李 恩，汪 濤，張麗華，簡立國，孫利強，牛少輝#

1)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科 鄭州 450014 2)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院干部病房 鄭州 450014

急性冠脈綜合征患者血清miRNA-208與血小板功能的關(guān)系*

李 恩1)，汪 濤2)，張麗華1)，簡立國1)，孫利強1)，牛少輝1)#

1)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科 鄭州 450014 2)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院干部病房 鄭州 450014

#通信作者，男，1977年11月生，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：冠心病的預(yù)防與治療，E-mail:ln1025asdfgh@sohu.com

急性冠脈綜合征；miRNA-208；血小板分布寬度；平均血小板體積

目的：探討急性冠脈綜合征(ACS)患者血清miRNA-208與血小板功能的關(guān)系。 方法：選取2014年1月至2015年9月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的ACS患者60例(ACS組)和非ACS患者20例(對照組)，根據(jù)診斷結(jié)果將ACS組進(jìn)一步分為心肌梗死組(n=32)和不穩(wěn)定心絞痛組(n=28)。入院即刻對3組患者進(jìn)行靜脈血液采集，測定血小板計數(shù)(PLT)、血小板分布寬度(PDW)及平均血小板體積(MPV)；利用實時熒光定量PCR法測定血清miRNA-208。結(jié)果：與對照組比較，心肌梗死組和不穩(wěn)定心絞痛組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與不穩(wěn)定心絞痛組比較，心肌梗死組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ACS患者血清miRNA-208與PDW和MPV呈正相關(guān)(r=0.828、0.766,P<0.05)。結(jié)論：ACS患者血清miRNA-208與血小板活化密切相關(guān)， miRNA-208參與了血小板活化的調(diào)控。

miRNA是一類生物進(jìn)化過程中高度保守的非編碼小分子RNA，其并不編碼蛋白質(zhì)，但通過對基因表達(dá)、蛋白質(zhì)翻譯及靶RNA的穩(wěn)定性進(jìn)行調(diào)控從而發(fā)揮作用。近年來，miRNA在心血管疾病領(lǐng)域的研究成為熱點，研究[1]證實miRNA-208屬于心臟特異性的miRNA，它可以調(diào)控心血管系統(tǒng)細(xì)胞的生成、發(fā)育、損傷修復(fù)等生理和病理過程。急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)的病理基礎(chǔ)是繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成，該類患者伴隨血小板的激活、聚集。該研究檢測了ACS患者血清中miRNA-208的表達(dá)情況以及血小板計數(shù)(PLT)、血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)、平均血小板體積(mean platelet volume，MPV)，以探討ACS患者miRNA-208與血小板功能的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象及分組 選取2014年1月至2015年9月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的ACS患者60例作為ACS組，其中男37例，女23例，年齡50～72歲；不穩(wěn)定心絞痛28例，心肌梗死32例(ST段抬高型心肌梗死26例，非ST段抬高型心肌梗死6例)。另選取同期收治的非ACS住院患者20例作為對照組，其中男12例，女8例，年齡48～70歲；穩(wěn)定型心絞痛患者15例，X綜合征患者3例，心血管神經(jīng)官能癥2例。根據(jù)診斷結(jié)果將ACS組進(jìn)一步分為心肌梗死組(n=32)和不穩(wěn)定心絞痛組(n=28)。入選標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)WHO規(guī)定的ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，患者均常規(guī)行冠狀動脈造影、ECG、動態(tài)心電圖檢查，均接受正規(guī)藥物治療，并根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果行PCI術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并腦血管意外史，凝血疾病和血小板減少癥病史，血液免疫系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重心律失常，嚴(yán)重感染性疾病，肝、腎功能衰竭，惡性腫瘤。所有研究資料的獲取均取得患者同意，并通過鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會審查。

1.2 血清PLT、PDW、MPV和miRNA-208的檢測

入院即刻對各組患者進(jìn)行靜脈血液采集，分離血清，測定PLT、PDW及MPV。利用實時熒光定量PCR法測定血清miRNA-208，用Trizol試劑提取血液中的總RNA，取2 μL總RNA用隨機引物反轉(zhuǎn)錄成15 μL cDNA，取標(biāo)準(zhǔn)樣品2 μL，加試劑SYBR Premix Ex TaqTM，在GeneAmp 5700 Sequence Detector 儀進(jìn)行擴增，其產(chǎn)物用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。用目的基因的定量結(jié)果除以管家基因(GAPDH)的定量結(jié)果就可以得到目的基因的相對表達(dá)量。引物序列如下：miRNA-208上游引物5’-CTTTTGGCCCGGGTTATAC-3’，下游引物5’-CTGACATCCTCTAGGCTGG-3’；GAPDH上游引物5’-GCTGATGCCCCCATGTTTG-3’，下游引物 5’-GGGTGGTGGACCTCATGGC-3’。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 11.5進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。3組間miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗；ACS組和對照組一般情況的比較采用兩獨立樣本的t檢驗或χ2檢驗；ACS患者miRNA-208與PLT、PDW、MPV的相關(guān)性采用直線相關(guān)進(jìn)行分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ACS組與對照組一般情況的比較 結(jié)果見表1。由表1可知，2組的年齡、性別構(gòu)成、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、體重指數(shù)(BMI)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(Scr)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 ACS組與對照組一般情況的比較

2.2 各組血清miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比較 與對照組比較，心肌梗死組和不穩(wěn)定心絞痛組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與不穩(wěn)定心絞痛組比較，心肌梗死組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；各組血清PLT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表2)。

2.3 ACS患者miRNA-208與PLT、PDW、MPV的相關(guān)性分析 ACS患者miRNA-208與PLT無關(guān)(r=-0.223,P=0.086);miRNA-208與PDW和MPV呈正相關(guān)(r=0.828、0.766,P<0.05)。

表2 各組血清miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比較

*：與對照組比較，P<0.05；#：與心肌梗死組比較，P<0.05。

3 討論

ACS是冠心病患者冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定破裂所致的一系列臨床綜合征，分為心肌梗死和不穩(wěn)定型心絞痛，嚴(yán)重危害人類健康[2-3]。ACS的病理基礎(chǔ)是繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成，血栓在形成過程中伴隨著血小板的激活、黏附、聚集。血栓形成的過程消耗大量血小板，從而使血小板數(shù)量減少，進(jìn)而刺激骨髓巨核細(xì)胞加快血小板生成[4]。血小板在ACS發(fā)展過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，血小板既能促進(jìn)斑塊的形成和破裂，在斑塊破裂后又迅速聚集，促進(jìn)血栓形成。血小板的體積大小反映了其功能和活化狀態(tài)[5]，活化狀態(tài)的血小板體積增大。MPV是血小板活化的一個重要指標(biāo)，MPV的大小反映了骨髓中巨核細(xì)胞增生與血小板生成的情況，其與血循環(huán)中血小板的壽命、超微結(jié)構(gòu)及功能密切相關(guān)。年輕血小板的MPV大，富含蛋白、酶及血小板顆粒，其活性、聚集性強，隨著血小板存活時間的延長，顆粒物質(zhì)不斷脫出，MPV逐漸變小，活性減弱[6]。有研究[7]發(fā)現(xiàn)，冠心病患者M(jìn)PV變大，血小板活化增強，參與冠狀動脈血栓形成。還有文獻(xiàn)[8]指出，MPV與血小板活性呈正相關(guān)，伴隨著MPV的升高，血小板活性增強。PDW 是反映血液內(nèi)血小板容積變異的參數(shù)，以測得的血小板體積大小的變異系數(shù)表示。ACS發(fā)生時，血小板大量活化，大體積血小板增多，血小板體積差異程度增大，導(dǎo)致PDW 增大[9]。

miRNA是一類生物進(jìn)化過程中高度保守的非編碼小分子RNA，其并不編碼蛋白質(zhì)，但通過對基因表達(dá)、蛋白質(zhì)翻譯及靶RNA的穩(wěn)定性的調(diào)控，參與到許多重要的生物過程中。miRNA-208是心臟特異性的miRNA，它可以調(diào)控心血管系統(tǒng)細(xì)胞的生成、發(fā)育、損傷修復(fù)等生理和病理過程，并且在血液中含量穩(wěn)定[1]。有研究[10]發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死后miRNA-208在心臟中明顯升高，且升高的時間變化規(guī)律與cTnI相似。還有研究[11]發(fā)現(xiàn)，相較miRNA-1、133、499，miRNA-208具有更高的心臟特異性，其在正常心肌中無表達(dá)。

該研究旨在探討ACS患者血清miRNA-208表達(dá)情況與血小板功能之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，與對照組比較，心肌梗死組和不穩(wěn)定心絞痛組血清miRNA-208、PDW、MPV明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與不穩(wěn)定心絞痛組比較，心肌梗死組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；各組血清PLT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。另外，ACS患者miRNA-208與PDW和MPV呈正相關(guān)。該研究中作者發(fā)現(xiàn)，隨著miRNA-208的升高，PDW和MPV均升高。PDW、MPV是反映血小板活化的重要指標(biāo)，因此作者認(rèn)為， miRNA-208參與了血小板活化的調(diào)控，為ACS患者抗血小板治療提供了新的靶點。

綜上所述，作者認(rèn)為在ACS患者中，miRNA-208與血小板活化密切相關(guān)，參與了血小板活化的調(diào)控，其具體機制需進(jìn)一步研究探討。

[1]SATOH M,MINAMI Y,TAKAHASHI Y,et al.Expression of microRNA-208 is associated with adverse clinical outcomes in human dilated cardiomyopathy[J].J Card Fail,2010,16(5):404

[2]LI E,SUN LQ,DING TB,et al.miR-10a inhibits cardiac hypertrophy after myocardial infarction in mice by targeting HDAC4[J].Int J Clin Exp Pathol,2016,9(3):3203

[3]郭瑄,張春艷,王聰霞,等.非ST段抬高ACS患者血漿 sCD40L和Lp-PLA2水平對冠脈病變程度及危險性的評估價值[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2016,37(3):322

[4]牛少輝，張麗華，簡立國，等.平均血小板體積對回旋支病變的預(yù)測作用[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2013,22(7)：716

[5]RASOUL S，OTTERVANGER JP,DAMBRINK JH,et al.Are patients with non-ST elevation myocardial infarction undertreated?[J].BMC Cardiovasc Disord,2007,7:8

[6]NURKALEM Z,ALPER AT,ORHAN AL,et al.Mean platelet volume in patients with slow coronary flow and its relationship with clinical presentation[J].Turk Kardiyol Dern Ars,2008,36(6):363

[7]LIPPI G,FILIPPOZZI L,SALVAGNO GL,et al.Increased mean platelet volume in patients with acute coronary syndromes[J].Arch Pathol Lab Med,2009,133(9):1441

[8]BATH PM,BUTTERWORTH RJ.Platelet size: measurement, physiology and vascular disease[J].Blood Coagul Fibrinolysis,1996,7(2):157

[9]SHATTIL SJ,NEWMAN PJ.Integrins: dynamic scaffolds for adhesion and signaling in platelets[J].Blood,2004,104(6):1606

[10]JI X,TAKAHASHI R,HIURA Y,et al.Plasma miR-208 as a biomarker of myocardial injury[J].Clin Chem,2009,55(11):1944

[11]WANG GK,ZHU JQ,ZHANG JT,et al.Circulating microRNA: a novel potential biomarker for early diagnosis of acute myocardial infarction in humans[J].Eur Heart J,2010,31(6):659

(2016-08-19收稿 責(zé)任編輯姜春霞)

Relationship between serum miRNA-208 and platelet function in patients with acute coronary syndrome

LIEn1)，WANGTao2)，ZHANGLihua1)，JIANLiguo1)，SUNLiqiang1)，NIUShaohui1)

1)DepartmentofCardiovascularInternalMedicine,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014 2)CadreWard,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014

acute coronary syndrome;miRNA-208;platelet distribution width;mean platelet volume

Aim: To investigate the relationship between serum miRNA-208 and platelet function in patients with acute coronary syndrome(ACS). Methods: A total of 60 cases of ACS(ACS group) and 20 cases of non-ACS(control group) were collected,and the ACS group was further allocated into myocardial infarction group(AMI group,n=32) and unstable angina pectoris group(UA group,n=28). Platelet(PLT), platelet distribution width(PDW) and mean platelet volume(MPV) were measured. The serum miRNA-208 was measured by real-time fluorescence quantitative PCR method.Results: Compared with control group, the serum level of miRNA-208, PDW and MPV were significantly higher in the AMI group and the UA group(P<0.05).Compared with the UA group, the serum level of miRNA-208, PDW, MPV were significantly higher in the AMI group(P<0.05). In patients with ACS, the serum level of miRNA-208 was correlated with PDW and MPV(r=0.828,0.766,P<0.05).Conclusion: miRNA-208 is closely related to platelet activation and involves in the regulation of platelet activation in patients with ACS.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.02.020

*鄭州市普通科技攻關(guān)計劃項目 141PPTGG453；河南省高等學(xué)校重點科研項目 15A320019

R541.4