楊佩磊+蔣劍平+李全清+伍旭明+陳芝蕓

[摘要]觀察胡柚皮黃酮（PTFC）對(duì)高脂血癥大鼠的降血脂作用，初步探索其作用機(jī)制。以高脂飲食4周建立高脂血癥大鼠模型，造模同時(shí)分別予以50，100，200 mg·kg^-1·d^-1的PTFC灌胃干預(yù)4周。造模2周末取尾血，生化法檢測(cè)血清TC，TG，HDL-C水平，并稱量體重。造模4周末，稱量大鼠體重及其肝臟質(zhì)量，檢測(cè)血清TC，TG，HDL-C，LDL-C，ALT，AST，MDA，SOD含量，計(jì)算血脂綜合指數(shù)（LDL-C/HDL-C，LDL-C/TC）及動(dòng)脈硬化指數(shù)（AI），生化法檢測(cè)肝組織MDA，SOD水平。HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化，ELISA法檢測(cè)肝組織PPAR-α，Lpl，Lipc蛋白表達(dá)，Real-time PCR法檢測(cè)肝組織PPAR-α mRNA表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，PTFC對(duì)高脂血癥大鼠體重增高有降低趨勢(shì)，對(duì)大鼠肝臟質(zhì)量和肝指數(shù)升高均明顯降低；對(duì)血清TC，TG，LDL-C，LDL-C/HDL-C與AI升高具有明顯降低作用，而對(duì)血清LDL-C/TC降低有明顯升高作用；PTFC干預(yù)后，能明顯減輕高脂血癥大鼠組織脂肪變性和炎癥程度，顯著改善肝功能；顯著改善高脂血癥大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平。同時(shí)能顯著促進(jìn)高脂血癥大鼠肝組織PPAR-α，Lpl，Lipc的蛋白表達(dá)和PPAR-α mRNA的表達(dá)。研究表明PTFC通過有效地積極調(diào)控與脂肪分解代謝有關(guān)的PPAR-α的基因表達(dá)及PPAR-α，Lpl，Lipc的蛋白表達(dá)，并提高機(jī)體的抗氧化能力，降低氧化應(yīng)激水平，實(shí)現(xiàn)對(duì)脂代謝的積極調(diào)控。

[關(guān)鍵詞] 胡柚皮黃酮； 高脂血癥； 氧化應(yīng)激； 過氧化物酶體增殖體活化受體α（PPAR-α）； 脂蛋白酶（Lpl）； 肝脂酶（Lipc）

[Abstract] To observe and investigate the effects and mechanisms of the pure total flavonoids from Citrus changshan-huyou（PTFC） on blood lipid metabolism in hyperlipidemic rats. SD rats were fed with high fat diet for 4 weeks to induce hyperlipidemic rats model， meanwhile three dosages （50， 100， 200 mg·kg^-1·d^-1） of PTFC were administrated intragastrically for 4 weeks respectively.After 2 weeks of modeling， their tail blood was taken and serum TC， TG， and HDL-C levels were detected by biochemical method and their body weight was measured. After 4 weeks of modeling， their body weight was measured and liver weight was measured， then the levels of TC， TG， HDL-C， LDL-C， ALT， AST， MDA and SOD in serum were detected to calculate lipid comprehensive index（LDL-C/HDL-C and LDL-C/TC ratios） and atherogenic index（AI）； in addition， MDA and SOD levels were detected by biochemical method. The hitopathological changes of the liver tissues were observed by HE staining； the protein expression levels of PPAR-α， Lpl， and Lipc were detected by ELISA； and the mRNA expression levels of PPAR-α in the liver tissue were detected by Real-time PCR. The results showed that gavage administration of the PTFC significantly decreased the body weight， liver weight， liver index， serum ALT and AST activities， the levels of serum TC， TG， LDL-C， LDL-C/HDL-C， AI and increased serum HDL and LDL/TC level. Moreover， the PTFC significantly enhanced SOD activity and decreased the concentration of MDA in serum and liver tissue. Further mechanism investigation indicated that PTFC inhibited serum lipid accumulation by increasing the expressions PPAR-α， Lpl， Lipc protein and PPAR-α mRNA of the liver tissues. PTFC could actively regulate blood lipid metabolism by ameliorating hepatic function， improving the body′s antioxidant capacity， lowering levels of oxidative stress， as well as positively regulating the expression levels of PPAR-α， Lpl， Lipc protein and PPAR-α mRNA of the liver tissues in rats.

[Key words] pure total flavonoids from Citrus changshan-huyou； hyperlipidemia； oxidative stress； peroxisome proliferator activated receptors alpha； lipoprotein lipase； Lipc

胡柚皮為蕓香科植物常山胡柚Citrus changshan-huyou Y.B. Chang的干燥未成熟果皮，又稱胡柚片、衢枳殼，為浙江民間常用中藥，味苦，性辛、酸，微寒，歸脾、胃經(jīng)。功能主治為理氣寬中、行滯消脹，用于胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，痰飲內(nèi)停；胃下垂，脫肛，子宮脫垂^[1]?，F(xiàn)代研究表明，黃酮類化合物為胡柚皮的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，胡柚皮具有抗菌、預(yù)防腫瘤、治療呼吸系統(tǒng)疾病^[2]等作用。本課題組前期研究結(jié)果表明，胡柚皮黃酮（pure total flavonoids from C. changshan-huyou，PTFC）對(duì)非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠具有較好的預(yù)防作用，其作用機(jī)制可能通過干預(yù)SIRT1/PGC-1α通路^[3]和調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡^[4]而實(shí)現(xiàn)。此外，胡柚皮黃酮組分具有較好的體外抗氧化與降血脂作用^[5]。過氧化物酶體增殖體活化受體α（PPAR-α）、脂蛋白酶（Lpl）、肝脂酶（Lipc）與脂肪分解代謝密切相關(guān)。PPAR-α活化可以調(diào)節(jié)眾多基因的轉(zhuǎn)錄，脂肪酸氧化途徑中關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄多由PPAR-α直接調(diào)節(jié)，還能促進(jìn)VLDL甘油三酯酯解作用^[6]，Lpl和Lipc都是脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶^[7]。然而，胡柚皮黃酮對(duì)上述調(diào)節(jié)脂肪分解代謝基因及蛋白的表達(dá)是否也存在調(diào)控作用尚無文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本研究擬通過采用高脂飲食復(fù)制建立SD大鼠高脂血癥模型，觀察PTFC的體內(nèi)降血脂及氧化應(yīng)激調(diào)控作用，從分子水平上初步探索PTFC對(duì)脂肪分解代謝的調(diào)控，包括對(duì)肝臟PPAR-α mRNA和PPAR-α，Lpl，Lipc蛋白表達(dá)的影響。

1 材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠50只，SPF級(jí)，體重180～200 g，上海市西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)SCXK（滬）2008-0016，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心屏障動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)施內(nèi)[SYXK（浙）2008-0115]。

1.2 藥品與試劑 PTFC由課題組采用HPD-300型大孔樹脂從蕓香科常山胡柚的干燥未成熟果皮中分離、純化所得，主要含柚皮苷（naringin）、新橙皮苷（neohesperidin）、柚皮蕓香苷（narirutin）3種黃酮類化合物，總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為88.50%。辛伐他汀片為山東羅欣藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品（批號(hào)090517）；膽固醇為上海伯奧生物有限公司產(chǎn)品（批號(hào)100901）；3號(hào)膽鹽為杭州微生物試劑有限公司產(chǎn)品（批號(hào)20101102）；甘油三酯（TG，批號(hào)57146/975001/2）、總膽固醇（CHOL，批號(hào)

13041/931002/1）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C，批號(hào)14095/64183/1）、AST（批號(hào)26012/962006/1）和ALT（批號(hào)27016/972010/1）試劑盒為上海申能德賽診斷技術(shù)有限公司產(chǎn)品；低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C，批號(hào)0101026）試劑盒為上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司產(chǎn)品；超氧化物歧化酶（SOD，批號(hào)20101222）、丙二醛（MDA，批號(hào)20101223）、考馬斯亮蘭蛋白（批號(hào)20101220）為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；大鼠（Rat）過氧化物體增殖物激活型受體α（PPAR-α，批號(hào)CK-E30127R）、肝脂酶（Lipc，批號(hào)CK-E30108R）、脂蛋白酶（Lpl，批號(hào)CK-E30287R）ELISA試劑盒為R&D公司產(chǎn)品；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號(hào)DRR037）、定量PCR試劑盒（批號(hào)DRR041）為TAKARA公司產(chǎn)品。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，PPAR-α上游引物5′-GGCACACGAGCGGGGACATC-3′，下游引物5′-CAGGCGGGCCACAGAGCAC-3′，產(chǎn)物片段217 bp；β-actin上游引物5′-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-3′，下游引物5′-TAGAGCCACCAATCCACACA-3′，產(chǎn)物片段104 bp。

1.3 儀器 AG204-電子分析天平（瑞士METTLER公司）；HM335E型輪轉(zhuǎn)切片（德國MICROM公司）；染色機(jī)（德國LEICA公司）；AP280組織包埋機(jī)（德國MICROM公司）；脫水機(jī)（德國MICROM 公司）；AXIOVERT200熒光倒置顯微鏡（德國ZEISS公司）；AllegraX-15R型冷凍離心機(jī)（美國貝克曼公司）；BIO-RAD熒光定量PCR儀（美國伯樂公司）；PROTEIN Ⅱ電泳系統(tǒng)（美國伯樂公司）；7020型全自動(dòng)生化分析儀（日本日立）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)處理 60只SPF級(jí)雄性SD大鼠，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下大鼠喂飼基礎(chǔ)飼料觀察7 d后，禁食16 h，稱量體重，取尾血測(cè)定血清總膽固醇（TC），甘油三酯（TG）水平。根據(jù)體重和TC水平，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組：對(duì)照組、模型組、PTFC低劑量組、PTFC中劑量組和PTFC高劑量組及陽性藥物組，每組10只。正常組普通大鼠飼料喂養(yǎng)，其余5組高脂飼料（由77.5%基礎(chǔ)飼料、2%膽固醇、10%蛋黃粉和10%豬油、0.5%膽酸鹽配方制備而成）連續(xù)喂養(yǎng)4周，造模同時(shí)PTFC低、中、高劑量組大鼠分別灌服50，100，200 mg·kg^-1·d^-1的PTFC，陽性藥物組灌服10 mg·kg^-1·d^-1的辛伐他汀溶液，連續(xù)給藥4周，正常組和模型組則灌服等容量蒸餾水4周。

2.2 指標(biāo)檢測(cè) 于造模2周，禁食16 h，取尾血，測(cè)定血清TC，TG，HDL-C水平，并稱量體重。第4周末處理各大鼠，稱取大鼠體重，空腹麻醉下取血及肝組織，稱量肝組織質(zhì)量。全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清TG，TG，HDL-C，LDL-C，ALT，AST水平，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算血脂綜合指數(shù)（LDL-C/HDL-C，LDL-C/TC）及動(dòng)脈硬化指數(shù)（AI），AI=（TC-HDL-C）/HDL-C。采用硫代巴比妥酸法測(cè)定血清及肝組織中MDA含量，采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)血清及肝組織中SOD含量。采用HE染色觀察肝組織脂肪變及炎癥程度；采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠肝組織中PPAR-α，Lipc，Lpl的蛋白含量；肝組織PPAR-α mRNA的表達(dá)采用Real-time PCR檢測(cè)，以β-actin為內(nèi)參，相對(duì)表達(dá)量（2-ΔΔCt）值表示目的基因PPAR-α的表達(dá)水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有計(jì)量資料以±s表示，先行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布或非正態(tài)分布轉(zhuǎn)換成正態(tài)分布后選用One-way ANOVA；兩兩比較方差齊時(shí)選用LSD法統(tǒng)計(jì)、方差不齊時(shí)選用Dunnett′s T₃法統(tǒng)計(jì)，以SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 PTFC對(duì)高脂血癥大鼠體重、肝臟質(zhì)量及肝臟指數(shù)的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠體重在2周有升高趨勢(shì)，第4周時(shí)大鼠體重明顯升高（P<0.05）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，給予100，200 mg·kg^-1的PTFC的大鼠體重有降低趨勢(shì)，陽性藥組大鼠體重也有降低趨勢(shì)，見圖1。與對(duì)照組比，模型組大鼠肝臟質(zhì)量和肝指數(shù)均明顯升高（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中劑量組的大鼠肝臟質(zhì)量和肝指數(shù)均明顯降低（P<0.05，P<0.01），而高劑量組的大鼠肝臟質(zhì)量明顯降低（P<0.05），但肝指數(shù)只有降低的趨勢(shì)；陽性對(duì)照組的大鼠肝臟質(zhì)量和肝指數(shù)均明顯降低（P<0.01），見圖1。

3.2 PTFC對(duì)大鼠血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）的影響 與對(duì)照組比，模型組大鼠血清中總膽固醇在2，4周明顯升高（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC 2周與4周后，低、中、高劑量組的大鼠血清中總膽固醇均明顯降低（P<0.05，P<0.01），陽性對(duì)照組大鼠血清中總膽固醇明顯降低（P<0.05，P<0.01），PTFC 3個(gè)劑量組降血清總膽固醇作用與10 mg·kg^-1辛伐他汀相當(dāng)，見圖2。與對(duì)照組比，模型組大鼠血清中甘油三酯在2周時(shí)明顯升高（P<0.05），4周時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠血清中甘油三酯在給藥2周和4周均明顯降低（P<0.05，P<0.01），陽性對(duì)照組大鼠血清中甘油三酯在給藥2周和4周均明顯降低（P<0.01），50 mg·kg^-1PTFC的降血清甘油三酯作用優(yōu)于10 mg·kg^-1辛伐他汀，見圖2。

3.3 PTFC對(duì)血清中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），LDL-C/TC的影響 與對(duì)照組比，模型組大鼠血清中LDL-C在4周時(shí)明顯升高（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠血清中LDL-C在給藥4周時(shí)明顯降低（P<0.01），陽性對(duì)照組大鼠血清中LDL-C在給藥4周時(shí)明顯降低（P<0.01），50，100，200 mg·kg^-1PTFC的降低LDL-C作用均優(yōu)于10 mg·kg^-1辛伐他汀，見圖2。與對(duì)照組比，模型組大鼠血清中LDL-C/TC在2，4周時(shí)均明顯降低（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠血清LDL-C/TC均明顯升高（P<0.01），陽性對(duì)照組大鼠血清中LDL-C/TC比值在給藥2，4周時(shí)明顯升高（P<0.01），PTFC的升高LDL-C/TC作用與10 mg·kg^-1辛伐他汀相當(dāng)，見圖2。

3.4 PTFC對(duì)大鼠血清中血脂綜合指數(shù)（LDL-C/HDL-C）、動(dòng)脈硬化指數(shù)（AI）的影響 與對(duì)照組比，模型組大鼠血清中LDL-C/HDL-C和AI指數(shù)在4周時(shí)明顯升高（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大血清中LDL-C/HDL-C和AI指數(shù)在給藥4周時(shí)明顯降低（P<0.01），陽性對(duì)照組的大鼠血清中LDL-C/HDL-C和AI指數(shù)在給藥4周時(shí)明顯降低（P<0.01），見圖2。

3.5 PTFC對(duì)高脂血癥大鼠肝臟病理與肝功能的影響 各組觀察肝臟組織病理形態(tài)學(xué)發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組大鼠未發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性及壞死，肝細(xì)胞內(nèi)無脂滴分布，肝竇清晰可見，肝索排列整齊，匯管區(qū)無炎細(xì)胞浸潤，小葉結(jié)構(gòu)完整；模型組大鼠肝臟出現(xiàn)重度肝細(xì)胞脂肪變性，肝細(xì)胞增大，胞漿內(nèi)彌散性空泡狀脂滴多而大，重者融合為大脂滴，將細(xì)胞核擠向一邊，形似脂肪細(xì)胞，肝竇受壓變窄，肝索排列紊亂；同時(shí)可見匯管區(qū)見少量炎細(xì)胞浸潤；低劑量組大鼠個(gè)別肝臟出現(xiàn)重度肝細(xì)胞脂肪變性，其他大鼠的肝細(xì)胞脂肪變性程度為中度；胞漿內(nèi)中等細(xì)小脂滴較多，脂滴泡不大，但仍可見大脂滴，偶見肝細(xì)胞中度壞死；中劑量組大鼠半數(shù)左右肝臟出現(xiàn)中度肝細(xì)胞脂肪變性，其余大鼠的肝細(xì)胞脂肪變性程度為輕度；胞漿內(nèi)中等細(xì)小脂滴較多，脂滴泡不大，但仍可見大脂滴；高劑量組大鼠半數(shù)以上肝臟出現(xiàn)中度肝細(xì)胞脂肪變性，其余大鼠的肝細(xì)胞脂肪變性程度為輕度；胞漿內(nèi)中等細(xì)小脂滴較多，脂滴泡不大，但仍可見大脂滴，可見肝細(xì)胞中度壞死；陽性對(duì)照組大鼠個(gè)別肝臟出現(xiàn)中度肝細(xì)胞脂肪變性，其余大鼠的肝細(xì)胞脂肪變性程度為輕度；胞漿內(nèi)中等細(xì)小脂滴較多，脂滴泡不大，但仍可見大脂滴，見圖3。與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中ALT，AST在4周時(shí)均明顯升高（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，中劑量組大鼠血清ALT，AST和低劑量組大鼠血清ALT在4周時(shí)有降低趨勢(shì)；但高劑量組的大鼠血清AST在給藥4周時(shí)有升高趨勢(shì)，可能是因?yàn)楦邉┝縋TFC有一定的肝臟毒性。陽性對(duì)照組大鼠血清ALT，AST在4周時(shí)均明顯降低（P<0.05）。

3.6 PTFC對(duì)高脂血癥大鼠血清與肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的影響 與對(duì)照組比，模型組大鼠血清中SOD在4周時(shí)明顯降低（P<0.01），而MDA則明顯升高（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠血清中SOD在給藥4周時(shí)均明顯升高（P<0.01），而MDA則明顯降低（P<0.01）。陽性對(duì)照組的大鼠在給藥4周時(shí)血清中SOD明顯升高（P<0.01），MDA明顯降低（P<0.01），見圖4。與對(duì)照組比，模型組大鼠肝臟中MDA在4周時(shí)明顯升高（P<0.01），SOD明顯降低（P<0.01）；給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟中MDA在給藥4周時(shí)均明顯降低（P<0.05，P<0.01），并呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系；而SOD在給藥4周時(shí)明顯升高（P<0.05，P<0.01），陽性對(duì)照組的大鼠肝臟MDA在給藥4周時(shí)明顯降低（P<0.01），SOD明顯升高（P<0.01），見圖4。

3.7 PTFC對(duì)高脂血癥大鼠肝組織過氧化物體增殖物激活型受體α（PPAR-α）mRNA和PPAR-α，Lpic及Lpl蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比，模型組大鼠肝臟PPAR-α mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.01），給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟PPAR-α mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01），且升高程度呈一定的量效關(guān)系，陽性對(duì)照組的大鼠肝臟PPAR-α mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01），見圖5。與對(duì)照組比，模型組大鼠肝臟Lipc蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.01），給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟Lipc蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01），且升高程度呈一定的量效關(guān)系，陽性對(duì)照組的大鼠肝臟Lipc蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01），見圖5。與對(duì)照組比，模型組大鼠肝臟Lpl蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.01），給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟Lpl蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01），且升高程度呈一定的量效關(guān)系，陽性對(duì)照組的大鼠肝臟Lpl蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01），見圖5。

4 討論

醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，心血管疾病與氧化應(yīng)激損傷和自由基代謝失調(diào)有關(guān)。血管壁如有過多氧化劑時(shí)，可使LDL氧化，形成氧化LDL。氧化LDL含有類似磷酸酯酶A2活性，可以把磷脂酰膽堿變成溶血磷脂酰膽堿，對(duì)血管內(nèi)壁起不良作用。此外，亞油酸和其他脂肪酸也可以被氧化形成過氧化物。血清LPO（氧自由基氧化細(xì)胞膜上的磷脂形成的脂質(zhì)過氧化物）增多可誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，而內(nèi)皮細(xì)胞損傷在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制中起重要的作用^[8]。

此外，氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸而引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，脂質(zhì)過氧化中間產(chǎn)物自由基能導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子聚合，其終產(chǎn)物二醛類化合物如丙二醛（MDA）可導(dǎo)致蛋白分子的交聯(lián)，也可與蛋白質(zhì)的硫基反應(yīng)，使經(jīng)修飾的蛋白質(zhì)和酶失去活性，導(dǎo)致代謝異常及膜功能異常^[9]。因此，MDA在組織中的含量間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度^[10]。超氧化物歧化酶（SOD）對(duì)減少活性氧的產(chǎn)生、防止脂質(zhì)過氧化及其中間代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的損壞具有十分重要的作用。高脂飲食能誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和代謝紊亂^[11]。由圖4可見，喂食高脂飼料的模型組大鼠血清和肝臟MDA水平顯著高于對(duì)照組大鼠（P<0.01），SOD水平顯著低于對(duì)照組水平（P<0.01），說明高脂飲食一方面增加了大鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，另一方面還降低了大鼠肝臟的抗氧化能力，二者疊加增加了脂質(zhì)代謝紊亂的概率，這種促氧化物增多，抗氧化物減少的氧應(yīng)激，可致來自分子氧的游離基或活性氧產(chǎn)生增加，活性氧和多價(jià)不飽和脂肪酸反應(yīng)生成過氧化脂質(zhì)，這正是高脂造模組大鼠肝組織100%脂肪化的原因之一。實(shí)驗(yàn)灌胃給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟和血液中SOD活力在給藥4周時(shí)均明顯提高（P<0.01）；而大鼠肝臟中MDA在給藥4周時(shí)均明顯降低（P<0.05，P<0.01）。表明給予PTFC后能明顯提高機(jī)體的SOD活力，在一定程度上修復(fù)肝功能，顯著改善大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激狀況，減輕脂質(zhì)過氧化以及由過氧化引起的一系列病癥。因此，PTFC明顯上調(diào)SOD活力，減少M(fèi)DA生成，具有抑制自由基的脂質(zhì)過氧化，加強(qiáng)自由基的清除，保護(hù)抗氧化酶的活性，提示PTFC調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂可能是通過抗脂質(zhì)過氧化途徑而實(shí)現(xiàn)。

把脂肪倉庫中存儲(chǔ)的脂肪釋放出游離脂肪酸，并轉(zhuǎn)移至肝臟的過程稱為脂肪動(dòng)員，在此過程中，脂蛋白運(yùn)輸三酰甘油和膽固醇，脂肪酶則擔(dān)負(fù)著水解脂肪的作用^[9]。脂蛋白酶（Lpl）在許多組織中產(chǎn)生，主要分布在脂肪、心肌等組織的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，在肝素作用下釋放出來，它是分解血清乳糜微粒、極低密度脂蛋白中TG的脂肪酶，可將血清乳糜微粒和極低密度脂蛋白中TG水解為甘油和游離脂肪酸。肝脂酶（Lipc）主要存在于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞中，也能在肝素作用下釋放，可分解脂蛋白核心成分TG。Lpl和Lipc同時(shí)具有甘油三酯脂肪酶、甘油一酯脂肪酶及磷脂酶活性，因此，Lpl和Lipc都是脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶^[7]。PPAR-α是一類核受體，它一旦與其選擇性受體結(jié)合，轉(zhuǎn)錄活性就會(huì)改變。PPAR-α活化可以調(diào)節(jié)眾多基因的轉(zhuǎn)錄，脂肪酸氧化途徑中關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄多由PPAR-α直接調(diào)節(jié)，還能促進(jìn)VLDL甘油三酯酯解作用^[6]。高脂飲食造模4周后，由圖5可知，模型組PPAR-α mRNA表達(dá)較對(duì)照組顯著降低（P<0.01），PPAR-α mRNA只有極微弱的表達(dá)。而灌胃給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟PPAR-α mRNA表達(dá)水平較模型組均得到了顯著提升（P<0.01），且表達(dá)水平均高于對(duì)照組，陽性藥物組PPAR-α mRNA表達(dá)水平也顯著高于模型組（P<0.01）。模型組PPAR-α蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著降低（P<0.01），表達(dá)極其微弱；而灌胃給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC及10 mg·kg^-1的辛伐他汀后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟PPAR-α蛋白表達(dá)水平較模型組均有顯著提高（P<0.01），其中陽性組可恢復(fù)至對(duì)照組水平。表明PTFC能夠改善PPAR-α途徑，促進(jìn)脂肪酸的氧化分解，從而降低甘油三酯，使VLDL合成減少，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂的作用。在Lipc及Lpl蛋白表達(dá)方面，由圖5可知，4周高脂飲食后，模型組Lipc，Lpl蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著降低（P<0.01），表達(dá)極其微弱。而灌胃給予50，100，200 mg·kg^-1的PTFC及10 mg·kg^-1的辛伐他汀后，低、中、高劑量組的大鼠肝臟Lipc，Lpl蛋白表達(dá)水平均有顯著提高（P<0.01），其中200 mg·kg^-1的PTFC組及10 mg·kg^-1的辛伐他汀組可恢復(fù)至對(duì)照組水平。由此可知，PTFC在一定程度上保護(hù)了肝臟脂代謝的功能，包括減輕對(duì)肝竇的損傷，從而加速對(duì)TG的降解，起到減輕和預(yù)防高脂血癥的作用。

綜上所述，PTFC通過有效地積極調(diào)控與脂肪分解代謝有關(guān)的PPAR-α的基因表達(dá)、PPAR-α，Lpl，Lipc的蛋白表達(dá)，并提高機(jī)體的抗氧化能力，降低氧化應(yīng)激水平，實(shí)現(xiàn)對(duì)脂代謝的積極調(diào)控。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 浙江省食品藥品監(jiān)督管理局. 浙江省中藥炮制規(guī)范（2015年版）[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2016：180.

[2] 任貽軍，張宏琳，李建英. 胡柚的化學(xué)成分及藥理作用研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（21）：9976.

[3] 陳芝蕓，李劍霜，蔣劍平，等.胡柚皮黃酮對(duì)非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝組織SIRT1/PGC-1α通路的影響[J]. 中國中藥雜志，2014，39（1）：100.

[4] 李劍霜，陳芝蕓，蔣劍平，等. 胡柚皮黃酮對(duì)非酒精性脂肪性肝炎小鼠Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用[J]. 中國中藥雜志，2015，40（13）：2644.

[5] Jiang J P， Shan L T， Chen Z Y， et al. Evaluation of antioxidant-associated efficacy of flavonoid extracts from a traditional Chinese medicine Hua Ju Hong（peels of Citrus grandis （L.） Osbeck）[J]. J Ethnopharm， 2014，158： 325.

[6] Guan Y， Breyer M D.Peroxisome proliferator-activated receptors （PPARs）： novel therapeutic targets in renal disease [J]. Kidney Int， 2001，60（1）：14.

[7] Lairon D， Play B， Jourdheuil-Rahmani D. Digestible and indigestible carbohydrates： interactions with postprandial lipid metabolism [J]. J Nutr Biochem， 2007，18（4）： 217.

[8] Vladimirov Y A.Free radical， aging and degeneration disease [M]. New York：Alan Rliss，1986.

[9] 王鏡巖，朱圣庚，徐長法.生物化學(xué)·上冊(cè)[M].3版.北京：高等教育出版社，2002.

[10] Vassalle C， Lubrano V， Abbate A， et al. Determination of mitric plus nitrate and malondialdehyde in human plasma：Analytical performance and the effect of smoking and exercise[J]. Clin Chem Lab Med， 2002，40：802.

[11] Yang R， Le G， Li A， et al. Effect of antioxidant capacity on blood lipid metabolism and lipoprotein lipase activity of rats fed a high-fat diet[J]. Nutrition， 2006， 22（11/12）： 1185.

[責(zé)任編輯 張寧寧]