吳曉燕，谷冀暉

(連云港市第一人民醫(yī)院，江蘇連云港222000)

合并高危型HPV感染的宮頸癌患者腫瘤組織FHIT、C-myc蛋白表達觀察

吳曉燕，谷冀暉

(連云港市第一人民醫(yī)院，江蘇連云港222000)

目的 觀察合并高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染的宮頸癌患者宮頸癌組織中脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)、C-myc蛋白的表達情況。方法 選擇84例宮頸癌患者的手術(shù)切除宮頸組織標本，采用快速導流雜交技術(shù)檢測HR-HPV，并根據(jù)檢測結(jié)果分為有HR-HPV感染的感染組和無HR-HPV感染的對照組。采用免疫組化SP法檢測兩組宮頸癌組織中的FHIT、C-myc蛋白。結(jié)果 84例宮頸癌患者宮頸癌組織中71例存在HR-HPV感染，為感染組；13例無HR-HPV感染，為對照組。感染組宮頸癌組織中FHIT蛋白陽性表達比例低于對照組，C-myc蛋白陽性表達比例高于對照組。Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，84例宮頸癌患者腫瘤組織中FHIT蛋白表達與C-myc蛋白表達呈負相關(guān)(Rs=-5.428，P<0.05)，F(xiàn)HIT蛋白表達與HR-HPV感染呈負相關(guān)(Rs=-2.478，P<0.05)，C-myc蛋白表達與HR-HPV感染呈正相關(guān)(Rs=3.098，P<0.05)。結(jié)論 合并高危HR-HPV感染的宮頸癌組織中FHIT蛋白表達下調(diào)、C-myc蛋白表達升高；在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中，HR-HPV感染可能與FHIT、C-myc蛋白表達異常存在一定聯(lián)系。

宮頸癌；人乳頭瘤病毒；脆性組氨酸三聯(lián)體蛋白；C-myc蛋白

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈逐年升高趨勢，發(fā)病年齡呈年輕化[1]。目前我國每年新發(fā)宮頸癌病例13.15萬，占全世界新發(fā)宮頸癌的28%，宮頸癌成為影響女性健康的重要問題[2]。宮頸癌的發(fā)病機制較為復雜，與病毒感染、性行為及分娩、癌基因激活和抑癌基因失活等多種因素有關(guān)。其中高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染是宮頸癌發(fā)病的重要危險因素。有報道顯示，90%以上的宮頸癌患者伴HR-HPV感染，但HR-HPV促進宮頸癌發(fā)生發(fā)展的機制不明[3]。脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)基因是一種重要的抑癌基因，位于人類染色體3P14.2，該基因跨越了人類染色體脆性部位FRA3B，在細胞凋亡和細胞周期調(diào)控中起到重要作用，其異常激活可使細胞獲得無限增殖能力[4]。C-myc基因是一種癌基因，其異常激活能促進細胞分裂和無限增殖，導致宮頸癌發(fā)生[5]。目前研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HIT、C-myc蛋白在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)異常表達[6]，而在宮頸癌中二者表達情況及相關(guān)性仍有待證實。為此，本研究觀察了合并HR-HPV感染的宮頸癌患者宮頸癌組織中HIT、C-myc蛋白表達情況，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年1月～2016年12月手術(shù)切除的宮頸癌組織石蠟標本84例份，來自84例患者，患者年齡24～56歲。所有患者均經(jīng)兩名高年資病理醫(yī)師診斷為宮頸癌。排除復發(fā)性宮頸癌和已接受放化療患者。按照FIGO臨床分期標準，Ⅰ期16例Ⅱ、期26例、Ⅲ期27例、Ⅳ期15例。腫瘤分化程度為低分化25例、中分化36例、高分化23例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例。

1.2 HR-HPV檢測方法 采用快速導流雜交技術(shù)檢測所有標本中的HR-HPV，試劑盒購自凱普科技公司，該試劑盒可以一次性檢測16、18、31、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8034型共16種HR-HPV以及6、11、43型共3種低危型HPV。檢出任意一種HR-HPV即列入感染組，無HR-HPV感染為對照組。

1.3 FHIT、C-myc蛋白檢測方法 采用免疫組化SP法檢測所有標本中的FHIT、C-myc蛋白。采用武漢博士德生物科技有限公司生產(chǎn)的免疫組化SP試劑盒，實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書操作。以已知陽性切片作為陽性對照，PBS替代一抗作為陰性對照。FHIT蛋白定位于細胞質(zhì)，C-myc蛋白定位于細胞核，細胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒為蛋白表達陽性。綜合染色強度和陽性細胞百分比判定結(jié)果：染色強度為無色計0分，淡黃色計1分，黃色計2分，棕黃色計3分；陽性細胞百分比≤10%計0分，>10%～25%計1分，>25%～50%計2分，>50%～75%計3分，>75%計4分；將以上兩項得分相乘，乘積為0判定為-，1～4為+，5～8為++，9～12為+++，將+、++、+++視為陽性表達，計算陽性表達率[7]。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

84例宮頸癌患者宮頸癌組織中71例存在HR-HPV感染，為感染組；13例無HR-HPV感染，為對照組。

感染組宮頸癌組織中FHIT蛋白表達- 50例、+ 11例、++ 9例、+++ 1例；對照組FHIT蛋白表達表達- 4例、+ 4例、++ 3例、+++ 2例。感染組宮頸癌組織中FHIT蛋白陽性表達比例低于對照組(P<0.05)。

感染組患者宮頸癌組織中C-myc蛋白表達- 15例、+ 18例、++ 22例、+++ 16例；對照組C-myc蛋白表達- 8例、+ 3例、++ 2例、+++ 0例。感染組宮頸癌組織C-myc蛋白陽性表達比例高于對照組(P<0.05)。

Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，84例宮頸癌患者宮頸癌組織中FHIT蛋白陽性表達與C-myc蛋白陽性表達呈負相關(guān)(Rs=-5.428，P=0.000)，F(xiàn)HIT蛋白陽性表達與HR-HPV感染呈負相關(guān)(Rs=-2.478，P=0.017)，C-myc蛋白陽性表達與HR-HPV感染呈正相關(guān)(Rs=3.098，P=0.003)。

3 討論

宮頸癌具有較長的癌前病變期，從宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)到原位癌到宮頸癌是一個長時期的連續(xù)病變過程，患者最終能否發(fā)展為宮頸癌取決于三方面因素：生物學因素(病毒)、宿主因素和環(huán)境因素。其中HPV是目前已知的能夠引起宮頸癌的重要因素。HPV屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是一種無包膜的球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出200多個亞型[8]。研究發(fā)現(xiàn)，近90%的CIN和宮頸癌患者存在HR-HPV感染，其中16型和18型是兩種最重要的HR-HPV，也是目前宮頸癌病例中最常見的兩種[9]。研究[10]發(fā)現(xiàn)，16型和18型HPV可以將自身E6、E7基因整合到宿主基因組中，其表達產(chǎn)物可使原癌基因激活、抑癌基因失活，促進腫瘤發(fā)病。

本研究應用快速導流雜交技術(shù)檢測各組HR-HPV感染情況，該方法可以一次性檢測包括16型和18型在內(nèi)的16種HR-HPV，3種低危型HPV。我們發(fā)現(xiàn)84例宮頸癌組織中71例存在HR-HPV感染，13例無HR-HPV感染，HR-HPV感染率為84.52%，與報道基本相符，證實宮頸癌患者HR-HPV感染率較高[11]。

FHIT是組氨酸三聯(lián)體基因家族的重要成員，是新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因[12]，該基因位于染色體3p14.2上，對細胞周期調(diào)控、DNA損傷修復有重要作用[13]。研究[14]發(fā)現(xiàn)，在肺癌、乳腺癌、皮膚癌、胃癌等多種惡性腫瘤中存在FHIT表達下調(diào)和缺失。一項關(guān)于宮頸癌的研究[15]表明，宮頸癌中存在FHIT基因甲基化，F(xiàn)HIT基因失活可能與宮頸癌的發(fā)生有密切關(guān)系。有學者[16]發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中存在FHIT基因低表達，其表達水平與宮頸癌的臨床分期、病理分級、腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)，并認為FHIT基因的低表達與宮頸癌患者的預后有密切關(guān)系。C-myc基因是myc基因家族的重要成員，主要對細胞增殖和細胞分裂有調(diào)控作用，也是一種重要的癌基因[17]。C-myc可通過染色體異位、基因擴增、插入增強子等方式獲得過表達能力。在大多數(shù)惡性腫瘤中存在C-myc基因的高表達。有學者[18]發(fā)現(xiàn)C-myc基因表達與宮頸癌的臨床分期、病理分級、腫瘤轉(zhuǎn)移和預后有密切關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，感染組宮頸癌組織中FHIT蛋白陽性表達比例低于對照組，C-myc蛋白陽性表達比例高于對照組，提示FHIT蛋白、C-myc蛋白表達異常與HR-HPV感染有密切關(guān)系，同時也表明FHIT蛋白和C-myc蛋白在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用。Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，84例宮頸癌患者腫瘤組織中FHIT蛋白表達與C-myc蛋白表達呈負相關(guān)，F(xiàn)HIT蛋白表達與HR-HPV感染呈負相關(guān)，C-myc蛋白表達與HR-HPV感染呈正相關(guān)，說明HR-HPV感染可能影響宮頸癌組織中FHIT、C-myc蛋白的表達。我們推測HR-HPV將自身E6、E7基因整合到宿主基因組后，其表達產(chǎn)物可使FHIT失活、C-myc激活，從而促進腫瘤進展。上述結(jié)果為宮頸癌發(fā)病機制及分子靶向治療藥物相關(guān)研究提供了新思路。同時，臨床上有望通過FHIT、C-myc與HR-HPV聯(lián)合檢測進一步提高宮頸癌的早期確診率。

綜上所述，合并高危HR-HPV感染的宮頸癌組織中FHIT蛋白表達下調(diào)、C-myc蛋白表達升高；在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中，HR-HPV感染與FHIT、C-myc蛋白表達異常之間可能存在一定聯(lián)系。

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