曾輝 王麗華 丁毅 姬毓嬌 陳媛 郭裕

夏枯草開(kāi)音合劑治療慢喉喑藥效學(xué)研究*

曾輝1王麗華1丁毅1姬毓嬌1陳媛1郭裕1

目的 建立血瘀痰凝型大鼠慢喉喑模型，研究夏枯草開(kāi)音合劑對(duì)大鼠慢喉喑的治療效果。方法采用SPF級(jí)SD大鼠50只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（A），模型對(duì)照組（B），中藥低濃度組（C），中藥中濃度組（D），中藥高濃度組（E），血瘀痰凝型慢喉喑大鼠造模成功后，A、B組使用生理鹽水，C-E組分別使用低、中、高濃度夏枯草開(kāi)音合劑灌胃，灌胃30天后取聲帶標(biāo)本觀(guān)察病理改變，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果大鼠聲帶各項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)表明實(shí)驗(yàn)造模成功。灌胃30天后，夏枯草開(kāi)音合劑對(duì)聲帶充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、組織增生指標(biāo)的療效有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且在低中高3種藥物濃度范圍內(nèi)，療效隨著藥物濃度增高而提高。結(jié)論夏枯草開(kāi)音合劑對(duì)血瘀痰凝型大鼠慢喉喑具有顯著的治療作用。

大鼠；慢喉喑；夏枯草開(kāi)音合劑；實(shí)驗(yàn)研究

慢喉喑是以聲音低沉費(fèi)力，日久不愈，甚則嘶啞失音的喉科常見(jiàn)慢性疾病，包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的慢性喉炎、聲帶小結(jié)、聲帶息肉等喉部疾病。主要表現(xiàn)為聲帶或室?guī)юつっ?xì)血管擴(kuò)張充血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞間質(zhì)水腫，甚至黏膜肥厚，出現(xiàn)聲帶小結(jié)、聲帶息肉。隨著生活節(jié)奏不斷加快，人際交往越發(fā)頻繁，用嗓過(guò)度的問(wèn)題愈發(fā)突出，慢喉喑的發(fā)病率也越來(lái)越高，且慢喉喑病程長(zhǎng)，易反復(fù)發(fā)作，臨床上中成藥物品種雖多，但多清熱解毒類(lèi)，治療急喉喑效果好，慢喉喑療效較差。因此，慢喉喑成為困擾廣大患者的常見(jiàn)耳鼻咽喉科疾病。

夏枯草開(kāi)音合劑是上海市中醫(yī)醫(yī)院耳鼻咽喉科主任醫(yī)師郭裕教授通過(guò)長(zhǎng)期臨床觀(guān)察，根據(jù)多年辨證經(jīng)驗(yàn)結(jié)合喉鏡所示局部體征，創(chuàng)制而成的以活血化瘀、祛痰散結(jié)為主的院內(nèi)自制制劑。臨床療效確切，副作用小[1-3]，儲(chǔ)存、攜帶、服用方便。本研究通過(guò)建立血瘀痰凝型大鼠慢喉喑模型，研究夏枯草開(kāi)音合劑對(duì)慢喉喑大鼠聲帶組織充血、間質(zhì)水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等方面的治療效果。以補(bǔ)充夏枯草開(kāi)音合劑治療慢喉喑藥效學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究，為進(jìn)一步市場(chǎng)開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)介紹如下：

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠50只，體重400±20g，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)：2010002608336。

2 主要器材和試劑

顯微內(nèi)窺鏡、冷光源、光導(dǎo)纖維、電腦顯示器、主機(jī)、顯微咬鉗、負(fù)壓吸引器、大鼠固定板、2ml注射器，體重計(jì)、固定皮套若干、干棉球若干、酒精棉球若干、灌胃針、鑷子等。

夏枯草開(kāi)音合劑（上海市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，滬藥制字Z05190765），10%水合氯醛，生理鹽水，10%福爾馬林，脫水劑，二甲苯，石蠟，染色液，蒸餾水，乙醇等。

3 方法

①分組：50只SPF級(jí)SD大鼠50只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（A組），模型對(duì)照組（B組），中藥低濃度組（C組），中藥中濃度組（D組），中藥高濃度組（E組）5組，每組10只。動(dòng)物喂養(yǎng)在同一標(biāo)準(zhǔn)化條件下(2～3大鼠/籠，溫度為20～24℃，相對(duì)濕度45%～65%，12小時(shí)的光/暗周期)，整個(gè)研究中一直提供食物和水。

②模型制作：用10%水合氯醛以0.3ml/100g劑量行腹腔注射進(jìn)行麻醉，3～4分鐘后大鼠進(jìn)入深睡眠后將鼠固定在鼠固定板上，將上門(mén)牙向大鼠背部方向牽拉并固定,下門(mén)牙與舌一起用橡皮筋牽拉并固定，使口咽氣道充分暴露。在顯微內(nèi)窺鏡下，用顯微咬鉗沿內(nèi)窺鏡旁伸入聲門(mén)處，迅速鉗傷大鼠雙側(cè)聲帶上皮層，成功后使用負(fù)壓吸引器吸除聲門(mén)處滲血及痰液，使大鼠呼吸道保持通暢。B-E組40只大鼠在同一條件下由同一人順次完成。

③給藥方法：A組和B組大鼠使用0.9%生理鹽水4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）；C組用夏枯草開(kāi)音合劑按公式換算后，8.3mg/100g生藥，0.9%生理鹽水稀釋為4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）；D組夏枯草開(kāi)音合劑按公式換算后，16.6mg/100g生藥，0.9%生理鹽水稀釋為4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）；E組夏枯草開(kāi)音合劑按公式換算后，33.2mg/ 100g生藥，0.9%生理鹽水稀釋為4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）。由實(shí)驗(yàn)組四人協(xié)作完成，共灌胃30天。控制室溫在18～22℃，定時(shí)清潔籠具，充足供應(yīng)大鼠飼料和水。

④制作標(biāo)本：灌胃30天后處死大鼠，使用10%水合氯醛3ml/100g體重的量進(jìn)行腹腔注射，3～5分鐘后大鼠死亡，在耳顯微內(nèi)窺鏡下使用耳顯微咬鉗取出雙側(cè)聲帶標(biāo)本，用10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋程序制作4μm石蠟連續(xù)切片，進(jìn)行HE染色，觀(guān)察組織充血、間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織增生等指標(biāo)，按其嚴(yán)重程度分為四個(gè)等級(jí)：-（未出現(xiàn)）、＋（輕度）、＋＋（中度）、＋＋＋（重度）。

⑤統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS21.0軟件進(jìn)行，兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

各組大鼠性別、體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。A組及D組各有一只大鼠因操作失誤死亡。1組織充血指標(biāo)，見(jiàn)表1。

表1 空白對(duì)照組及模型對(duì)照組組織充血指標(biāo)（n，%）

表1所示為A組和B組在聲帶充血指標(biāo)方面的秩和檢驗(yàn)，結(jié)果提示兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001），說(shuō)明在聲帶組織充血方面造模成功。

表2 模型對(duì)照組及不同濃度藥物組組織充血指標(biāo)（n，%）

由表2可知，四組在組織充血方面經(jīng)秩和檢驗(yàn)，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＝0.015＜0.05），說(shuō)明夏枯草開(kāi)音合劑能緩解慢喉喑聲帶組織充血狀況。且在本實(shí)驗(yàn)中的3種藥物濃度中，隨著藥物濃度增加，治療效果越好。

2 聲帶水腫指標(biāo)

表3 空白對(duì)照組及模型對(duì)照組聲帶水腫指標(biāo)（n，%）

表3所示為A組和B組在聲帶水腫指標(biāo)方面的秩和檢驗(yàn)，結(jié)果提示兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001），說(shuō)明在聲帶組織水腫方面造模成功。

表4 模型對(duì)照組及不同濃度藥物組聲帶水腫指標(biāo)（n，%）

由表4為四組在聲帶水腫方面的秩和檢驗(yàn)，結(jié)果顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001），說(shuō)明夏枯草開(kāi)音合劑能有效緩解血瘀痰凝型慢喉喑聲帶組織水腫，且在此3種藥物濃度中，隨著濃度增加，治療效果越好。

3 炎細(xì)胞浸潤(rùn)指標(biāo)

表5 空白對(duì)照組及模型對(duì)照組炎細(xì)胞浸潤(rùn)指標(biāo)（n，%）

表5為兩組在炎細(xì)胞浸潤(rùn)指標(biāo)方面的秩和檢驗(yàn)，差異具體統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.001＜0.05），說(shuō)明動(dòng)物造模造成了大鼠聲帶的炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

表6 模型對(duì)照組及不同濃度藥物組炎細(xì)胞浸潤(rùn)指標(biāo)（n，%）

表6為四組炎細(xì)胞浸潤(rùn)指標(biāo)的秩和檢驗(yàn)，P＝0.032＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明夏枯草開(kāi)音合劑能有效治療大鼠慢喉喑聲帶的炎細(xì)胞浸潤(rùn)狀況，并且在本實(shí)驗(yàn)的3種藥物濃度范圍內(nèi)，隨著藥物濃度增加而療效越好。

表7 空白對(duì)照組及模型對(duì)照組聲帶組織增生指標(biāo)（n，%）

經(jīng)秩和檢驗(yàn)，P＜0.001，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明造模后大鼠聲帶組織增生。

表8 模型對(duì)照組及不同濃度藥物組聲帶組織增生指標(biāo)（n，%）

表9表明，在改善聲帶組織增生方面夏枯草開(kāi)音合劑有顯著療效（P＜0.001），此療效隨著藥物濃度增高而提高。

各組大鼠聲帶病理切片結(jié)果如下圖。

圖1 A組大鼠聲帶病理標(biāo)本

圖2 B組大鼠聲帶病理標(biāo)本

圖3 E組大鼠聲帶病理標(biāo)本

圖4 D組大鼠聲帶病理標(biāo)本

圖5 C組大鼠聲帶病理標(biāo)本

討論

慢喉喑相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的慢性喉炎，及聲帶小結(jié)和聲帶息肉等嗓音疾病。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其發(fā)病主要是由發(fā)聲過(guò)度或者用聲不當(dāng)、大量吸入有害氣體以及呼吸道疾病長(zhǎng)期刺激使喉部黏膜血管擴(kuò)張而成[4，5]。西醫(yī)多采用抗生素加激素治療。但慢性喉炎很少有細(xì)菌感染，采用抗生素治療不能起到很好的治療效果，反而大多數(shù)抗生素對(duì)人體有副作用，危害人體健康[6]，采用類(lèi)固醇激素靜脈注射和口服治療慢性喉炎，此類(lèi)藥物在患者聲帶中濃度低，不能起到很好的治療效果，且長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生一些副作用[7]，因此，臨床上更傾向于使用療效確切、副作用低的中藥制劑。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢喉喑病因病機(jī)較為復(fù)雜，多責(zé)之陰虛、氣虛、痰濁、淤血?！端貑?wèn)》中有“五邪所亂，搏陰則為喑。”“中盛臟滿(mǎn)，氣勝傷恐者，聲如從室中言，是中氣之濕也。”等記載，認(rèn)為喑啞與陰虛、痰濁有關(guān)?！秱浼鼻Ы鹨健?“補(bǔ)肺湯，治肺氣不足，咳逆短氣，寒從背起，口中如含霜雪，語(yǔ)無(wú)音聲而渴，舌本干燥方?！敝赋龇螝馓摀p致喑啞。及至明代，樓英所著《醫(yī)學(xué)綱目》中才首次提出“喉喑”病名?！蹲C治準(zhǔn)繩·雜病·第五冊(cè)》“肺間邪氣，胸中積血作痛，失音”，首次提出了淤血致喑?！毒霸廊珪?shū)·卷二十八》認(rèn)為：“五臟之病皆能為喑”?！班硢≈?，當(dāng)知虛實(shí)。實(shí)者，其病在標(biāo)，因竅閉而喑也；虛者，其病在本，因內(nèi)奪而喑也?！钡於撕磬场敖饘?shí)不鳴”、“金破不鳴”的理論基礎(chǔ)。清朝《臨證指南醫(yī)案·卷二》說(shuō)：“發(fā)聲之本在于腎，其標(biāo)則在乎肺。病有虛實(shí)，由咳嗽而起者居多?；蚍斡性锘?，外感寒邪，火氣郁而喑者；有肺金燥甚，木火上炎，咽干喉痹而喑者；有風(fēng)熱痰涎，壅遏肺竅而喑者；有嗔怒號(hào)叫，致傷會(huì)厭者；亦有龍相之火上炎，凌爍肺金，久咳不已而喑者；有內(nèi)奪而厥，則為喑痱，此腎虛也?！盵8]提出了肺陰虛、心火灼肺、肺腎陰虛發(fā)為喑啞的觀(guān)點(diǎn)。導(dǎo)師郭裕教授從慢喉喑患者聲帶充血、室?guī)Х屎裨錾炔±砀淖冋J(rèn)為喑啞最常見(jiàn)的病因病機(jī)是氣滯血瘀痰凝，這與現(xiàn)代名老中醫(yī)干祖望老先生的觀(guān)點(diǎn)不謀而合。針對(duì)這一病因病機(jī)，郭裕教授自創(chuàng)夏枯草開(kāi)音合劑來(lái)治療慢喉喑，其藥物組成為：三棱、莪術(shù)、桃仁、紅花、葛根、山楂、半夏、陳皮、茯苓、桔梗、夏枯草、海蛤殼、威靈仙、胖大海。方中君藥三棱、莪術(shù)、桃仁、紅花、山楂活血化瘀；臣藥夏枯草、半夏、陳皮、茯苓、祛痰消腫；佐以海蛤殼、威靈仙軟堅(jiān)散結(jié)；胖大海、桔梗、葛根利咽開(kāi)音，引藥上行為使，全方共奏活血化瘀、祛痰消腫、軟堅(jiān)散結(jié)、利咽開(kāi)音之功。在臨床應(yīng)用中，夏枯草開(kāi)音合劑治療慢喉喑取得了較好療效，為進(jìn)一步推廣應(yīng)用，并為進(jìn)一步市場(chǎng)化奠定基礎(chǔ)我們補(bǔ)充研究夏枯草開(kāi)音合劑治療慢喉喑藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

在國(guó)內(nèi)研究中，大多數(shù)學(xué)者采用更為方便直觀(guān)的家兔或狗進(jìn)行聲帶病變實(shí)驗(yàn)研究，但狗和家兔聲帶與人類(lèi)聲帶存在較大差異，且價(jià)格較為昂貴，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，造模困難等導(dǎo)致觀(guān)察周期過(guò)長(zhǎng)[9]。Tateya Tetal等[10]研究表明大鼠聲帶與人類(lèi)聲帶結(jié)構(gòu)更為相似，且大鼠生長(zhǎng)周期短，價(jià)格低廉，較狗和家兔具有明顯的優(yōu)勢(shì)，故本實(shí)驗(yàn)采用大鼠進(jìn)行慢喉喑實(shí)驗(yàn)研究。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)大鼠慢喉喑造模成功的標(biāo)準(zhǔn)，但有研究表明,喉鏡檢查結(jié)果可作為慢性喉炎血瘀痰凝證癥候診斷的客觀(guān)依據(jù)[11]，血瘀痰凝證慢性喉炎聲帶喉鏡主要表現(xiàn)為聲帶黏膜腫脹、慢性充血，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)大鼠聲帶動(dòng)物模型建立方法進(jìn)行大鼠慢喉喑建模[12]，并于造模后第三天內(nèi)窺鏡檢查大鼠聲帶，聲帶充血、水腫，符合血瘀痰凝型慢性喉炎的診斷。

在本實(shí)驗(yàn)中，充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、組織增生四個(gè)指標(biāo)A組和B組對(duì)比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明造模成功。從數(shù)據(jù)看，夏枯草開(kāi)音合劑對(duì)聲帶充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、組織增生指標(biāo)的療效有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且在本實(shí)驗(yàn)采用的3種藥物濃度范圍內(nèi)，療效隨著藥物濃度增高而提高，說(shuō)明在一定濃度范圍內(nèi)，隨著藥物濃度增加，療效更好。因此我們認(rèn)為夏枯草開(kāi)音合劑對(duì)血瘀痰凝型慢喉喑具有確切的療效。

1 郭裕,馬鳳梅,王麗華.夏枯草開(kāi)音合劑治療慢性喉炎40例臨床研究[J].河北中醫(yī),2012,34(3):337-339.

2 郭裕,馬鳳梅,王麗華.夏枯草開(kāi)音合劑治療慢性喉炎的臨床研究[A].世界中聯(lián)耳鼻喉口腔專(zhuān)業(yè)委員會(huì)換屆大會(huì)及第三次學(xué)術(shù)年會(huì)暨中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)耳鼻喉科分會(huì)第十七次學(xué)術(shù)交流會(huì)暨廣東省中醫(yī)及中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)耳鼻喉科學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C].2011年.

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（收稿：2016-12-01）

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2017.01.006

上海市博士點(diǎn)基金項(xiàng)目（JX007301）

1 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院耳鼻咽喉科

郭裕,主任醫(yī)師.Email:guoyilun007@sina.com