李婷 孫萬邦 尹崢 陳淑嫻 黃慕貞

·臨床研究·

血清Th1、Th2亞群細(xì)胞因子在眼球穿通傷患者治療前后的臨床觀察

李婷 孫萬邦 尹崢 陳淑嫻 黃慕貞

目的 探討血清Th1、Th2亞群細(xì)胞因子在眼球穿通傷患者治療前后變化的臨床意義。方法 眼球穿通傷組30例(30只眼)，并設(shè)立健康人對照組30例(30只眼)。采用ELISA法檢測血清細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10含量的動態(tài)變化。結(jié)果 (1)治療組受傷早期較對照組除IFN-γ降低外，其余均升高，其中IL-2、IL-6、IL-10升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(2)治療組治療前后檢測的4種細(xì)胞因子水平均降低，其中IL-2、IL-6、IL-10降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(3)治療組入院治療后的白細(xì)胞(WBC)和中性粒細(xì)胞(N)明顯降低，視力改善水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 眼球穿通傷患者治療前后血清中Th1、Th2亞群細(xì)胞因子的動態(tài)變化與疾病發(fā)生及病程進(jìn)展有密切聯(lián)系，并且經(jīng)抗感染治療后可降低Th1、Th2炎性因子的大量分泌和WBC、N的增殖，有利于降低自身免疫性交感性眼炎的發(fā)生。

眼球穿通傷；Th1、Th2亞群細(xì)胞因子

[J Clin Ophthalmol,2017,25:12]

眼外傷在臨床上的范疇很廣，包括各種原因造成的外眼或眼球的損害，是眼科急診的主要病種。眼外傷后的患者均伴隨有不同程度的炎癥反應(yīng)，但由于免疫豁免的作用，在眼的某些部位例如前房由于存在生理屏障而使該部位的細(xì)胞包括免疫細(xì)胞不能隨意穿越屏障進(jìn)入這些免疫隔離部位而產(chǎn)生免疫應(yīng)答[1]。在發(fā)生眼外傷尤其是眼球穿通傷時，激活產(chǎn)生的效應(yīng)T細(xì)胞及其產(chǎn)生的致炎因子進(jìn)入血液循環(huán)，引發(fā)眼內(nèi)感染和自身免疫性交感性眼炎。本研究通過檢測血清Th1、Th2亞群細(xì)胞因子在眼球穿通傷患者治療前后的變化并結(jié)合臨床進(jìn)行分析，報(bào)告如下。

資料與方法

一、病例選擇

選2014年1月至2014年12月就診于遵義醫(yī)學(xué)院附屬第五(珠海)醫(yī)院眼科的眼球穿通傷30例(30只眼)?；颊邼M足以下條件：各種原因?qū)е碌难矍虼┩▊?，包括角膜裂傷、角鞏膜裂傷、眼球破裂傷等。所有患者生命體征平穩(wěn)，排除心血管疾患等特殊人群。

二、分組

1.治療組：30例。男性22例，女性8例。年齡年齡18～55歲，平均(37.86±6.7)歲。為各種原因?qū)е碌难矍虼┩▊?。其中角膜穿通?3例、角鞏膜穿通傷伴眼內(nèi)容物脫出121例、眼球破裂傷5例。于患者受傷后就診時立即行無菌清創(chuàng)縫合術(shù)并同時靜脈采血留置血清保存。具體方法如下：取自身靜脈血2 ml，2000～4500 r/min離心15 min，待血清析出后用一次性注射器抽出并將標(biāo)本儲存于-80 ℃冰箱備用。住院期間抗感染治療，予以靜脈滴注頭孢他啶2 g，2次/d?？垢腥局委熀?周同法靜脈采血留置血清保存。

2.正常對照組：30例。年齡18～21歲，平均(18.23±2.1)歲，均來自遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)入學(xué)新生體檢人員。男性18例，女性12例。

三、檢測方法

將治療組及對照組各30例血清標(biāo)本，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析白細(xì)胞介素-2(IL-2)、γ干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)細(xì)胞因子水平，實(shí)驗(yàn)方法按照試劑盒所示。試劑盒購自上海江萊生物工程有限公司。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 11.5版軟件，所有數(shù)據(jù)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異顯著性采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、治療組治療前與對照組IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10水平檢測

治療組入院時立即采血, 患者血清與對照組血清進(jìn)行細(xì)胞因子檢測,結(jié)果見圖1 ，治療組受傷早期較對照組除IFN-γ(264.52±14.55ng/L)降低外，其余均升高。其中IL-2(990.9±245.43ng/L)，IL-6(9.46.00±5.06ng/L)，IL-10(258.49±185.71ng/L)升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 治療組治療前與對照組Th1、Th2亞群細(xì)胞因子檢測結(jié)果

注：*與對照組比較P<0.05

二、治療組治療前后IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10檢測

治療組治療前后血清細(xì)胞因子檢測水平比較見圖2，檢測的4種細(xì)胞因子均降低，其中IL-2(842.29±17.72ng/L)，IL-6(7.461±0.88ng/L)，IL-10(195.19±26.61ng/L)降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖2 治療組治療前后Th1、Th2亞群細(xì)胞因子檢測結(jié)果

注：*與治療前比較P<0.05

三、治療組治療前后的白細(xì)胞(leukocyte,WBC)、中性粒細(xì)胞(neutrophil,N)和視力改善水平檢測治療組的WBC、N和視力改善水平入院治療前后比較見圖3。治療組入院治療后的WBC和N明顯降低，視力改善水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖3 治療組治療前后的WBC、N和視力改善檢測結(jié)果

注：*與治療前比較P<0.05

討 論

眼球穿通傷發(fā)生后，激活的效應(yīng)T細(xì)胞及其產(chǎn)生的致炎因子隨著眼內(nèi)某些蛋白成分的釋出而活化，通過血液循環(huán)進(jìn)入健康眼，進(jìn)而打破生理屏障及免疫豁免機(jī)制，導(dǎo)致免疫損害從而加劇眼內(nèi)感染，甚至導(dǎo)致自身免疫性交感性眼炎的發(fā)生。初始CD4+T細(xì)胞被激活、增殖，進(jìn)一步分化為Thl、Th2、Th17亞群細(xì)胞因子，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

Th1 細(xì)胞主要產(chǎn)生IFN-γ、IL-2和TNF-β腫瘤壞死因子β(tumornecrosisfactorβ)，以往的研究證明，自身免疫性疾病的發(fā)生與Thl細(xì)胞有密切關(guān)系[2]。IL- 2不僅具有刺激T細(xì)胞增殖的能力[3]，還可促進(jìn)Th細(xì)胞的產(chǎn)生，反映了體內(nèi)Th細(xì)胞的功能，Th細(xì)胞與許多感染性疾病的免疫損傷過程都密切相關(guān)[4]。IFN-γ是Th1的標(biāo)志性細(xì)胞因子，是反映機(jī)體是否處于炎性激活狀態(tài)的一個關(guān)鍵指標(biāo)[5]。在IFN-γ的作用下，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及NK細(xì)胞被激活并發(fā)揮強(qiáng)大的致炎作用[6]。Th2細(xì)胞主要產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等，激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗體并參與誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。內(nèi)皮細(xì)胞損傷的重要原因是由于在IL-6的作用下急性期蛋白合成加速, 活性氧介導(dǎo)的氧化應(yīng)激作用導(dǎo)致[7]。IL-10 能抑制激活的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IFN-γ等[8]，是重要的負(fù)調(diào)節(jié)因子。除此之外，還可以保護(hù)機(jī)體組織在炎癥因子作用下產(chǎn)生過度的病理改變，從而對病原微生物的清除能力降低，導(dǎo)致感染加重[9]。

結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，眼外傷發(fā)生后，激活自身應(yīng)答性T細(xì)胞，其產(chǎn)生的致炎因子進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而激活Th1細(xì)胞因子的表達(dá)，同時致炎因子激活Th2細(xì)胞因子呈現(xiàn)高表達(dá)，既能促使Th0 向Th2 分化，同時也抑制Th1 細(xì)胞增殖，控制炎癥反應(yīng)加劇，調(diào)節(jié)Th1活化維持平衡。本研究中治療組較對照組IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10升高明顯, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示Th1、Th2細(xì)胞的相互作用與眼部炎癥的急性發(fā)作期有關(guān)。因此，在眼外傷發(fā)生后，及時使用抗生素抗感染治療，可有效抑制炎性細(xì)胞因子的分泌，控制機(jī)體炎癥反應(yīng)，是減少眼內(nèi)感染及自身免疫性交感性眼炎發(fā)生的重要措施。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)治療組治療后檢測的血清細(xì)胞因子水平均降低，其中IL-2、IL-6、IL-10降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且治療后的WBC和N明顯降低，視力改善水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步證實(shí)了這一理論。

另外本研究治療組治療穩(wěn)定后復(fù)測血象結(jié)果顯示各項(xiàng)指標(biāo)降低且處于正常值以下，而血清細(xì)胞因子較對照組卻仍然處于高水平表達(dá)。這說明在眼球穿通傷等患者中，誘發(fā)的免疫損害會進(jìn)一步加重組織損傷，尤其眼球穿通傷的患者受傷后如若治療不及時且不得當(dāng)會加重致病風(fēng)險。以往的研究統(tǒng)計(jì)，眼球穿通傷占交感性眼炎的發(fā)病率在國內(nèi)約1%～2%。國外約0.2%～1.0%[10]，并有研究發(fā)現(xiàn)交感性眼炎患者血清的Th1 和Th17細(xì)胞及其細(xì)胞因子明顯高于全身的水平[11]，因此Th1 和Th17 細(xì)胞及細(xì)胞因子，在交感性眼炎的病程進(jìn)展中起到重要作用。通過本研究發(fā)現(xiàn)，即使經(jīng)有效抗感染治療明顯降低血象中的白細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞等，但患者體內(nèi)仍有較高水平的免疫因子，而交感性眼炎的發(fā)生和遷延不愈的主要原因，是由于這些細(xì)胞和細(xì)胞因子之間的相互作用，使葡萄膜處于持續(xù)免疫激活狀態(tài)而導(dǎo)致[12]。因此在眼球穿通傷發(fā)生后，及時的手術(shù)治療，切除或還納脫出的葡萄膜組織，預(yù)防感染及激素治療以及定期隨診都十分關(guān)鍵。本研究結(jié)果提示在眼球穿通傷隨診的患者中設(shè)立相關(guān)臨床監(jiān)測指標(biāo)，定期復(fù)測Th1、Th2亞群細(xì)胞因子水平判斷抗感染治療后患者體內(nèi)的的免疫損害程度，從而制定更適宜的治療方案。

綜上所述，眼球穿通傷患者治療前后血清中Th1、Th2亞群細(xì)胞因子的動態(tài)變化與疾病發(fā)生及病程進(jìn)展有密切聯(lián)系，并且經(jīng)有效抗感染治療后可降低Th1、Th2炎性因子的大量分泌和白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的增殖，有利于降低自身免疫性交感性眼炎的發(fā)生。

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(收稿：2016-06-30)

Changes in serum Th1 and Th2 subgroup cytokine levels after ocular perforating injuries

LiTing,SunWanbang,YinZheng,ChenShuxian.DepartmentofOphthalmology,ZhuhaiFifthAffiliatedHospitalofZunyiMedicalUniversity,Zhuhai,Guangdong519041,China

Objective To investigate the changes in serum Th1 and Th2 subgroup cytokine levels after ocular perforating injury. Methods Subjects included 30 patients (n=30eyes)witheyeperforatinginjuryand30healthypersons.ThedynamicchangesinserumcytokinesIL-2,IFN-γ,IL-6,IL-10weredetectedbyELISA. Results 1) Except IFN-γ, serum levels of IL-2, IL-6, IL-10 all increased significantly soon after injury (P<0.05). 2)Aftertreatment,serumlevelsofall4cytokines,particularlyIL-2,IL-6andIL-10,decreased. 3)totalWBCandneutrophilalsosignificantlydecreased.Visualacuityimprovedsignificantly. Conclusions The dynamic changes of Th1 and Th2 subgroup cytokines in perforating injury is closely related to disease progression. Appropriate treatment could decrease the production of Th1 and Th2 derived inflammatory factors, proliferation of white blood cells and neutrophil, and therefore prevent further eye inflammation and reduce the risk of sympathetic ophthalmia.

Perforating injury;Th1,Th2 subgroup cytokines

10.3969/j.issn.1006-8422.2017.01.004

519041 珠海，遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬(珠海)醫(yī)院眼科

李婷(Email:741114383@qq.com)

[臨床眼科雜志，2017，25：12]