體C3及C4水平與慢性乙肝(CHB)患者肝炎分級(jí)程度及肝纖維化程度的關(guān)系。方法：收集2014年3月～2016年3月期間，我院收治的CHB患者185例作為CHB組，同期體檢健康者60例作為對(duì)照組，檢測(cè)并比較兩組的血清補(bǔ)體C3、C4水平，并分析C3、C4與CHB肝炎G分級(jí)、肝纖維化S分級(jí)的關(guān)系。結(jié)果：CHB組的血清C3、C4水平顯著低于對(duì)照組(t=10.476、9.172，P<0.05)；血清C3、C4水平在不同肝炎活動(dòng)度之間比較差異顯著(F=4.321、3.495，P<0.05)，在不同肝纖維化分級(jí)之間比較差異顯著(F=3.861、4.541，P<0.05)；血清C3、C4水平與肝炎活動(dòng)度G分級(jí)呈顯著負(fù)相關(guān)性(r=-0.575、-0.542，P<0.05)，與肝纖維化S分級(jí)(≥S1)顯著負(fù)相關(guān)性(r=-0.512、-0.636，P<0.05)。結(jié)論：血清補(bǔ)體C3、C4水平與CHB患者肝炎程度及肝纖維化程度密切相關(guān)，可作為CHB患者肝病理學(xué)狀態(tài)的輔助預(yù)測(cè)指標(biāo)。

慢性乙型肝炎；肝纖維化；肝炎炎癥分級(jí)；補(bǔ)體

乙型肝炎病毒(HBV)感染所致肝炎是世界范圍內(nèi)最為常見的肝病類型之一，HBV感染后免疫逃逸，導(dǎo)致HBV持續(xù)存在而發(fā)生肝炎慢性化，還可進(jìn)一步誘發(fā)肝硬化、肝衰竭甚至肝癌等，嚴(yán)重威脅患者的健康[1]。既往主要依靠肝組織病理學(xué)檢查評(píng)價(jià)CHB患者的肝炎活動(dòng)度及肝纖維化程度，但因肝活檢創(chuàng)傷較大，且不便重復(fù)檢查，臨床應(yīng)用具有一定的局限性。近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者致力于CHB肝炎活動(dòng)度與肝纖維化程度的生物學(xué)標(biāo)志物研究，發(fā)現(xiàn)血清補(bǔ)體C3、C4在不同肝損傷階段具有特征性變化，可能對(duì)CHB病理學(xué)狀態(tài)評(píng)估具有指導(dǎo)意義[2]。本研究檢測(cè)分析了185例CHB患者不同肝炎分級(jí)與肝纖維化程度的血清補(bǔ)體C3、C4水平變化，旨在評(píng)估血清補(bǔ)體C3及C4檢測(cè)對(duì)CHB患者肝炎分級(jí)程度及肝纖維化程度的預(yù)測(cè)及評(píng)估價(jià)值，為臨床評(píng)價(jià)肝組織病理學(xué)狀態(tài)提供無(wú)創(chuàng)性診斷指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 資料 研究對(duì)象為2014年3月～2016年3月期間我院收治的CHB患者185例為CHB組，同期體檢健康者60例對(duì)照組。CHB組中，男131例，女54例，年齡20～68歲，平均(40.32±5.43)歲。對(duì)照組中，男43例，女17例，年齡20～70歲，平均(37.89±4.98)歲。兩組年齡、性別構(gòu)成等經(jīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 病例選擇

1.2.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) CHB組符合《慢性乙型肝炎防治指南》[3]中診斷標(biāo)準(zhǔn)；血清檢查顯示乙肝表面抗原(HBsAg)呈陽(yáng)性，且持續(xù)時(shí)間>6個(gè)月；經(jīng)超聲或CT檢查提示肝組織炎癥性病變，經(jīng)血生化檢查顯示血清白蛋白(ALB)降低、總膽紅素(TBIL)升高、凝血酶原時(shí)間(PT)延長(zhǎng)等；患者自愿參與本次研究，病例資料完整；具有完整的肝炎活動(dòng)度評(píng)估與肝纖維化分級(jí)資料。

1.2.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 甲型及丙型等其他類型肝炎病毒感染者；藥物性肝炎、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、脂肪肝以及肝癌患者；合并嚴(yán)重心肺功能不全、腎臟及血液系統(tǒng)疾病、大量腹腔內(nèi)腹水、肝前腹水及過度肥胖者；妊娠期、哺乳期女性。

1.2.2 檢查方法

1.2.2.1 病理學(xué)檢查 CHB組患者在彩色多普勒超聲引導(dǎo)下實(shí)施1 s快速經(jīng)皮肝穿刺。采集≥1.5 cm長(zhǎng)肝組織，標(biāo)本包含至少3個(gè)匯管區(qū)。常規(guī)以10%甲醛液進(jìn)行標(biāo)本固定，石蠟包埋并連續(xù)切片，以HE以及網(wǎng)織纖維染色處理。由經(jīng)驗(yàn)豐富的高年資病理學(xué)醫(yī)師1名獨(dú)立完成標(biāo)本觀察分析。參照《病毒性肝炎防治方案》[4]對(duì)肝炎活動(dòng)度與肝纖維化程度進(jìn)行分級(jí)，肝炎活動(dòng)度包括G1-G4級(jí)，肝纖維化程度包括S0-S4級(jí)。

1.2.2.2 血清補(bǔ)體檢測(cè) 所有受試者均在隔夜空腹>8 h后采集于次日清晨8:00～9:00采集空腹肘靜脈血5 ml，3 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min，分離血清，在1 h內(nèi)完成檢測(cè)。應(yīng)用Beckman Coulter公司生產(chǎn)的Immage 800型免疫化學(xué)系統(tǒng)及其配套試劑，采用免疫比濁法進(jìn)行血清補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)，正常參考值范圍：C3為0.79～1.52 g/L，C4為0.16～0.38 g/L。

2 結(jié)果

2.1 CHB組與對(duì)照組的血清C3、C4水平比較 CHB組的血清C3、C4水平均較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，見表1。

2.2 不同肝炎分級(jí)的血清C3、C4水平比較 不同肝炎分級(jí)的C3、C4水平比較差異顯著，且隨著分級(jí)升高呈現(xiàn)顯著降低趨勢(shì)(P<0.05)。C3與C4在相鄰G分級(jí)之間比較，C3在G1與G2、G2與G3、G3與G4之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.057、2.330、2.682，P=0.042、0.021、0.010<0.05)，C4在G1與G2、G2與G3之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.334、3.587，P=0.000、0.000<0.05)，但在G3與G4之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.682，P=0.098>0.05)。見表2。

2.3 不同肝纖維化程度血清C3、C4水平比較 不同肝纖維化程度血清C3、C4水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C3與C4在相鄰G分級(jí)之間比較，C3在S0與S1、S1與S2、S0與S2之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.679、0.756、1.179，P=0.098、0.470、0.243)，在S1與S3、S1與S4之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.705、3.369，P=0.008、0.001>0.05)；C4在S1與S2之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.606，P=0.546>0.05)，在S0與S1、S0與S2、S1與S3、S4與S3之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.130、3.427、4.663、6.783，P=0.027、0.001、0.000、0.000<0.05)。見表3。

2.4 血清C3、C4與肝炎分級(jí)及肝纖維化程度的相關(guān)性 C3、C4與肝炎G分級(jí)和肝纖維化分級(jí)呈顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表4。

GroupsnC3C4CHBgroup1850.87±0.150.18±0.05Controlgroup601.12±0.190.26±0.08t10.4769.172P0.0000.000

InflammatorygroupnC3C4G1600.91±0.310.26±0.07G2670.82±0.170.21±0.06G3510.75±0.150.17±0.06G470.59±0.130.13±0.05F4.3213.495P0.0120.017

InflammatorygradingnC3C4S0240.80±0.230.18±0.06S1360.91±0.260.24±0.08S2470.87±0.240.23±0.07S3410.77±0.220.17±0.05S4370.73±0.220.14±0.04F3.8614.541P0.0150.009

表4 血清C3、C4與肝炎分級(jí)及肝纖維化程度的相關(guān)性

Tab.4 Correlation of serum C3 and C4 with hepatic grading and degree of hepatic fibrosis

ComplementGclassficationrPSclassfication(≥S1)rPC3-0.5750.011-0.5120.017C4-0.5420.015-0.6360.004

3 討論

CHB患者的肝損傷與病毒變異及宿主免疫應(yīng)答水平密切相關(guān)，尤其是與補(bǔ)體系統(tǒng)及細(xì)胞免疫狀態(tài)關(guān)系密切。臨床研究表明，HBV感染后所致肝炎、肝硬化等并非病毒直接損傷肝細(xì)胞所致，而是由于感染HBV后引起機(jī)體免疫功能紊亂而致病[2]。因此，免疫功能在CHB的發(fā)生及發(fā)展中具有重要作用，評(píng)價(jià)免疫功能狀態(tài)對(duì)于CHB的防治及病情評(píng)估具有重要價(jià)值。

補(bǔ)體是一組存在于組織液及血清中的具有酶活性的球蛋白，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)環(huán)境維護(hù)及抗病原菌等生理過程中中具有重要作用，同時(shí)也具有免疫性病理?yè)p傷介導(dǎo)作用。補(bǔ)體系統(tǒng)主要包括30多種膜結(jié)合蛋白及可溶性蛋白，其中，以C3、C4最為重要，因其變化多與補(bǔ)體總水平呈平行狀態(tài)，可直接反映機(jī)體補(bǔ)體系統(tǒng)功能狀態(tài)，從而較為客觀、準(zhǔn)確地反映機(jī)體體液免疫功能[5]。臨床研究表明，人體的免疫因子有超過90%源于肝臟，肝細(xì)胞是血液中大部分蛋白質(zhì)的主要合成場(chǎng)所[6]。因此，在發(fā)生CHB后肝細(xì)胞損傷，勢(shì)必影響補(bǔ)體C3、C4的合成，從而導(dǎo)致血清C3、C4水平降低。同時(shí)，HBV持續(xù)感染可引起機(jī)體免疫功能紊亂，導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)激活，增加機(jī)體的C3、C4消耗量，也可導(dǎo)致血清C3、C4降低[7]。本研究結(jié)果顯示，CHB組的血清補(bǔ)體C3、C4水平均較健康對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，與既往研究報(bào)道一致[8,9]，證實(shí)CHB患者具有補(bǔ)體合成紊亂，主要表現(xiàn)為血清C3、C4水平降低。

C3、C4是反應(yīng)機(jī)體體液免疫的敏感指標(biāo)，同時(shí)也是反映肝細(xì)胞損傷的主要指標(biāo)之一，血清C3、C4水平降低多提示體液免疫異常及肝細(xì)胞受損[10]。何濤君等[11]研究表明，血清補(bǔ)體C3、C4與CHB嚴(yán)重程度及HBV-DNA呈密切相關(guān)，C3、C4水平越低，CHB病情越嚴(yán)重，HBV-DNA復(fù)制活躍性越高。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著肝炎分級(jí)程度的升高，血清C3、C4水平呈現(xiàn)顯著降低趨勢(shì)，C3與C4在相鄰G分級(jí)之間比較，C3在G1與G2、G2與G3、G3與G4之間比較差異顯著(P<0.05)，而C4在G1與G2、G2與G3之間比較差異顯著(P<0.05)，且Spearman分析顯示血清C3、C4與肝炎分級(jí)均呈顯著負(fù)相關(guān)性(r=-0.542、-0.575，P<0.05)，C3與G分級(jí)的相關(guān)性高于C4，這與劉興暉等[12]報(bào)道相似，證實(shí)血清補(bǔ)體C3、C4降低可能參與了HBV感染的慢性化過程及病理進(jìn)展。Vasel等[13]研究顯示，CHB肝硬化患者的血清補(bǔ)體C3、C4水平與Child分級(jí)呈顯著負(fù)相關(guān)性，Child分級(jí)越高則血清C3、C4水平越低。國(guó)外研究報(bào)道顯示，在肝硬化發(fā)生前，患者的血清C3、C4水平有輕度升高，發(fā)生肝硬化后顯著降低，而進(jìn)展至肝癌后呈顯著升高趨勢(shì)[14]。由此可見，血清補(bǔ)體C3、C4水平可隨著HBV感染患者肝臟病理變化而波動(dòng)。本研究中，肝纖維化S1期患者的C3、C4水平最高，而在S0期及S2-S4期均降低，但在S2時(shí)降低不明顯，在S3、S4期時(shí)降低明顯，可能是由于肝臟具有強(qiáng)大的儲(chǔ)備功能，在發(fā)生肝纖維化后可代償性地生成C3、C4，或肝炎活動(dòng)可誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成C3、C4，從而出現(xiàn)短暫性C3、C4水平升高。此外，C4僅在S1與S2中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其余分級(jí)兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而C3僅在S1與S3、S1與S4之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，相關(guān)性分析亦顯示，≥S1與血清C3、C4水平呈顯著負(fù)相關(guān)性，且C4與S分級(jí)的相關(guān)性高于C3，認(rèn)為C4在S分級(jí)評(píng)估中更具價(jià)值。張占卿等[15]研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者的血清補(bǔ)體C3、C4水平在肝炎活動(dòng)度G1和肝纖維化S1期時(shí)最高，而此后均隨著分期升高呈降低趨勢(shì)，這與本研究基本一致。且其采用Wilks′ λ法逐步判別分析顯示，CHB患者血清補(bǔ)體C3水平≥0.84 g/L時(shí)多提示肝炎程度為G1級(jí)，而當(dāng)補(bǔ)體C3水平≤0.65 g/L時(shí)多提示G4級(jí)肝炎；血清補(bǔ)體C4水平 ≥0.18 g/L時(shí)多提示肝纖維化程度為S1期，而當(dāng)補(bǔ)體C4水平≤0.14 g/L時(shí)多提示S4期肝纖維化。本研究中，G1級(jí)CHB患者的C3平均為(0.91±0.33) g/L，超過0.84g/L；G4時(shí)C3為(0.59±0.15) g/L；S1患者的C4水平(0.24±0.08) g/L，≥0.18 g/L，而S4患者的C4水平(0.14±0.05) g/L，≤0.14 g/L，與上述報(bào)道基本吻合。提示HBV感染后在發(fā)生顯著肝炎活動(dòng)期(G1)及肝纖維化初期(S1～S2)之前有一定程度的升高，而隨著病情進(jìn)展又將再度降低，C3、C4水平檢測(cè)對(duì)中、重度肝臟炎癥及肝纖維化具有較大的預(yù)測(cè)價(jià)值。

綜上所述，CHB患者具有血清補(bǔ)體C3、C4異常變化，且隨著肝臟炎癥活動(dòng)度以及肝纖維化程度的不同而變化，除在肝炎活動(dòng)期(G1)及肝纖維化初期(S1-S2)之前有一定程度升高外，均隨著病情進(jìn)展具有顯著降低趨勢(shì)，血清C3、C4水平檢測(cè)可能對(duì)中、重度肝炎、肝纖維化具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值，對(duì)病情評(píng)估、診治決策及預(yù)后判斷有所助益。

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[收稿2016-08-08 修回2016-08-25]

(編輯 許四平)

Research on relationship between serum complement C3,C4 and hepatitis grade level and liver fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B

GUOFei-Bo.

DepartmentofClinicalLaboratory,TianmenFirstPeople′sHospital,Tianmen431700,China

Objective:To investigate the relationship between serum complement C3,C4 and hepatitis grade level and liver fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B(CHB).Methods: 185 cases of patients with CHB admitted in our hospital from March 2014 to 2016 March were collected as CHB group,60 cases who were considered healthy at the same period as the control group.The serum complement C3,C4 of the two groups were detected and compared,and relationship between serum complement C3,C4 and hepatitis grade level and liver fibrosis degree was analyzed.Results: The serum C3,C4 levels in CHB group were significantly lower than the control group (t=10.476,9.172,P<0.05).The differences of serum C3,C4 levels among different levels of hepatitis activity were significant (F=4.321,3.495,P<0.05),and differences among different levels of hepatic fibrosis grading were significant (F=3.861,4.541,P<0.05).The serum C3,C4 levels were negatively associated with G rating of hepatitis activity(r=-0.575,-0.542,P<0.05),and were negatively associated with S rating (≥S1) of liver fibrosis (r=-0.512,-0.636,P<0.05).Conclusion: The serum complement C3,C4 levels is closely related with hepatitis grade level and liver fibrosis degree in patients with CHB,it can be used as secondary predictors of hepatic pathological status in CHB patients.

Chronic hepatitis B;Liver fibrosis;Hepatic inflammation grade;Complement

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.03.023

郭飛波(1980年-)，男，碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事病毒免疫分子病毒方面的研究，E-mail：guofeibo@126.com。

R575.1

A

1000-484X(2017)03-0426-04