李曉貽，時燕萍，夏親華

(江蘇省中醫(yī)院，南京210039)

卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫是指子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過程中，異位的子宮內(nèi)膜進入卵巢皮質(zhì)生長，逐步發(fā)展而導致的囊腫型病變[1]。研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病可能與T細胞介導的免疫逃逸有關(guān)，被認為是子宮內(nèi)膜異位癥最重要的機制之一[2]。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)在腫瘤、器官移植、自身免疫病和病毒性感染等疾病中發(fā)揮著重要作用，而叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(FOXP3)是調(diào)控Treg細胞功能的主要轉(zhuǎn)錄因子[3]。B7同源體4(B7-H4)作為B7超家族的新成員，可通過抑制IL-2及T細胞增殖來抑制T細胞的免疫應答[4]，調(diào)節(jié)免疫活性，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。但FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)病中的作用尚不明確。2014年1月～2016年1月，我們檢測了30例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者囊腫組織FOXP3與B7-H4的表達，并與二者在卵巢癌組織及卵巢良性腫瘤組織中的表達進行比較，探討二者在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)病中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期在我院行手術(shù)治療的卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者囊腫組織30例作為囊腫組，患者年齡(35.37±9.55)歲，囊腫直徑>5 cm，r-AFS分期>Ⅲ期，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實為卵巢子宮內(nèi)膜異位癥囊腫。選取行手術(shù)治療的卵巢癌患者卵巢癌組織20例作為癌癥組，患者年齡(37.95±12.73)歲，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實為卵巢癌，臨床分期Ⅰc～Ⅱ期7例、Ⅲ～Ⅳ期13例。選擇行手術(shù)治療的良性卵巢腫瘤患者腫瘤組織20例作為良性組，患者年齡(37.80±10.65)歲，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實為良性卵巢腫瘤。三組患者的年齡具有可比性。

1.2 病變組織FOXP3及B7-H4檢測方法 采用免疫組化Envision兩步法。將組織標本做成蠟塊后進行切片，采用二甲苯脫蠟，微波抗原修復后，加入一抗(1∶100稀釋鼠抗人FOXP3單抗或1∶150稀釋鼠抗人 B7-H4單抗)封閉4 ℃過夜；加入Envision后進行DAB顯色，蘇木素復染，樹脂封片。陰性對照采用PBS作為一抗。FOXP3主要表達于淋巴細胞的細胞核中，B7-H4 主要表達于上皮細胞的胞質(zhì)和細胞膜中，二者均以出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒為陽性表達。首先按陽性細胞面積占全片的比例計分，≤5%計0分，>5%～25%計1分，>25～50%計2分，>50%～75%計3分，>75%計4分。其次按著色強度計分，無色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕色為3分。二者相加為最終得分，以≥3分判定為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS21.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組病變組織FOXP3及B7-H4表達比較 囊腫組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率分別為76.7%(23/30)、80.0%(24/30)，癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率分別為85.0%(17/20)、90.0%(18/20)，良性組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率分別為0、5.0%(1/20)。囊腫組及癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率均高于良性組(P均<0.05)，囊腫組與癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。

2.2 FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織中表達的相關(guān)性 卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織中FOXP3、B7-H4表達呈正相關(guān)(r=0.915，P<0.05)。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥雖屬良性病變，卻具有近似惡性腫瘤的行為學特點，如侵襲、種植、遠處轉(zhuǎn)移等。研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病后，有15%的內(nèi)膜細胞可在離開宮腔后避開機體的免疫監(jiān)視，而在子宮體以外的地方存活，導致各種異位病變的發(fā)生，這一組織學變化被認為與免疫逃逸機制有關(guān)。如異位子宮內(nèi)膜進入卵巢皮質(zhì)生長，長期發(fā)展則可導致卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)生[1]。但卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病是否與免疫逃逸有關(guān)，尚不明確。

FOXP3作為除CD4、CD25分子外的T細胞特征性標志物，可以調(diào)節(jié)T細胞的功能[5]。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXP3可以抑制T細胞因子轉(zhuǎn)錄，可以通過直接抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)和T細胞核因子(NFAT)的活性，或通過競爭性結(jié)合NFAT的DNA結(jié)合位點，從而抑制T細胞的細胞因子表達[6]。FOXP3在腫瘤細胞中可起到T細胞的作用，是腫瘤細胞免疫逃逸的機制之一[7]。研究表明，F(xiàn)OXP3可通過影響調(diào)節(jié)性T細胞的抑制功能，發(fā)揮免疫抑制的作用[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，囊腫組及癌癥組病變組織FOXP3陽性表達率均高于良性組，考慮其原因可能為子宮內(nèi)膜異位囊腫與卵巢癌在轉(zhuǎn)移行為學上相似、與FOXP3免疫逃逸有關(guān)所致。

B7-H4是通過生物信息學新發(fā)現(xiàn)的屬于B7家族的一種協(xié)同刺激因子[9]。B7-H4 mRNA在人體的腎、肝等器官中廣泛存在[10]，作為細胞弱化因子，可通過負向調(diào)節(jié)T細胞來讓腫瘤細胞避免被攻擊，為腫瘤生長提供條件。B7-H4與一個未知的T細胞受體結(jié)合，進而抑制腫瘤特異性T細胞的活化和增殖，從而幫助腫瘤細胞逃過機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視及殺傷。Shi等[11]研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤上皮細胞過表達B7H4蛋白不僅具有免疫抑制的作用，還能促使上皮細胞突變，導致腫瘤形成。雖然 B7H4 mRNA分布廣泛，然而正常組織中B7-H4蛋白的轉(zhuǎn)錄或翻譯過程受到嚴格調(diào)控，因此其表達的蛋白在正常組織中表達較少[12]。研究表明， B7-H4蛋白移植入小鼠體內(nèi)后，可使小鼠的腫瘤細胞增殖，并抑制腫瘤細胞的凋亡，表明其具有抑制腫瘤細胞凋亡的作用。相關(guān)研究表明，阻斷 B7-H4 表達可增強癌組織內(nèi)免疫細胞的殺傷力[13]。另外，B7-H4抗體也可通過抑制IL-10/Treg依賴性來抑制小鼠或人體T細胞反應，從而達到治療自身免疫性疾病的目的，也說明B7-H4有削弱機體免疫反應的作用[14]。研究表明，B7-H4可通過促進上皮惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤形成及抑制腫瘤細胞凋亡等作用促進卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。但B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)病中的作用尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)，囊腫組及癌癥組病變組織B7-H4陽性表達率均高于良性組，表明卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫及卵巢癌組織中B7-H4均明顯高于卵巢良性腫瘤組織，考慮B7-H4也可能通過免疫逃逸使子宮內(nèi)膜上皮細胞逃過機體免疫從而種植轉(zhuǎn)移。

大量研究證實，在卵巢癌組織中，巨噬細胞及卵巢癌細胞均表達B7-H4。巨噬細胞表面的B7-H4可將FOXP3+、CD25+、CD4+T細胞的抑制信號傳遞給外來抗原，此外巨噬細胞分泌的趨化因子22也可以讓T細胞定向轉(zhuǎn)移至腫瘤微環(huán)境中。因此，F(xiàn)OXP3及B7-H4在免疫逃逸機制中具有協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示，OXP3和B7-H4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和卵巢癌中均為高表達，且二者表達呈正相關(guān)。因此，F(xiàn)OXP3和B7-H4可能成為診斷子宮內(nèi)膜異位囊腫的新靶點。