楊兵

(湖南省懷化市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 懷化 418000)

·檢驗(yàn)檢測·

高效液相色譜法同時測定參蘇止咳糖漿中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量

楊兵

(湖南省懷化市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 懷化 418000)

目的建立同時測定參蘇止咳糖漿中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用VenusilMP C18柱(250mm×4．6mm，5 m)，流動相為甲醇-水(25∶75)，流速為1．0mL／min，柱溫為35℃，檢測波長為283 nm，進(jìn)樣量為10 L。結(jié)果 葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的線性范圍分別為6．401 3～64．012 8 g／m L(r＝0．999 6)，4．295 6～42．955 9 g／m L(r＝0．999 8)，3．853 9～38．539 3 g／mL(r＝0．999 7)，0．562 5～5．625 4 g／m L(r＝0．999 8)，平均回收率分別為99．46%，99．64%，99．55%，99．45%，RSD分別為0．59%，0．63%，0．50%，0．67%(n＝9)。結(jié)論 該方法操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好，能排除其他成分的干擾，提供了更好地控制該藥質(zhì)量的方法。

高效液相色譜法；參蘇止咳糖漿；葛根素；柚皮苷；橙皮苷；新橙皮苷

參蘇止咳糖漿是由葛根、陳皮、枳殼、甘草等13味中藥提取制成的醫(yī)院制劑，具有益氣解表、止咳化痰的功效，用于體氣虛弱、外患風(fēng)寒、內(nèi)有濕痰之癥，癥見咳嗽痰稀，鼻塞流涕，胸膈脹滿，苔白，脈浮無力。其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了性狀、理化鑒別及糖漿劑通則的檢查項(xiàng)，未對該制劑處方中的任何藥物所含成分進(jìn)行定量測定，尚無文獻(xiàn)報道該制劑的含量測定。葛根、陳皮和枳殼為方中主要藥物，葛根解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)[1]；陳皮理氣健脾，燥濕化痰[2]；枳殼理氣寬中，行滯消脹[3]。葛根中主要有效成分為葛根素，陳皮中為橙皮苷，枳殼中為柚皮苷和新橙皮苷，還含少量橙皮苷。為了更好地控制本品質(zhì)量，本試驗(yàn)中參考文獻(xiàn)[4-6]，采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定參蘇止咳糖漿中葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量，為參蘇止咳糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供有效依據(jù)。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀(安捷倫科技＜中國＞有限公司)；SK3300H型超聲儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；AB135-S型電子分析天平(梅特勒-托利多中國公司)。

1．2 試藥

葛根素對照品(批號為 110752-200912，含量為96．0%)，柚皮苷對照品(批號為110722-201312，含量為94．7%)，橙皮苷對照品(批號為110721-201316，含量為 95．3%)，新橙皮苷對照品(批號為 111857-201102，含量為99．6%)，均購自中國食品藥品檢定研究院；參蘇止咳糖漿(湖南省洪江區(qū)中醫(yī)院，批號分別為20160819，20160923，20161104)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Venusil MP C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：35℃；波長：283 nm；流速：1．0 m L／min；流動相：甲醇-水(25∶75)。按葛根素峰計(jì)算，理論板數(shù)均不低于4 000。在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

供試品溶液：精密量取已搖勻的本品 1 m L，置20 mL容量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液：取缺葛根、陳皮和枳殼的陰性制劑適量（約相當(dāng)于供試品的量），按供試品溶液制備方法制備。

對照品溶液：取葛根素對照品16．67mg、柚皮苷對照品11．34 mg、橙皮苷對照品10．11 mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加甲醇適量溶解；取新橙皮苷對照品14．12 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得新橙皮苷對照品溶液；精密吸取新橙皮苷對照品溶液1 m L，置上述50 m L容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，再精密量取20 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密量取上述混合對照品溶液1，2，4，6，8mL，置10m L容量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度。將稀釋后的對照品溶液按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果(n＝5)

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一批（批號為20161104）供試品溶液10μL，按擬訂色譜條件，分別于0，1，2，4，8，12，24 h時進(jìn)樣測定。結(jié)果葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面積的 RSD分別為0．80%，0．35%，0．36%，0．88%(n＝7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一混合對照品溶液10μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面積的 RSD分別為0．44%，0．46%，0．44%，0．45%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批(批號為20161104)樣品，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行制備6份，進(jìn)樣測定含量。結(jié)果葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量的RSD分別為1．13%，1．25%，1．22%，1．40%(n＝6)，表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量（葛根素0．452 2 g／L、柚皮苷0．260 7 g／L、橙皮苷0．290 7 g／L、新橙皮苷0．036 23 g／L）的樣品(批號為20161104)1mL，共9份，置20 mL容量瓶中，分別精密量取質(zhì)量濃度為64．012 8，42．955 9，38．539 3，5．625 4μg／mL的葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷混合對照品溶液 4．0，4．0，4．0，6．0，6．0，6．0，8．0，8．0，8．0m L，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，用0．45μm微孔濾膜濾過，取濾液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測定。結(jié)果見表3。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

表3 樣品含量測定結(jié)果(g／L)

3 討論

3．1 指標(biāo)性成分選擇

葛根、陳皮和枳殼為方中主要藥物，葛根中主要有效成分為葛根素，陳皮中為橙皮苷，枳殼中為柚皮苷和新橙皮苷，以及少量橙皮苷[7-10]。故測定參蘇止咳糖漿中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷這幾種成分含量能更好地控制本品質(zhì)量。

3．2 檢測波長選擇

對葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對照品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷在283 nm波長處有最大吸收，葛根素在283 nm波長處有較大吸收。本研究中采用283 nm作為其檢測波長，葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷能同時成為主要吸收峰，峰形良好，重復(fù)性較好，且其他物質(zhì)對葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的測定無干擾，故選擇283 nm作為檢測波長。

3．3 流動相選擇

曾比較甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0．1%磷酸水溶液、乙腈-0．2%磷酸水溶液、甲醇-乙腈(1∶1)與0．1%冰醋酸溶液不同比例為流動相構(gòu)成的洗脫系統(tǒng)[2，11-14]，優(yōu)選出最佳比例的洗脫流動相。結(jié)果表明，甲醇-水按25∶75進(jìn)行等度洗脫，各色譜峰的分離度和理論板數(shù)均能達(dá)到要求。

3．4 樣品處理方法選擇

考察甲醇、75%甲醇、無水乙醇、70%乙醇4種提取溶劑[15-17]，其中甲醇和無水乙醇的提取回收率都很高，但無水乙醇提取樣品的雜質(zhì)峰較多，干擾大，而甲醇提取樣品的雜質(zhì)峰少，干擾少，故最后確定甲醇為提取溶劑?？紤]到制劑生產(chǎn)時檢驗(yàn)的便捷性，采用超聲（功率100W，頻率40 kHz）提取，并考察不同提取時間（20，30，45min）的提取效果，最終選擇了超聲30min進(jìn)行提取，提取完全，且耗時少。

綜上所述，高效液相色譜法測定參蘇止咳糖漿中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，方法穩(wěn)定可行，分離效果強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好，其他組分干擾小，回收率高，且操作簡便、快速，可為參蘇止咳糖漿的質(zhì)量評價和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供理論依據(jù)。

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Sim u ltaneous Content Determ ination of Puerarin,Naringin,Hesperidin and Neohesperidin in Shensu Zhike Syrup by HPLC

Yang Bing
(Huaihua Institute for Food and Drug Control,Huaihua,Hunan,China 418000)

Objective To establish an HPLC method for the content determination of puerarin,naringin,hesperidin and neohesperidin in Shensu Zhike Syrup．M ethods The Venusil MP C18column(250 mm×4．6 mm,5μm)was used with Methanol-water(25∶75)as mobile phase,the flow rate was 1．0 m L／min,the column temperature was 35℃,the detection wavelength was 283 nm and the injection volume was 10μL．Results The linear ranges of puerarin,naringin,hesperidin and neohesperidin were 6．401 3-64．012 8μg／m L (r＝0．999 6),4．295 6-42．955 9μg／m L(r＝0．999 8),3．853 9-38．539 3μg／mL(r＝0．999 7)and 0．562 5-5．625 4μg／m L (r＝0．999 8)respectively．Their average recovery rates were 99．46%,99．64%,99．55% and 99．45%,RSD＝0．59%,0．63%,0．50% and 0．67%(n＝9)respectively．Conclusion The method is simple and accurate with high sensitivity and good repeatability and can exclude the interference of other components,which can be used for the quality control of the product．

HPLC;Shensu Zhike Syrup;puerarin;naringin;hesperidin;neohesperidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0018-04

2016-10-07；

2016-11-09)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．006

楊兵，男，碩士研究生，工程師，研究方向?yàn)槭称匪幤窓z驗(yàn)及食品藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電子信箱）ybwuwu＠163．com。