李有恒++徐洪++曾+訓(xùn)

[摘要]目的 探討IMP3、Ki-67在胃腸胰神經(jīng)分泌腫瘤（GEP-NEN）中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法 收集我院及周邊地區(qū)自2010年1月～2016年10月確診的59例GEP-NEN，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)患者標(biāo)本中的IMP3、Ki-67表達(dá)情況，結(jié)合臨床病理特征，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 IMP3在GEP-NEN中陽(yáng)性率為81.36%（48/59），在不同腫瘤直徑、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同腫瘤分期與分級(jí)中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的表達(dá)差異沒(méi)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Ki-67在GEP-NEN中陽(yáng)性率為44.68%（26/59），在腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)及臨床分期中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；IMP3、Ki-67表達(dá)隨著腫瘤體積越大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)越高、臨床分期越晚陽(yáng)性率越高。結(jié)論 IMP3與Ki-67在GEP-NEN的表達(dá)可作為判斷患者預(yù)后的參考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用。

[關(guān)鍵詞]神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤；胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ mRNA結(jié)合蛋白3；細(xì)胞增殖核抗原

[中圖分類號(hào)] R735 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）02（c）-0015-04

Expression of IMP3 and Ki-67 in gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm and its relationship with clinicopathological features

LI You-heng XU Hong▲ ZENG Xun

Department of Pathology，Shekou People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518067，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of IMP3 and Ki-67 in gastrointestinalopancreatic neuroendocrine neoplasm （GEP-NEN） and its relationship with clinicopathological features.Methods 59 patients with GEP-NEN diagnosed from January 2010 to October 2016 in our hospital and other surrounding areas were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of IMP3 and Ki-67 in patients′ specimens.Clinical and pathological features were combined，and the results were statistically analyzed.Results The positive rate of IMP3 in GEP-NEN was 81.36% （48/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，different tumor stages and classifications were statistically significant （P<0.05）.There was no statistical significance in the expression of tumor in terms of whether there was distant metastasis or not （P>0.05）.The positive rate of Ki-67 in GEP-NEN was 44.68% （26/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，whether there was distant metastasis or not，different pathological grades and clinical stages were statistically significant （P<0.01）；the positive rate of the expression of IMP3 and Ki-67 was increased with larger tumor size，lymph node metastasis，higher pathological grades，and more advanced clinical stages.Conclusion The expression of IMP3 and Ki-67 in GEP-NEN may be one of the reference factors for determining patients′ prognosis.IMP3 may play an important role in the development and progression of GEP-NEN.

[Key words]Neuroendocrine neoplasm；Insulin-like growth factor Ⅱ mRNA binding protein 3；Cell proliferating nuclear antigen神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（neuroendocrine neoplasm，NEN）是起源于肽能神經(jīng)元以及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的一組異質(zhì)性惡性腫瘤，都有轉(zhuǎn)移潛能[1]。NEN可發(fā)生在人體多處器官和組織，主要發(fā)生在胃腸道和胰腺，胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）占所有NEN的55%～70%，發(fā)病率約為5.25/10萬(wàn)，在消化道腫瘤中排第2位[2]。近年來(lái)，GEP-NEN發(fā)病率明顯升高，與30年前相比增加了將近5倍[3]。胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ mRNA結(jié)合蛋白3（insulin-like growth factorⅡ mRNA binding protein 3，IMP3）是一種新識(shí)別的腫瘤胚胎蛋白，是影響腫瘤增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素之一[4]；惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤細(xì)胞增殖密切相關(guān)；細(xì)胞增殖核抗原（cell proliferating nuclear antigen）（Ki-67）是細(xì)胞增殖的良好標(biāo)志。目前，IMP3在GEP-NEN中的表達(dá)關(guān)系少有研究，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)，本研究回顧性分析59例GEP-NEN患者的臨床病理資料，通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)IPM3、Ki-67水平，了解其與GEP-NEN臨床病理特征的關(guān)系。

1資料與方法

1.1 一般資料

收集廣東廣州、深圳及東莞等5家醫(yī)院自2010年1月～2016年10月確診的59例胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，男性41例，女性18例，男女比例2.28∶1。年齡19～77歲，平均47.9歲。發(fā)生在前腸19例，中腸14例，后腸8例，胰腺18例。腫瘤直徑0.4～7 cm，其中直徑≥2 cm共34例，<2 cm共25例。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例。發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移8例，其中4例肝轉(zhuǎn)移，2例肺轉(zhuǎn)移，皮膚及骨轉(zhuǎn)移各1例。按2010年《WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類》的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[5]，1級(jí)（G1）27例，2級(jí)（G2）14例，3級(jí)（G3）18例；G1、G2是NEN，屬于高分化腫瘤，G3是神經(jīng)內(nèi)分泌癌（neuroendocrine carcinoma，NEC），屬于低分化腫瘤。參照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（American Joint Committe on Cancer，AJCC） 2010年第7版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[6]，Ⅰ期23例，Ⅱ期8例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例。

1.2 研究方法

所有標(biāo)本均用4%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，以4 μm厚度切片，分別做HE和免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）染色。鼠抗人IMP3單克隆抗體（工作濃度1∶100）購(gòu)自武漢博士德公司；鼠抗人Ki-67單克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物有限公司，通過(guò)羅氏全自動(dòng)免疫組化染色儀（BENCHMARK GX）完成免疫組化染色，參照該儀器操作流程：①4 μm厚石蠟切片置于65℃烤片機(jī)中烤60 min，貼上標(biāo)簽置于機(jī)器切片盤(pán)上；②依次放上DAB試劑盒、蘇木精、返藍(lán)液和一抗等試劑瓶，運(yùn)行儀器；③機(jī)器自動(dòng)完成消化、抗體孵育和復(fù)染；④用含有溫和清潔劑的蒸餾水沖洗、乙醇脫水、二甲苯透明，最后中性樹(shù)脂膠封固；⑤用已知陽(yáng)性組作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判讀

采用雙盲法，所有病例均由兩位高年資病理醫(yī)師閱片。IPM3陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)，光鏡下呈黃褐色（圖1），以>10%的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)著色定為陽(yáng)性，按著色強(qiáng)度分弱陽(yáng)性、中陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性，相應(yīng)顯示為淺黃色、棕黃色及棕褐色。Ki-67陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，光鏡下呈黃褐顆粒狀（圖2），以>5%的腫瘤細(xì)胞核著色定為陽(yáng)性，以陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞數(shù)占比≥50%定為高增殖活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，各組計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

IMP3陽(yáng)性率為81.36%（48/59），強(qiáng)陽(yáng)性5例，中陽(yáng)性27例，弱陽(yáng)性16例；IMP3在腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)及臨床分期中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而在腫瘤是否有轉(zhuǎn)移的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Ki-67陽(yáng)性率為44.68%（26/59），高增殖活性12例；Ki-67在腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)及臨床分期的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表1）。

3 討論

GEP-NEN是罕見(jiàn)的異質(zhì)性腫瘤，可表現(xiàn)為相對(duì)惰性、低度惡性到高度惡性[7]，有研究顯示，GEP-NEN發(fā)病率男性高于女性[3]，本研究與此相符。近年發(fā)病率明顯升高，與醫(yī)療診斷技術(shù)的進(jìn)步有關(guān)，但實(shí)際發(fā)病率也是升高的[8]。

1907年，Oberndorfer發(fā)現(xiàn)胃腸道有一種類似癌的良性腫瘤，并命名為類癌[9]，這是人們對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的早期認(rèn)識(shí)，后來(lái)證實(shí)這類腫瘤都是惡性的。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)其來(lái)源于消化道彌散神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，部分腫瘤能攝取胺前體及脫羥基（amine precursor uptake and decarboxylation， APUD），所以又叫APUD瘤[10]。由于組織形態(tài)多樣，生物學(xué)行為復(fù)雜，長(zhǎng)期以來(lái)，這類腫瘤的命名及分類較為紊亂，直到2000年世界衛(wèi)生組織（WHO）才統(tǒng)一命名為神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤[11]，2010年《WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類》第4版對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤制訂了分級(jí)、分期標(biāo)準(zhǔn)，同年得到中國(guó)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病理學(xué)診斷共識(shí)的一致推薦[12]。GEP-NEN分級(jí)、分期被證實(shí)是影響患者生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[13]，有報(bào)道稱GEP-NENⅠ、Ⅱ期患者5年總生存率達(dá)100%，Ⅲ期為91%，Ⅳ期為73%[14]。

IMP3是胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白家族成員之一，在胚胎組織及人體多種惡性腫瘤中高表達(dá)，在瘤旁組織、良性腫瘤及成人正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，被認(rèn)為是腫瘤胚胎蛋白[15]，大量研究表明，IMP3與消化道鱗癌、腺癌、膽管癌、乳腺癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤的侵襲和進(jìn)展關(guān)系密切，被認(rèn)為是影響腫瘤患者預(yù)后的一個(gè)關(guān)鍵因素[4]?；A(chǔ)研究揭示IMP3通過(guò)結(jié)合信使RNA，促進(jìn)目標(biāo)RNA的翻譯，上調(diào)胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ水平，從而引起細(xì)胞增殖并抑制細(xì)胞凋亡，是促進(jìn)腫瘤增殖的重要因素[16]。同時(shí)IMP3可以通過(guò)上調(diào)兩性霉素誘導(dǎo)基因、白細(xì)胞活化黏附因子和基質(zhì)金屬蛋白酶1等的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞偽足形成，提高腫瘤細(xì)胞的黏附作用，從而增加腫瘤侵襲性[17]。本研究結(jié)果顯示，IMP3在GEP-NEN中表達(dá)陽(yáng)性率較高，且明顯高于瘤旁正常組織，表明IMP3表達(dá)的上調(diào)可能在GEP-NEN的發(fā)生中起重要作用。同時(shí)IMP3在不同腫瘤直徑、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同腫瘤分期與分級(jí)中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且均成正相關(guān)，表明IMP3可能在GEP-NEN的惡性進(jìn)展中也起到重要作用；本實(shí)驗(yàn)IMP3在是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與部分研究不太一致[18]，但發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率為100.00%（8/8），高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的78.41%（40/51），考慮可能與實(shí)驗(yàn)樣本的局限性如病例的選擇性偏移等有關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。以上結(jié)果顯示IMP3在GEP-NEN總體陽(yáng)性率較高，與影響GEP-NEN患者預(yù)后的多個(gè)主要危險(xiǎn)因素呈正相關(guān)。

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核蛋白，只存在于細(xì)胞核內(nèi)，本身的存在并不依賴于DNA和組蛋白，只表達(dá)于細(xì)胞周期的G1、S、G2及M期[19]，能較準(zhǔn)確的反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)[20]，2010年《WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類》第4版把Ki-67納入GEP-NEN的增殖活性分級(jí)指標(biāo)之一。有報(bào)導(dǎo)稱Ki-67可以評(píng)估GEP-NEN轉(zhuǎn)移潛能以及預(yù)測(cè)患者的生存期[21]。本研究顯示Ki-67在腫瘤直徑<2 cm、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分期較早、級(jí)別較低的腫瘤中表達(dá)陽(yáng)性率較低，相反則陽(yáng)性率均較高，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)KI-67高增殖集中在高級(jí)別及分期晚的病例，表明Ki-67能較直觀地顯示腫瘤惡性程度，印證了Ki-67高表達(dá)，則腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的能力越強(qiáng)，臨床分期越晚[19]。

綜上所述，IMP3、Ki-67在GEP-NEN的表達(dá)均隨著腫瘤惡性程度的增加而上調(diào)，可作為判斷患者預(yù)后的參考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用，隨著對(duì)IMP3作用機(jī)制的更深入研究，可能為臨床治療GEP-NEN帶來(lái)新的手段。

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（收稿日期：2016-12-06 本文編輯：許俊琴）