馮藜櫪+曹文富

[摘要]研究莪術(shù)含藥血清抑制活化的大鼠肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）中Hedgehog（Hh）信號(hào)通路關(guān)鍵因子Shh（sonic hedgehog），Gli1（glioma-associated oncogene homolog-1）表達(dá)的機(jī)制。清潔級(jí)SD大鼠均分2組，分別給予莪術(shù)水煎劑、生理鹽水灌胃取血制備含藥血清。體外培養(yǎng)大鼠HSCs，分為7組：空白組、模型組、Hh通路抑制劑組、莪術(shù)組、Hh通路抑制劑+莪術(shù)組、Hh通路激動(dòng)劑組、Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組。除空白組外，其余各組均給予100 μg·L^-1瘦素誘導(dǎo)后，各組再予以相應(yīng)藥物干預(yù)24 h，經(jīng)MTT法檢測(cè)HSCs增殖情況，RT-PCR法檢測(cè)Shh，Gli1的mRNA表達(dá)，Western blot法檢測(cè)Shh，Gli1蛋白表達(dá)及免疫熒光法檢測(cè)Gli1蛋白表達(dá)。經(jīng)瘦素活化的大鼠HSCs中Shh，Gli1的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)（與空白組比較P<0.01）。Hh通路抑制劑、莪術(shù)含藥血清分別干預(yù)后，Shh，Gli1的mRNA和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（與模型組比較P<0.01）；莪術(shù)含藥血清與Hh通路抑制劑協(xié)同干預(yù)后，Shh，Gli1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（與模型組比較P<0.01）；Hh通路激動(dòng)劑干預(yù)后，Shh，Gli1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（與模型組比較P<0.01）。用莪術(shù)含藥血清干預(yù)Hh通路激動(dòng)劑組后，Shh，Gli1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（與Hh通路激動(dòng)劑組比較P<0.01）。莪術(shù)含藥血清可通過(guò)抑制瘦素誘導(dǎo)活化的HSCs中Shh，Gli1的表達(dá)，參與Hh信號(hào)通路抑制HSCs的活化，發(fā)揮抗肝纖維化的作用。

[關(guān)鍵詞] 莪術(shù)； 肝星狀細(xì)胞； Shh； Gli1； Hedgehog信號(hào)通路； 肝纖維化

[Abstract] To explore the mechanism of Ezhu-containing serum in inhibiting the expression of sonic hedgehog（Shh） and glioma-associated oncogene homolog-1（Gli1） in hepatic stellate cells（HSCs） induced by leptin. Twenty sprague-dawley （SD） rats were randomly divided into 2 groups （N=10）， and given Ezhu-decoction and physiological saline by gavage for 10 days to prepare drug-containing serums. The HSCs during the exponential growth phase were divided into 7 groups： blank control group， model group， hedgehog pathway inhibitor（cyclopamine） group， Ezhu group， Ezhu and cyclopamine group， hedgehog pathway agonost（pumorphamine） group， Ezhu and purmorphamine group. HSCs were cultured in vitro and induced with 100 μg·L^-1 leptin（except for the blank control group）， then treated separately with the corresponding drugs for 24 hours. After the cells were collected， HSCs proliferation was detected using MTT colorimetric assay； the expressions of Shh and Gli1 were determined by PT-PCR， Western blot and immunofluorescence， respectively. The expressions of Shh and Gli1 were significantly increased after the HSCs of rats were induced by leptin （compared with the blank control group， P<0.01）. After being interfered with Hh pathway inhibitor （cyclopamine） and Ezhu-containing serum， the expressions of Shh and Gli1 were decreased significantly（compared with the model group， P<0.01）. After Ezhu-containing serum was used to interfere the Hh pathway inhibitor group， the mRNA and protein expressions of Shh and Gli1 were decreased significantly（compared with the model group， P<0.01）. After Ezhu-containing serum was used to interfere the purmorphamine group， the mRNA and protein expressions of Shh and Gli1 decreased significantly（compared with the purmorphamine group， P<0.01）. Ezhu-containing serum plays an important role in inhibiting HSCs activation by taking part in hedgehog signaling pathway， so as to regulate the expression of Shh and Gli1 in leptin-induced HSCs and then inhibit liver fibrosis.

[Key words] Ezhu； hepatic stellate cell； sonic hedgehog； glioma-associated oncogene homolog-1； hedgehog signaling pathway； hepatic fibrosis

肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是肝組織慢性損傷后的修復(fù)反應(yīng)，可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化，甚至肝癌^[1-2]。目前已經(jīng)證實(shí)HF是可逆的^[3]，但肝硬化卻不可逆。因此，阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化具有重要的意義。HF主要由細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）異常增多和降解不足引起?；罨母涡菭罴?xì)胞（hepatic stellate cell，HSCs）是ECM的主要來(lái)源，其過(guò)度增殖是肝纖維化形成的關(guān)鍵^[4-5]。抑制HSCs活化增殖，可促進(jìn)ECM降解，從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化^[6-7]。因此，抑制HSCs活化增殖已成為目前抗肝纖維化的主要策略^[8-9]。

研究表明，過(guò)度或持續(xù)激活的Hedgeheg（Hh）信號(hào)通路可促進(jìn)HSCs的活化增殖，從而加速肝纖維化的進(jìn)程，通過(guò)干預(yù)Hh信號(hào)通路抑制HSCs的活化增殖被認(rèn)為是抗肝纖維化的潛在靶點(diǎn)^[10-11]。目前臨床上尚無(wú)明確有效的抗纖維化西藥^[12]，因此開(kāi)發(fā)具有Hh阻斷效應(yīng)的中藥具有重要意義。莪術(shù)在臨床中常被用于防治肝纖維化，但目前對(duì)于莪術(shù)抗肝纖維化的基礎(chǔ)研究，報(bào)道尚少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察莪術(shù)含藥血清對(duì)活化的HSCs中Hh信號(hào)通路關(guān)鍵因子Shh，Gli1表達(dá)的影響，探討莪術(shù)抗肝纖維化可能的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠20只（雌雄各半），體重180～220 g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SYXK（渝）2012-0001。采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白組、莪術(shù)組，每組10只，進(jìn)行灌胃實(shí)驗(yàn)。

1.2 細(xì)胞 大鼠肝星狀細(xì)胞由重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化科提供。

1.3 藥物 莪術(shù)飲片購(gòu)自重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥房，莪術(shù)經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院曹文富教授鑒定，符合2015年版《中國(guó)藥典》規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。生理鹽水購(gòu)自重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院。

1.4 試劑與器材 兔抗鼠Shh多克隆抗體（BIOSS公司，貨號(hào)bs-1544R，規(guī)格0.1 mL）；兔抗鼠Gli1多克隆抗體（Santa Cruz公司，貨號(hào)sc-20687，規(guī)格200 mg·L^-1）；瘦素（PeproTech公司，貨號(hào)400-21-1000，規(guī)格200 μg）；Hh通路抑制劑（Cyclopamine，Selleck公司，貨號(hào)S3042，規(guī)格10 mg）；Hh通路激動(dòng)劑（Purmorphamine，Selleck公司，貨號(hào)S1146，規(guī)格5 mg）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Toyobo公司）；倒置相差顯微鏡（型號(hào)CXX41，Olympus）；核酸蛋白分析儀（BECKMAN DU640）；PCR儀（Applied Biosy Stems）；SDS-PAGE凝膠試劑盒（碧云天生物公司）；CO₂細(xì)胞孵箱（Thermo）；超凈工作臺(tái)（AIRTECH）；HH-W600型恒溫水浴鍋（江蘇榮華儀器制造有限公司）。

2 方法

2.1 藥物制備 莪術(shù)的臨床人用劑量為0.25 g·kg^-1，按“動(dòng)物與人體的千克體質(zhì)量折算系數(shù)表”成人與大鼠的折算系數(shù)為6.25，換算成SD大鼠的臨床劑量作為低劑量，按照該劑量的2，4倍分別為中、高劑量，本實(shí)驗(yàn)選擇高劑量6.25 g·kg^-1為大鼠灌胃劑量。

2.2 含藥血清制備 20只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為2組（每組10只）：空白組、莪術(shù)組。各組均按10 mL·kg^-1·d^-1的濃度給藥，每天1次，連續(xù)10 d，最后1次灌胃2 h后水合氯醛麻醉，無(wú)菌條件下心臟采血。血液靜置于4 ℃冰箱過(guò)夜，離心（3 000 r·min^-1，10 min）后收集含藥血清。水浴滅活（56 ℃，30 min），0.22 μm濾器過(guò)濾收集的含藥血清。

2.3 細(xì)胞培養(yǎng) HSCs在5%CO₂，37 ℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中用含10%胎牛血清的改良型1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。定期觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，根據(jù)生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行換液，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至密度達(dá)到80%～90%時(shí)傳代。

2.4 細(xì)胞干預(yù) 倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%融合率后，用0.25%胰酶消化，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為7組：空白組、模型組、Hh通路抑制劑組、莪術(shù)組、Hh通路抑制劑+莪術(shù)組、Hh通路激動(dòng)劑組、Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組。空白組予以含10%正常鼠血清的1640培養(yǎng)基；模型組予以含100 μg·L^-1瘦素和10%正常鼠血清的1640培養(yǎng)基；Hh通路抑制劑組予以含20 μmol·L^-1 Hh通路抑制劑、10%正常鼠血清及100 μg·L^-1瘦素的1640培養(yǎng)基；莪術(shù)組予以含10%莪術(shù)含藥血清和100 μg·L^-1瘦素的1640培養(yǎng)基；Hh通路抑制劑+莪術(shù)組予以含20 μmol·L^-1 Hh通路抑制劑、10%莪術(shù)含藥血清及100 μg·L^-1瘦素的1640培養(yǎng)基；Hh通路激動(dòng)劑組予以含1 μmol·L^-1 Hh通路激動(dòng)劑、10%正常鼠血清及100 μg·L^-1瘦素的1640培養(yǎng)基；Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組予以含10%莪術(shù)含藥血清、1 μmol·L^-1 Hh通路激動(dòng)劑及100 μg·L^-1瘦素的1640培養(yǎng)基。各組細(xì)胞在37 ℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h后收集細(xì)胞。

2.5 MTT法檢測(cè)HSCs增殖活性 HSCs按1×105個(gè)/mL接種于96孔板，每孔100 μL，分為7組，每組6個(gè)復(fù)孔。在37 ℃，5% CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基孵育，24 h后棄上清，按分組條件加入干預(yù)因素作用24 h后，于各孔分別加入MTT溶液20 μL，4 h后棄上清，每孔加入150 μL DMSO，振蕩10 min，酶標(biāo)儀在490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度（A）。

2.6 RT-PCR檢測(cè)HSCs內(nèi)Shh，Gli1的mRNA表達(dá) HSCs按每孔5.0×105個(gè)/mL接種于6孔板，每孔2 mL，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%融合時(shí)，吸棄培養(yǎng)基，各組加入相應(yīng)血清及試劑，24 h后收集細(xì)胞。提取細(xì)胞總RNA；PCR反條件為：94 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，32個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后取PCR產(chǎn)物15 μL于1%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分析。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以GAPDH作內(nèi)參對(duì)照。Shh，Gli1基因上下游引物序列均由上海生工生物工程有限公司合成，見(jiàn)表1。

2.7 Western blot法檢測(cè)HSCs內(nèi)Shh，Gli1蛋白表達(dá)情況 HSCs接種、培養(yǎng)以及藥物處理同2.6項(xiàng)。用蛋白裂解液裂解收集的細(xì)胞。分別取蛋白質(zhì)樣品50 μg上樣，行10%SDS-PAGE電泳分離條帶，轉(zhuǎn)膜，封閉，TBS-T洗膜，加一抗，4 ℃過(guò)夜；TBST洗膜15 min×3次；二抗室溫下孵育1 h，TBST洗膜15 min×3次，曝光顯影，光密度掃描儀記錄結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以GAPDH表達(dá)水平為內(nèi)參，目標(biāo)蛋白的表達(dá)量以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參照蛋白灰度值的相對(duì)比值表示。

2.8 免疫熒光法檢測(cè)HSCs內(nèi)Gli1蛋白表達(dá)情況 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HSCs接種于裝有小載玻片的6孔板中，培養(yǎng)及相應(yīng)組別處理同2.6項(xiàng)，制備細(xì)胞爬片。棄上清液，PBS洗3 min×3次，4%多聚甲醛室溫固定15 min，PBS洗3 min×3次，4 ℃，0.1%Triton-X打孔30 min，0.5%BSA封閉，一抗（1∶50）4 ℃孵育過(guò)夜，空白對(duì)照以PBS孵育過(guò)夜。PBS洗3 min×3次，熒光二抗37 ℃孵育1 h，DAPI（1∶100）室溫染核10 min，熒光封片劑封片，熒光顯微鏡觀(guān)察、拍照。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)以±s表示，各組樣本間的比較采用單因素方差分析。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 莪術(shù)含藥血清對(duì)HSCs增殖的影響 與空白組相比，模型組A顯著增高（P<0.01）。與模型組相比，Hh通路抑制劑組、莪術(shù)組、Hh通路抑制劑+莪術(shù)組A均顯著降低（P<0.01），Hh通路激動(dòng)劑組A顯著增高（P<0.01）。與Hh通路激動(dòng)劑組相比，Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組的A明顯降低（P<0.01），見(jiàn)表2。

3.2 莪術(shù)含藥血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞Shh，Gli1 mRNA表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組Shh，Gli1 mRNA顯著上調(diào)（均P<0.01）。與模型組比較，Hh通路抑制劑組、莪術(shù)組、Hh通路抑制劑+莪術(shù)組Shh，Gli1 mRNA顯著下調(diào)（均P<0.01）。與模型組比較，Hh通路激動(dòng)劑組Shh，Gli1 mRNA顯著上調(diào)（均P<0.01）。與Hh通路激動(dòng)劑組比較，Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組Shh，Gli1 mRNA顯著下調(diào) （均P<0.01），見(jiàn)表3。

3.3 Western blot 法檢測(cè)莪術(shù)含藥血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞Shh，Gli1蛋白表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組Shh，Gli1蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（均P<0.01）。

與模型組比較，Hh通路抑制劑組、莪術(shù)組、Hh通路抑制劑+莪術(shù)組Shh，Gli1蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（均P<0.01）。與模型組比較，Hh通路激動(dòng)劑組Shh，Gli1蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（均P<0.01）。與Hh通路激動(dòng)劑組比較，Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組Shh，Gli1蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（均P<0.01），見(jiàn)圖1，表4。

3.4 免疫熒光法檢測(cè)莪術(shù)含藥血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞Gli1蛋白表達(dá)的影響 與空白組相比，模型組和Hh通路激動(dòng)劑組中Gli1呈高表達(dá)，熒光顯微鏡下可見(jiàn)明顯紅色熒光。與模型組比較，Hh通路抑制劑組、莪術(shù)組、Hh通路抑制劑+莪術(shù)組Gli1表達(dá)明顯減弱。與Hh通路激動(dòng)劑組比較，Hh通路激動(dòng)劑+莪術(shù)組Gli1表達(dá)明顯減弱，見(jiàn)圖2。

4 討論

肝纖維化是由活化的HSCs轉(zhuǎn)化成肌成纖維細(xì)胞（myofibroblast，MFB），大量合成和分泌ECM，并過(guò)度沉積所致。HSCs被激活是纖維化發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)，有效抑制HSCs的活化和增殖是抗纖維化的關(guān)鍵^[13]。

臨床上通過(guò)辨證論治，運(yùn)用莪術(shù)治療肝纖維化，療效是肯定的，但其抗肝纖維化的作用機(jī)制尚未闡明。中醫(yī)認(rèn)為肝纖維化屬于脅痛、積聚等范疇，多因寒、熱、濕、毒等病邪反復(fù)刺激肝臟，日久則肝虛絡(luò)瘀，功能受損。研究表明，瘀血阻滯存在于肝纖維化發(fā)生發(fā)展的始終^[14]。瘀血阻滯肝脈，不通則痛，即出現(xiàn)胸脅脹痛。瘀血阻于內(nèi)而形于外則可見(jiàn)舌質(zhì)紫暗有瘀點(diǎn)瘀斑、脈澀等。其進(jìn)一步發(fā)展可出現(xiàn)脾臟腫大、肝掌、蜘蛛痣等癥狀，符合中醫(yī)學(xué)氣滯血瘀之病變及莪術(shù)用藥指征。因此，通過(guò)活血化瘀改善肝微循環(huán)是治療肝纖維化的重要途徑。莪術(shù)性味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有行氣破血、消積止痛之功，中醫(yī)臨床常用于治療肝纖維化。研究表明，莪術(shù)可保護(hù)肝細(xì)胞，改善血液循環(huán)，增加肝內(nèi)循環(huán)血量，減少纖維組織增生，促進(jìn)膠原纖維降解吸收^[15]。

近年來(lái)，促進(jìn)肝再生已成為防治肝纖維化的新途徑。經(jīng)典的Hh信號(hào)途徑是一條高度保守的信號(hào)通路，在組織損傷后的修復(fù)、再生方面起著重要的作用^[16]。該通路主要由Hh配體、膜蛋白受體、核轉(zhuǎn)錄因子Gli組成。經(jīng)典的Hh活化機(jī)制是^[17]，當(dāng)不存在Hh配體時(shí)，該通路處于抑制狀態(tài)；Hh配體存在時(shí)，配體與膜蛋白受體結(jié)合，將Hh信號(hào)向細(xì)胞內(nèi)傳遞，激活核轉(zhuǎn)錄因子Gli基因家族，Hh信號(hào)通路被激活。經(jīng)典的Hh信號(hào)通路活化依賴(lài)于Hh配體存在，并與受體結(jié)合，從而活化信號(hào)通路。相關(guān)研究證實(shí)，Hh信號(hào)通路與各類(lèi)慢性肝病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)^[18-19]。研究表明，Hh信號(hào)通路可通過(guò)調(diào)控HSCs的活化增殖，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，而阻斷Hh信號(hào)通路可減輕肝纖維化的病變程度^[20]。在正常肝臟中HSCs是靜止的，肝組織受損時(shí)死亡的肝細(xì)胞釋放Hh配體Shh激活Hh信號(hào)通路^[21]，促進(jìn)靜止的HSCs向MFB轉(zhuǎn)化，且MFB自分泌或旁分泌的Shh使Hh信號(hào)通路持續(xù)激活，使HSCs進(jìn)一步增殖，抑制凋亡^[22-23]。Gli1作為Hh通路末端的核轉(zhuǎn)錄因子，是Hh通路激活的標(biāo)志，在HSCs活化過(guò)程中必不可少^[24-25]。Shh，Gli1是Hh信號(hào)通路首末兩端的關(guān)鍵因子，其高表達(dá)是Hh信號(hào)通路激活的標(biāo)志，因此本實(shí)驗(yàn)選擇Shh，Gli1作為檢測(cè)指標(biāo)。

研究發(fā)現(xiàn)，瘦素可激活Hh信號(hào)通路，促進(jìn)靜止型HSCs向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化^[26]。本實(shí)驗(yàn)以瘦素為刺激因子，結(jié)果顯示，瘦素誘導(dǎo)HSCs后，HSCs中Shh，Gli1分子的基因和蛋白表達(dá)水平均顯著上調(diào)，提示Hh信號(hào)通路被廣泛激活。研究顯示Hh信號(hào)抑制劑環(huán)巴胺（cyclopamine）能有效地抑制Hh信號(hào)通路活性，抑制HSCs的活化和增殖，從而減輕肝纖維化程度^[27]。本研究也顯示，予以環(huán)靶胺、莪術(shù)含藥血清分別干預(yù)，均能夠明顯抑制活化的HSCs中Shh，Gli1的表達(dá)水平。在環(huán)靶胺和莪術(shù)協(xié)同干預(yù)下，Shh，Gli1的表達(dá)水平進(jìn)一步下調(diào)，說(shuō)明莪術(shù)與環(huán)靶胺在抑制HSCs方面具有協(xié)同作用。予以Hh通路激動(dòng)劑干預(yù)瘦素激活的HSCs，使HSCs被高度活化，再應(yīng)用莪術(shù)干預(yù)高度活化的HSCs顯示Shh，Gli1表達(dá)明顯下調(diào)，說(shuō)明莪術(shù)對(duì)不同活化狀態(tài)的HSCs均能起到抑制作用。本研究顯示，用莪術(shù)含藥血清干預(yù)Shh，Gli1產(chǎn)生抑制作用，這提示抑制活化的HSCs中異常激活的Hh信號(hào)通路是莪術(shù)抗纖維化的作用機(jī)制之一。

本實(shí)驗(yàn)用環(huán)巴胺作為陽(yáng)性對(duì)照。環(huán)巴胺是Hh信號(hào)通路特異性抑制劑^[28]，可通過(guò)抑制Hh信號(hào)通路而抑制HSCs活化和增殖，加速ECM降解，促進(jìn)HSCs凋亡，逆轉(zhuǎn)肝纖維化。但其具有嚴(yán)重致畸性，可導(dǎo)致在胚胎發(fā)育過(guò)程中產(chǎn)生前唇裂、腭裂、單眼畸形等，限制了其在臨床應(yīng)用。莪術(shù)是中醫(yī)常用行氣活血化瘀藥物，功效顯著，毒副作用小，價(jià)格低廉，中醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用于治療肝纖維化。本研究結(jié)果顯示莪術(shù)具有環(huán)靶胺類(lèi)似的功效。莪術(shù)含藥血清可通過(guò)抑制活化的HSCs中Shh，Gli1的表達(dá)，參與Hh信號(hào)通路抑制HSCs的活化和增殖，發(fā)揮其抗纖維化作用，為臨床應(yīng)用莪術(shù)治療肝纖維化提供了新的理論依據(jù)。

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[責(zé)任編輯 張寧寧]