楊躍龍++++龔力民++++李菁+++++黃紹國(guó)

[摘要]目的 建立氣相色譜法測(cè)定復(fù)方樟腦醑中樟腦、薄荷腦、苯酚的含量的方法。方法 采用KB-WAX型毛細(xì)管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣為氮?dú)?，流速?.0 ml/min；氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）程序升溫，初始溫度為130℃，保持10 min，以5℃/min 的速率升溫至230℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測(cè)器溫度：250℃，外標(biāo)法測(cè)定。結(jié)果 樟腦、薄荷腦、苯酚能很好分離。樟腦、薄荷腦、苯酚的線性范圍分別為0.2029～1.6232 mg/ml （r=0.9993，n=9），0.1964～1.5712 mg/ml（r=0.9995，n=9），0.2074～1.6592 mg/ml （r=0.9999，n=9），平均回收率分別為99.43%（RSD=0.85%）、101.85%（RSD=0.84%）、101.45%（RSD=0.53%）。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方樟腦醑中樟腦、薄荷腦、苯酚的含量測(cè)定。

[關(guān)鍵詞]氣相色譜法；復(fù)方樟腦醑；樟腦；薄荷腦；苯酚

[中圖分類號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）02（c）-0096-04

Content determination of camphor，menthol and phenol in compound spiritus camphorae by gas chromatography

YANG Yue-long1 GONG Li-min2 LI Jing3▲ HUANG Shao-guo2▲

1.Huaihua Institute for Food and Drug Control in Hunan Province，Huaihua 418000，China；2.School of Pharmacy，Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410208，China；3.Hunan Medical College，Huaihua 418000，China

[Abstract]Objective To establish a method for the content determination of camphor，menthol and phenol in compound spiritus camphorae by gas chromatography.Methods The capillary column in KB-WAX type （30.00 m×0.32 mm×0.25 μm） was used.Nitrogen was selected as the carrier gas with a flow rate of 3.0 ml/min.The programmed-temperature conditions by flame ionization detector （FID） were to start at the initial temperature of 130℃ and keep for 10 min；to rise the temperature to 230℃ at 5℃/min and keep for 5 min.The inlet temperature was 200℃ and the temperature of detector was 250℃.It was determined by the external standard method.Results Camphor，menthol，phenol could be easily separated.The linearity ranges of camphor，menthol，and phenol were 0.2029-1.6232 mg/ml（r=0.9993，n=9），0.1964-1.5712 mg/ml（r=0.9995，n=9），and 0.2 074-1.6 592 mg/ml respectively.The average recoveries were 99.43%（RSD=0.85%），101.85%（RSD=0.84%） and 101.45%（RSD=0.53%） respectively.Conclusion The method is simple and easy to perform，high in sensitivity，and good in reproducibility，which can be used for the content determination of camphor，menthol and phenol in compound spiritus camphorae.

[Key words]Gas chromatography；Compound spiritus camphorae；Camphor；Menthol；Phenol復(fù)方樟腦醑是臨床長(zhǎng)期使用的一種療效優(yōu)良的醫(yī)院制劑，其主要成分為樟腦、薄荷腦、苯酚，具有局部止癢的功效。用于治療急、慢性皮炎。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較簡(jiǎn)單，沒(méi)有對(duì)其中的有效成分樟腦、薄荷腦與苯酚進(jìn)行定量檢測(cè)，無(wú)法控制藥品質(zhì)量，從而無(wú)法保證藥品療效。為有效控制本品質(zhì)量，根據(jù)本制劑的特點(diǎn)及其有效成分易揮發(fā)的特性，本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-8]用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方樟腦醑中樟腦、薄荷腦與苯酚的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

安捷倫7820A氣相色譜儀（安捷倫公司、自動(dòng)進(jìn)樣器、FID檢測(cè)器）；電子分析天平（梅特勒-托利多國(guó)際股份有限公司，型號(hào)：AB135-S）。

樟腦（中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110747-201409；純度：98.7%），薄荷腦（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110728-200509），苯酚（中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：100509-201203；純度：100.0%），乙醇（天津化學(xué)試劑研究所，色譜純），水為超純水（科室自制）。復(fù)方樟腦醑（湖南省懷化市第一人民醫(yī)院，批號(hào)：140624、140625、140626）。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：KB-WAX型石英毛細(xì)管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣：氮?dú)猓涣魉伲?.0 ml/min；柱溫：程序升溫，初始溫度為130℃，保持10 min，以5℃/min 的速率升溫至230℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）；檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣量：1 μl；分流比：10∶1[9-12]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取樟腦對(duì)照品、薄荷腦對(duì)照品、苯酚對(duì)照品約20 mg，置20 ml量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

精密量取本品5 ml，置100 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4陰性樣品溶液的制備

原方去掉樟腦、薄荷腦、苯酚后，按處方比例，照本品制備工藝制備陰性樣品。精密量取陰性樣品5 ml，置100 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為陰性樣品溶液。

2.5系統(tǒng)適用性

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定，樟腦、薄荷腦、苯酚保留時(shí)間分別為5.2、7.0、17.5 min，分離度均大于3.0，表明該色譜條件下系統(tǒng)適用性良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一批復(fù)方樟腦醑樣品（批號(hào)：140624）按樣品含量測(cè)定方法配制1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為1 μl，記錄峰面積，結(jié)果樟腦、薄荷腦、苯酚的RSD分別為0.41%、0.39%、0.36%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法進(jìn)樣精密度良好。

2.7 方法專屬性考察

取陰性樣品溶液，精密吸取續(xù)濾液1 μl，注入色譜儀，按“2.1”色譜條件下，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。試驗(yàn)結(jié)果表明，陰性樣品溶液在樟腦、薄荷腦、苯酚相應(yīng)位置無(wú)吸收峰出現(xiàn)，表明該方法專屬性良好。

2.8 線性關(guān)系考察

精密稱取樟腦對(duì)照品51.40 mg、薄荷腦對(duì)照品49.10 mg、苯酚對(duì)照品51.85 mg置25 ml量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0、2.0、5.0、6.0、8.0 ml置10 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述對(duì)照品溶液1 μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積（A）為橫坐標(biāo)X，濃度（C）為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[13-16]。得樟腦回歸方程：Y=0.000 021 7X-0.034 008 88，r=0.9991；薄荷腦回歸方程：Y=0.000 022 3 X-0.035 830 19，r=0.9992；苯酚回歸方程：Y=0.000 021 9 X-0.033 0571 1，r=0.9995；試驗(yàn)結(jié)果表明，樟腦濃度在0.2029～1.6232 mg/ml（r=0.9993，n=9），薄荷腦濃度在0.1964～1.5712 mg/ml（r=0.9995，n=9），苯酚濃度在0.2074～1.6592 mg/ml（r=0.9999，n=9）內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批復(fù)方樟腦醑樣品（批號(hào)：140624）按樣品含量測(cè)定方法配制6份，按照上述色譜條件測(cè)定，分別進(jìn)樣1 μl，注入色譜儀，記錄色譜圖。按回歸方程計(jì)算樟腦、薄荷腦、苯酚的含量，結(jié)果RSD分別為0.18%、0.32%、0.34%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.10穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批復(fù)方樟腦醑樣品（批號(hào)：140624）按樣品含量測(cè)定方法配制6份，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣1 μl，記錄峰面積，結(jié)果樟腦、薄荷腦、苯酚的RSD分別為0.36%、0.43%、0.42%。試驗(yàn)結(jié)果表明，本品溶液在放置24 h后測(cè)定，樟腦、薄荷腦、苯酚的峰面積基本無(wú)變化，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.11中間精密度試驗(yàn)

另一實(shí)驗(yàn)員第2天使用另一臺(tái)儀器，精密量取同一批號(hào)樣品6份，按照“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樟腦、薄荷腦、苯酚的RSD分別為0.60%、0.42%、0.50%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法中間精密度良好。

2.12準(zhǔn)確度試驗(yàn)

分別精密量取9份已知含量的樣品（批號(hào)：140624）約0.5 ml置20 ml量瓶中，平均分成3組，分別各加入混合對(duì)照品溶液（樟腦9.6805 mg/ml、薄荷腦9.7870 mg/ml、苯酚9.1980 mg/ml）0.8、1.0、1.2 ml，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。按上述氣相色譜條件，分別量取1 μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1～3。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.13 樣品含量測(cè)定結(jié)果

取3批不同批號(hào)的樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，見(jiàn)表4。

3討論

樟腦、薄荷腦、苯酚，具有局部止癢劑的功效，用于治療急、慢性皮炎，是復(fù)方樟腦醑中的有效成分，故本法選擇同時(shí)測(cè)定復(fù)方樟腦醑中樟腦、薄荷腦與苯酚的含量。由于本品為含乙醇的液體制劑，結(jié)合被測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，試驗(yàn)中比較乙醇、乙酸乙酯兩種稀釋溶劑，結(jié)果乙酸乙酯溶液略顯混濁，而乙醇則能將樣品溶液完全溶解，故最后選擇毒性較小的無(wú)水乙醇作為稀釋溶劑。

試驗(yàn)過(guò)程中曾分別嘗試使用極性柱、中等極性柱和非極性柱進(jìn)行樣品峰分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在極性柱（KB-WAX）中樟腦、薄荷腦、苯酚保留時(shí)間分別為5.2、7.0、17.5 min，分離效果好，能達(dá)到試驗(yàn)?zāi)康?，故選用極性柱（KB-WAX）進(jìn)行試驗(yàn)。在試驗(yàn)中曾參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-17]采用恒溫125℃、135℃、145℃、160℃和多種程序升溫方法，結(jié)果以初始溫度為130℃，保持10 min，以5℃/min 的速率升溫至230℃，保持5 min，三組分取得很好的分離效果，滿足系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)要求，故采用此程序升溫進(jìn)行含量測(cè)定。利用樣品與對(duì)照品保留時(shí)間一致，還可以同時(shí)對(duì)樟腦、薄荷腦、苯酚進(jìn)行氣相色譜鑒別。

本試驗(yàn)采用氣相色譜法同時(shí)對(duì)其揮發(fā)性成分樟腦、薄荷腦、苯酚進(jìn)行含量測(cè)定， 更能客觀地反映該復(fù)方制劑的質(zhì)量， 而且該結(jié)果證明了本法簡(jiǎn)便快速， 重復(fù)性良好， 回收率高， 建議可為復(fù)方樟腦醑的質(zhì)量控制提供檢測(cè)的新方法。

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（收稿日期：2016-12-29 本文編輯：顧雪菲）