張 茜，夏介仁，李德蕾，張坤蕾，白茹燕，胡 蓉，楊云慧

(云南師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650500)

基于Au納米顆粒/還原氧化石墨烯C-反應(yīng)蛋白免疫傳感器的研制

張 茜，夏介仁，李德蕾，張坤蕾，白茹燕，胡 蓉*，楊云慧*

(云南師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650500)

采用還原氧化石墨烯-金納米顆粒(RGO-Au NPs)作為免疫傳感器的固定基質(zhì)，將C-反應(yīng)蛋白(CRP)抗體固定在玻碳電極表面，用蒽醌二羧酸作為標(biāo)記物，制成夾心型的CRP免疫傳感器。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，通過示差脈沖伏安法對(duì)CRP的含量進(jìn)行檢測(cè)。該傳感器在0.25～100 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.08 ng/mL，線性系數(shù)為0.997。該傳感器為C-反應(yīng)蛋白的檢測(cè)提供了一種新的手段。

夾心型免疫傳感器；C-反應(yīng)蛋白(CRP)；還原氧化石墨烯；電化學(xué)

進(jìn)入新世紀(jì)以來(lái)，心血管疾病嚴(yán)重危害人類的身體健康。我國(guó)心血管疾病的發(fā)病率和死亡率逐年增加。近10年來(lái)，研究表明C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein)直接參與各種炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)病機(jī)理。該蛋白已成為心血管疾病很重要的預(yù)示因子和危險(xiǎn)因子[1]，與心血管疾病具有很好的相關(guān)性[2]。

CRP是由肝細(xì)胞合成的一種急性蛋白，當(dāng)受到炎癥的刺激或細(xì)菌感染時(shí)，其值會(huì)在受刺激4～6 h后開始升高，每隔8 h升高1倍，一般36～50 h達(dá)到峰值。隨著炎癥的恢復(fù)，CRP值會(huì)不斷降低[3]。人體中正常的CRP具有一定的生理作用，可增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力[4]。以往，由于檢測(cè)CRP的方法比較落后，易產(chǎn)生假陰性和假陽(yáng)性結(jié)果，在很大程度上影響了它在臨床上的應(yīng)用價(jià)值，故導(dǎo)致其臨床作用被弱化。近年來(lái)，隨著研究的進(jìn)展，快速、靈敏、簡(jiǎn)便、可靠的檢測(cè)CRP的方法已被建立，使得CRP在臨床上的應(yīng)用價(jià)值得以提升，其應(yīng)用領(lǐng)域也大大增加。

一般來(lái)說，人體內(nèi)CRP的正常值小于2.0 mg/L，但當(dāng)患有急性炎癥時(shí)其值會(huì)增大至1 000倍以上[5]。CRP水平值的高低可直接用來(lái)估測(cè)心血管疾病的嚴(yán)重程度。美國(guó)心臟協(xié)會(huì)和疾病控制預(yù)防中心提出3個(gè)級(jí)別的CRP濃度：小于1.0 mg/L為低危險(xiǎn)；1.0～3.0 mg/L之間為一般危險(xiǎn)；大于3.0 mg/L為極度危險(xiǎn)[6]。目前，研究發(fā)現(xiàn)CRP在臨床上具有很大的應(yīng)用價(jià)值：①CRP在血清中的水平可預(yù)測(cè)發(fā)熱性癌癥病人是細(xì)菌感染還是過濾性感染[7]。②C-反應(yīng)蛋白在血清中的水平可作為心肌梗塞、中風(fēng)和動(dòng)脈粥樣硬化的重要預(yù)測(cè)指示因子[8-9]。③如果CRP在血清中的值升高，患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增大，C-反應(yīng)蛋白與非小細(xì)胞肺癌具有很好的相關(guān)性[10]。

2011年，侯建國(guó)等[11]將多壁碳納米管(MCNTs)-硫堇(Thi)-Nafion復(fù)合物固定于絲網(wǎng)印刷電極(SPCE)表面作為基底電極，再利用磁性Au@Fe3O4標(biāo)記C-反應(yīng)蛋白酶抗體(HRP-anti CRP)，并將其吸附到基底電極表面，研發(fā)了可再生使用的信號(hào)放大的磁性納米修飾CRP電流型免疫傳感器，該傳感器的線性范圍為0.1～110 ng/mL，具有靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定性好、可再生使用等特點(diǎn)。2013年，Bryan等[6]利用金電極制備了一種無(wú)標(biāo)記型電化學(xué)生物傳感器用于檢測(cè)血液中的CRP，其線性范圍為0.5～50 nmol/L。楊云慧等[12]利用Pd/共價(jià)有機(jī)骨架材料(COF-LZUll)多孔復(fù)合材料將CRP抗體(anti-CRP)固定在玻碳電極表面，構(gòu)建了一種非標(biāo)記型C-反應(yīng)蛋白免疫傳感器。

碳納米材料是一種地球上較普遍而特殊的材料，具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)[13]。1991年，Iijima發(fā)現(xiàn)了碳納米管，其直徑在0.7～60 nm之間[14]。隨后，各種碳材料相繼被發(fā)現(xiàn)并被應(yīng)用于不同的領(lǐng)域。石墨烯作為一種碳二維材料，其碳原子的雜化方式為sp2[15]，在力學(xué)、熱學(xué)和電學(xué)方面均具有優(yōu)良的性能，被稱為一種理想的增強(qiáng)體[16]。目前，其制備方法主要有Boride法、Staudemnaier法和Hummer法等[17-18]。2004年，Geim和Novoselov成功地從石墨中分離出石墨烯，證明它可以單獨(dú)存在[19]。近年來(lái)，石墨烯被廣泛應(yīng)用于電化學(xué)方面的研究[20-22]，Ramesh等[23]將石墨烯的氧化物懸浮液負(fù)載到玻碳電極(GCE)和金電極的表面，分別形成氧化石墨烯修飾的電極，并用于研究一些典型的氧化還原電對(duì)的特性。李燾等[24]將納米石墨烯修飾到電極上，并采用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定了鹽酸氯丙嗪。

本文將氧化石墨烯通過電沉積的方法沉積到玻碳電極上變成還原氧化石墨烯，并負(fù)載Au納米顆粒，用蒽醌二羧酸作為標(biāo)記物，制成夾心型的免疫傳感器，從而實(shí)現(xiàn)了CRP的定量檢測(cè)。利用還原氧化石墨烯修飾電極，增加了電極的表面積，進(jìn)一步增加了導(dǎo)電性。本文構(gòu)建的基于還原氧化石墨烯(RGO)的傳感器具有準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

氯金酸(HAuCl4·4H2O，昆明鉑銳材料有限公司)；碳酸鈉、硝酸鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠)；濃硫酸(云南楊林工業(yè)開發(fā)區(qū)汕滇藥業(yè)有限公司)；高錳酸鉀、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(麥克林試劑網(wǎng))；尿素(Amresco公司)；石墨粉、無(wú)水乙醇(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)；C-反應(yīng)蛋白抗體(anti-CRP)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)(上海領(lǐng)潮生物科技有限公司)；30%過氧化氫(西隴化工股份有限公司)；牛血清蛋白(BSA)、磷酸緩沖溶液(PBS，pH 7.40)(美國(guó)Sigma公司)；蒽醌二羧酸(QC，梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司)；冰醋酸(成都化學(xué)試劑廠)；實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，所用水為二次蒸餾水。

示差脈沖伏安法(DPV)、電化學(xué)交流阻抗(EIS)均用CHI 660D電化學(xué)工作站(上海辰華儀器公司)測(cè)量；以飽和甘汞電極(SCE)為參比電極，玻碳電極(GCE)為工作電極，鉑電極為輔助電極；JEM2100透射電鏡(日本電子株式會(huì)社)；TGL16離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司)；CS501超級(jí)恒溫器(重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)；ST2200HP超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；DZF-6020型真空干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 氧化石墨烯的制備 在圓底燒瓶中分別加入1.5 g NaNO3和30 mL濃硫酸，在磁力攪拌器上攪拌直至完全溶解，隨后加入2 g石墨粉并攪拌均勻，在冰水浴攪拌的條件下緩慢加入9 g KMnO4，在該條件下攪拌2 h后，在室溫下攪拌5 d，然后緩慢加入200 mL 5%的H2SO4，在室溫下攪拌2 h，緩慢加入100 mL 3% 的H2O2,溶液變成亮黃色后在室溫下攪拌2 h，反應(yīng)完成后將溶液離心并棄去上清液，再用3%的H2SO4和0.5%的H2O2混合溶液洗滌離心3次，最后用水反復(fù)洗滌直至溶液呈中性，方可合成氧化石墨烯。

1.2.2 蒽醌二羧酸標(biāo)記的CRP抗體的制備 將2.0 mg NHS和1.3 mg EDC分散于1 mL H2O中混勻，之后加入1 mL 1 mg/mL QC充分混勻，在振蕩儀上攪拌一夜，離心，分散在PBS中，隨后逐滴加入10 μL 1 mg/mL的CRP抗體，振蕩20 h，在10 000 r/min的條件下離心5 min，棄去上清液后分散于1 mL PBS中，之后加入25 μL 10%的BSA，振蕩30 min，封閉非特異性位點(diǎn)，離心，最后分散于1 mL PBS中備用。

1.3 免疫傳感器的制備

圖1 免疫傳感器的制備流程Fig.1 Stepwise of fabricating immunosensor

圖2 氧化石墨烯的透射電鏡圖Fig.2 TEM image of GO

圖3 掃描速度對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響Fig.3 Effect of scan rates on response current of immunosensor scan rate(a-g)：20，40，60,80，100,120，140 mV/s; inset：the plot of peak current vs.v1/2

用金相砂紙將玻碳電極(Φ=3 mm)打磨干凈，將電極表面在不同粒徑大小的Al2O3粉末上拋光，再將電極分別用硝酸水溶液(1∶1)、無(wú)水乙醇、水各超聲洗滌5 min，自然風(fēng)干后，將電極放在氧化石墨烯溶液中通過電沉積的方法沉積，在-1.4～1.2 V范圍內(nèi)采用循環(huán)伏安法沉積，電極上得到RGO；取出電極用PBS緩沖液清洗干凈，放入HAuCl4溶液中用同樣的方法，在-0.8～2.0 V范圍內(nèi)采用循環(huán)伏安法沉積上Au納米顆粒。電沉積完成后用PBS溶液沖洗干凈，自然風(fēng)干，在電極表面滴加CRP抗體10.0 μL，置于冰箱中在4 ℃條件下過夜。將已修飾好CRP抗體的玻碳電極用PBS緩沖液沖洗3次，自然晾干，在電極上滴加10 μL 1%的BSA溶液，將電極放在恒溫箱中(溫度為37 ℃)封閉1 h。封閉好的電極用PBS溶液沖洗3次，自然晾干后，用于CRP的測(cè)定。CRP 免疫傳感器的制備流程如圖1所示。

1.4 檢測(cè)方法

在該免疫傳感器上滴加不同濃度的CRP抗原，將電極放在恒溫箱中(溫度為37 ℃)培育，培育完之后取出并用PBS沖洗干凈，自然晾干。然后滴加10.0 μL蒽醌二羧酸標(biāo)記的CRP抗體，置于上述恒溫箱中培育。之后取出并用PBS沖洗干凈，自然晾干。該傳感器作為工作電極，與鉑電極、甘汞電極組成三電極系統(tǒng)，置于pH值為6.5的醋酸緩沖溶液中，通過示差脈沖伏安法(DPV)進(jìn)行測(cè)定，得到DPV曲線，根據(jù)傳感器響應(yīng)電流值與CRP濃度成正比的關(guān)系，實(shí)現(xiàn)對(duì)CRP的定量測(cè)定。每次測(cè)定完后用4 mol/L尿素洗脫30 min，用PBS緩沖液洗干凈，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)過程。

2 結(jié)果與討論

2.1 氧化石墨烯的微觀形貌

對(duì)合成的氧化石墨烯材料進(jìn)行透射電鏡(TEM)表征，如圖2所示，可以看出該材料是一種層狀結(jié)構(gòu),片層中存在褶皺，說明氧化石墨烯的層數(shù)很少。表面非常光滑，呈透明的薄片狀。

2.2 氧化還原峰電流與掃描速度的關(guān)系

圖4 不同修飾電極界面的交流阻抗行為Fig.4 EIS curves of different modified electrodea：bare GCE；b:RGO/GCE;c:Au/RGO/GCE；d：anti-CRP/BSA/anti-CRP /Au/RGO /GCE；e：CRP/anti-CRP/BSA/anti-CRP/Au/RGO/GCE；f：labeled anti-CRP/CRP/BSA/anti-CRP/Au/RGO/GCE

圖5 pH值對(duì)免疫傳感器響應(yīng)電流的影響Fig.5 Effect of pH value on response of CRP immunosensor

為考察QC-labeled anti-CRP/CRP/anti-CRP/RGO/GCE免疫傳感器的電化學(xué)行為，實(shí)驗(yàn)考察了掃描速度對(duì)氧化還原峰電流的影響，當(dāng)掃描速度在20～140 mV/s 范圍內(nèi)變化時(shí)，傳感器在HAc-NaAc緩沖溶液(pH 5.5)中的循環(huán)伏安曲線如圖3所示?？梢钥闯觯趸搴瓦€原峰電流隨著掃描速度的增大而增大，且氧化還原峰電流與掃描速度的平方根成正比，說明電流受擴(kuò)散控制。

2.3 不同修飾電極界面的交流阻抗行為

圖4為不同修飾電極界面在5 mmol/L[Fe(CN)6]3-/4-溶液中的交流阻抗行為。圖中曲線a為裸玻碳電極(GCE)的阻抗曲線，可以看出該電極對(duì)電子傳遞幾乎無(wú)阻礙作用，只受擴(kuò)散控制；曲線b為修飾了RGO電極的交流阻抗圖，其電阻值增大，說明RGO成功修飾在電極上；曲線c為Au/RGO修飾電極的交流阻抗圖，電阻值減小，說明金納米顆粒的導(dǎo)電性良好；曲線d為anti-CRP/Au/RGO修飾電極的交流阻抗圖，與曲線c相比其電阻值明顯增大(Rct=1 100 Ω)，說明抗體已固定在電極表面，從而阻礙了[Fe(CN)6]3-/4-電子的傳遞作用；曲線e為anti-CRP/Au/RGO修飾的電極在培育了20 ng/mL 的CRP抗原后的交流阻抗曲線，其阻抗明顯增大(Rct=1 800 Ω)，說明抗原和抗體間發(fā)生了特異性結(jié)合，導(dǎo)致阻抗增大，進(jìn)一步阻礙了[Fe(CN)6]3-/4-電子的傳遞；曲線f為QC labeled anti-CRP/CRP/anti-CRP/RGO/GCE免疫傳感器的阻抗曲線，加了標(biāo)記的抗體后，標(biāo)記抗體與抗原進(jìn)一步特異性結(jié)合，使得阻抗值進(jìn)一步增大(Rct=3 500 Ω)，說明電極修飾膜對(duì)電子傳遞的阻礙作用增強(qiáng)。

2.4 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

2.4.1 緩沖溶液pH值對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響 緩沖溶液的pH值會(huì)影響蒽醌二羧酸的氧化還原峰電流，從而進(jìn)一步影響免疫傳感器的靈敏度，本實(shí)驗(yàn)考察了不同pH值的HAc-NaAc緩沖溶液對(duì)標(biāo)記抗體材料中QC的氧化峰電流響應(yīng)的影響。如圖5所示，當(dāng)pH值從4.5增至5.5時(shí)，氧化峰電流隨之增加，繼續(xù)增加pH值時(shí)，QC的氧化峰電流反而減小，當(dāng)pH值為5.5時(shí)，免疫傳感器的電流響應(yīng)值最大。因此實(shí)驗(yàn)選擇pH值為5.5的HAc-NaAc緩沖溶液作為最佳測(cè)試底液。

2.4.2 固定抗體濃度對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響 為了考察固定抗體濃度對(duì)該免疫傳感器響應(yīng)電流的影響，本實(shí)驗(yàn)在電極表面固定不同濃度的抗體(5，10，20，30，40，50 μg/mL )制備傳感器并測(cè)其電流響應(yīng)值，結(jié)果顯示，響應(yīng)電流隨著固定抗體濃度的增加而增大，并在固定抗體濃度為20 μg/mL時(shí)達(dá)到最大值，之后響應(yīng)電流隨著固定抗體濃度的增加反而減小。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇最佳固定抗體濃度20 μg/mL。

2.4.3 抗原培育時(shí)間對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響 固定20 μg/mL抗體和20 μg/mL 抗原，改變抗原培育時(shí)間，通過測(cè)定響應(yīng)電流值的大小，考察了抗原培育時(shí)間對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響。結(jié)果顯示，隨著培育時(shí)間的延長(zhǎng)，響應(yīng)電流逐漸增大，45 min時(shí)達(dá)到最大值，之后電流值隨培育時(shí)間的增長(zhǎng)反而下降。因此選擇最佳的抗原培育時(shí)間為45 min。

圖6 免疫傳感器對(duì)不同濃度CRP的響應(yīng)曲線Fig.6 DPV response curves of immunosensor incubated with different concentration of CRP CRP concentration(a-h):0.25,0.5，2.5，5.0，10.0，25.0，50.0,100 ng/mL;inset:calibration curve for the CRP immunosensor

圖7 CRP電化學(xué)免疫傳感器的選擇性Fig.7 Selectivity of the CRP electrochemical immunosensor

2.4.4 標(biāo)記抗體的培育時(shí)間對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響 固定20 μg/mL抗體和20 μg/mL抗原，同時(shí)保持抗體抗原結(jié)合時(shí)間不變，改變標(biāo)記抗體培育時(shí)間，測(cè)定響應(yīng)電流值，考察了標(biāo)記抗體的培育時(shí)間對(duì)免疫傳感器響應(yīng)信號(hào)的影響。結(jié)果顯示，隨著標(biāo)記抗體培育時(shí)間的延長(zhǎng)，響應(yīng)電流先增大后略有減小，在45 min時(shí)電流出現(xiàn)峰值。所以實(shí)驗(yàn)選擇45 min為標(biāo)記抗體的最佳培育時(shí)間。

2.5 傳感器的校正曲線

為了獲得該傳感器對(duì)不同濃度CRP的響應(yīng)工作曲線，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別培育不同濃度CRP的傳感器，并對(duì)其響應(yīng)電流值進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖6所示。該傳感器在0.25～100 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性響應(yīng)，其線性方程為I(μA)=15.37lgc+38.69，相關(guān)系數(shù)為0.997；靈敏度較高，根據(jù)3σ規(guī)則，其檢出限為0.083 ng/mL。

2.6 免疫傳感器的選擇性

為考察該免疫傳感器的選擇性，本實(shí)驗(yàn)選擇200 ng/mL的甘氨酸(Gly)、1%牛血清蛋白(BSA)和200 ng/mL丙氨酸(Ala)作為干擾物質(zhì)測(cè)定其響應(yīng)電流值，通過與20 ng/mL CRP的響應(yīng)電流值作對(duì)比來(lái)考察傳感器的抗干擾能力。從圖7可看出，相同的實(shí)驗(yàn)條件下甘氨酸、丙氨酸和BSA的響應(yīng)電流均遠(yuǎn)小于CRP的響應(yīng)電流。說明甘氨酸、丙氨酸和BSA對(duì)CRP檢測(cè)的干擾較小，進(jìn)一步說明該傳感器對(duì)CRP具有較高的選擇性。

2.7 回收率的測(cè)定

為了考察該傳感器可否用于真實(shí)樣品中CRP的檢測(cè)，采用標(biāo)準(zhǔn)加入法將3種不同濃度的CRP抗原分別加至稀釋的血清樣品中，測(cè)定其回收率。由表1可看出，3種加標(biāo)濃度的回收率在(100±10)%以內(nèi)，平均回收率為101.5%，且3次測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在5%以內(nèi)，說明該傳感器用于真實(shí)樣品中CRP的測(cè)定具有一定的可行性。

表1 真實(shí)血樣中CRP回收率的測(cè)定Table 1 Recoveries of CRP in real human serum

2.8 穩(wěn)定性的檢測(cè)

在相隔12 d后，用該傳感器在相同實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)CRP進(jìn)行檢測(cè)，響應(yīng)電流值下降了6.4%；相隔25 d后在相同的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)CRP，響應(yīng)電流值下降了7.7%。說明該傳感器的穩(wěn)定性較好，在真實(shí)樣品中CRP含量的檢測(cè)方面具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

2.9 與其他CRP檢測(cè)方法的對(duì)比

將本方法與其它檢測(cè)CRP的方法進(jìn)行對(duì)比(如表2)，本文所制的傳感器具有較高的靈敏度和較低的檢出限。

表2 幾種檢測(cè)CRP方法的對(duì)比Table 2 The comparison of several detection methods of CRP

3 結(jié) 論

本文以AuNPs/RGO作為C-反應(yīng)蛋白抗體的固定基質(zhì)，采用蒽醌二羧酸標(biāo)記C-反應(yīng)蛋白抗體，制成夾心型的免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)CRP的定量檢測(cè)。利用還原氧化石墨烯修飾電極，增加了電極的表面積，進(jìn)一步增強(qiáng)了導(dǎo)電性。該傳感器具有選擇性好、靈敏度高、線性范圍寬、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，在測(cè)定血清樣品中的CRP方面具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

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Development of a C-Reactive Protein Immunosensor Based on Au Nanoparticles/Reduced Graphene Oxide

ZHANG Xi，XIA Jie-ren，LI De-lei，ZHANG Kun-lei，BAI Ru-yan，HU Rong*，YANG Yun-hui*

(College of Chemistry and Chemical Engineering，Yunnan Normal University，Kunming 650500，China)

In this paper，Au nanoparticles(Au NPs)/reduced graphene oxide(RGO) was used as the matrix of immunosensor to immobilize c-reactive protein(CRP) antibody on the surface of glassy carbon electrode.A sandwich immunosensor was constructed using quinone dicarboxylic acid as tag.Under the optimal experiment conditions，the concentration of CRP was detected by differential pulse voltammetry.The linear range is 0.25-100 ng/mL with a detection limit of 0.08 ng/mL and a correlation coefficient of 0.997.This immunosensor provides a new simple means for the determination of c-reactive protein.

sandwich immunosensor；c-reactive protein(CRP)；reduced graphene oxide；electrochemistry

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.03.009

2016-09-12；

2016-11-10

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(21465026，21165023)

O657.1；O629.73

A

1004-4957(2017)03-0349-06

*通訊作者：楊云慧，博士，教授，研究方向：電分析化學(xué)與生物傳感器，Tel：0871-65941086，E-mail：yyhui2002@aliyun.com 胡 蓉，博士，講師，研究方向：生物傳感器，Tel：0871-65941086，E-mail：hudierong_168@163.com