馬大勇++++++蔡舒婷++++++張斐姝++++++高強(qiáng)++++++馬克信+++++韓振蘊(yùn)

[摘要] 目的 觀察參知健腦膠囊單次灌胃對(duì)Beagle犬心血管和呼吸系統(tǒng)功能的影響。 方法 參知健腦膠囊單次灌胃給予Beagle犬的試驗(yàn)設(shè)供試品（50、200、800 mg/kg）3個(gè)劑量組和1個(gè)滅菌注射用水陰性對(duì)照組，每組6只動(dòng)物，雌雄各半。給藥容量2.5 mL/kg，給藥后連續(xù)采集4 h動(dòng)物血壓、心電、呼吸等各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)，并在檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)-5、0（給藥結(jié)束）、15、30、60、90、120、150、180、240 min對(duì)上述各指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和評(píng)估。 結(jié)果 供試品各劑量給藥組動(dòng)物的心電圖各參數(shù)值（心率、P-R間期、QRS間期、QRS電壓、Q-T間期和QTc間期）與同一時(shí)間點(diǎn)陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。未見異常心電圖波形，未發(fā)現(xiàn)對(duì)心臟傳導(dǎo)有影響。供試品各劑量給藥組動(dòng)物的收縮壓、平均動(dòng)脈壓和舒張壓與同一時(shí)間點(diǎn)陰性對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。各劑量給藥組動(dòng)物的呼吸頻率和呼吸幅度與陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 在本試驗(yàn)條件下，參知健腦膠囊單次灌胃給予Beagle犬在50、200、800 mg/kg劑量范圍內(nèi)對(duì)動(dòng)物的呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均無(wú)明顯影響。

[關(guān)鍵詞] 參知健腦膠囊；Beagle犬；單次灌胃；安全藥理學(xué)

[中圖分類號(hào)] R977 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）02（b）-0004-05

Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100040， China

[Abstract] Objective To observe the effects of single intragastric administration of Shenzhi Jiannao Capsules on the function of cardiovascular and respiratory systems in Beagle dogs. Methods The experiment of single intragastric administration of Shenzhi Jiannao Capsules for Beagle dogs were set up for 3 doses groups （50， 200， 800 mg/kg） of test samples and 1 negative control group of sterile water for injection， with 6 animals in each group， half male and female. The volume of administrated drugs was 2.5 mL/kg， after administration， the related data of blood pressure， electrocardiogram， breath and others was collected continuously for 4 h， and the data above at the time points of -5， 0 （end of administration）， 15， 30， 60， 90， 120， 150， 180， 240 min was taken statistical analysis and evaluation. Results The values of each electrocardiogram parameter （heart rate， P-R interval， QRS interval， QRS voltage， Q-T interval and QTc interval） in each dose group of test samples had no statistically significant differences compared with the negative control group of the same tine points （P > 0.05）. There were no abnormal electrocardiogram waveform and no effects on cardiac conduction. The systolic blood pressure， mean arterial pressure， diastolic blood pressure in each dose group of test samples had no statistically significant differences compared with the negative control group of the same time points （P > 0.05）. The respiratory frequency and breathing extent in each dose group of test samples had no statistically significant differences compared with the negative control group （P > 0.05）. Conclusion Under the condition of this experiment， single intragastric administration of Shenzhi Jiannao Capsules at the doses of 50， 200， 800 mg/kg for Beagle dogs has no obvious effects on the respiratory and cardiovascular systems.

[Key words] Shenzhi Jiannao Capsules； Beagle dogs； Single intragastric administration； Safety pharmacology

隨著腦血管病發(fā)病率的逐年增高，血管性癡呆（vascular dementia）的患病率也相應(yīng)提高[1]，目前北京地區(qū)血管性癡呆的患病率達(dá)1.5%[2]。目前血管性癡呆的治療手段有限，西藥作用靶點(diǎn)單一，療效難以滿足患者的需求。發(fā)揮中醫(yī)藥多靶點(diǎn)優(yōu)勢(shì)，優(yōu)化組方配伍，開發(fā)有效治療血管性癡呆的現(xiàn)代中藥是擺在中醫(yī)藥工作者面前的一項(xiàng)重要課題。參知健腦膠囊由人參、知母、赤芍等藥物提取物按一定比例優(yōu)化配伍而成[3]，具有扶正、通絡(luò)、解毒的功效，是以王永炎等提出的“正虛毒損絡(luò)阻”血管性癡呆創(chuàng)新病因病機(jī)理論為基礎(chǔ)研發(fā)而來(lái)[4-6]。本研究旨在觀察參知健腦膠囊單次灌胃對(duì)Beagle犬心血管和呼吸系統(tǒng)功能的影響，為本藥物的臨床應(yīng)用提供可靠的安全藥理毒理學(xué)研究數(shù)據(jù)。現(xiàn)將試驗(yàn)總結(jié)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

參知健腦膠囊（批號(hào)：20100907），由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院提供，臨床擬用劑量：1.05 g/（人·d），口服，療程6個(gè)月；滅菌注射用水，500 mL/瓶，批號(hào)：20100901，由北京立時(shí)達(dá)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；戊巴比妥鈉，批號(hào)：100808，25 g/瓶，北京化學(xué)試劑公司德國(guó)進(jìn)口分裝。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

MP150多導(dǎo)生理記錄儀，美國(guó)Biopac公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

7～8個(gè)月普通級(jí)Beagle犬20只，實(shí)際使用18只，雌雄各半，雌性：6.70～8.23 kg，雄性：7.40～8.93 kg；由北京瑪斯生物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：0165147，動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（京）2011-0003。剩余2只未用動(dòng)物分組結(jié)束后交給獸醫(yī)處理。

1.4 動(dòng)物分組方法

采用區(qū)段隨機(jī)分組法，將動(dòng)物分組，給出正式動(dòng)物號(hào)，確定每組動(dòng)物，并記錄每個(gè)正式動(dòng)物號(hào)對(duì)應(yīng)的ID號(hào)。

1.5 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.5.1 劑量設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為4組，分別為陰性對(duì)照組和低、中、高劑量組，具體劑量設(shè)計(jì)見表1。

1.5.2 動(dòng)物分組 首次試驗(yàn)前1 d動(dòng)物稱體重，進(jìn)行心電圖檢測(cè)。將檢疫合格的18只動(dòng)物分為3組（陰性對(duì)照組、中劑量組、高劑量組），每組6只動(dòng)物，雌雄各半。陰性對(duì)照組動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)束后，經(jīng)過(guò)18～19 d麻醉藥物消除期，用于低劑量組試驗(yàn)。見表2。

1.5.3 給藥途徑及方法 單次灌胃給藥。根據(jù)藥前測(cè)定體重用2 mL或20 mL的無(wú)菌注射器抽取所需溶液，用16號(hào)胃管經(jīng)口灌胃給藥。給藥結(jié)束后再抽取1～2 mL/kg的滅菌注射用水沖洗灌胃，確保藥液灌入胃中。每只動(dòng)物的給藥量根據(jù)藥前測(cè)量的體重計(jì)算。給藥容量為2.5 mL/kg。

1.5.4 藥物配制 陰性對(duì)照組：直接使用市售制劑，無(wú)需配制。給藥組：稱取適量的供試品，用滅菌注射用水溶解，配制濃度為20、80、320 mg/mL的供試品溶液。溶解后的供試品常溫保存。

1.5.5 觀測(cè)指標(biāo)及頻率 心電指標(biāo)：心率（次/min），P-R間期（s），QRS時(shí)限（s），QRS電壓（mV），Q-T間期（s）；血壓指標(biāo)：收縮壓（kPa），舒張壓（kPa），平均動(dòng)脈壓（kPa）；呼吸指標(biāo)：呼吸頻率（次/min），呼吸幅度或潮氣量（mL）?？紤]到前期藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)提示該藥半衰期約4 h，故檢測(cè)各指標(biāo)4 h內(nèi)變化情況，具體檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)：-5、0（給藥結(jié)束）、15、30、60、90、120、150、180、240 min。

1.5.6 試驗(yàn)步驟 試驗(yàn)前動(dòng)物稱體重，動(dòng)物禁食17～18 h。試驗(yàn)當(dāng)天將動(dòng)物用35 mg/kg的戊巴比妥鈉（可以根據(jù)犬的具體情況適當(dāng)調(diào)整劑量）靜脈注射麻醉后固定。待角膜反射消失、四肢及腹部肌肉松弛，呼吸平穩(wěn)認(rèn)為麻醉適度，用麻醉導(dǎo)管經(jīng)口腔進(jìn)行氣管插管，手術(shù)分離股動(dòng)脈，進(jìn)行股動(dòng)脈插管，聯(lián)接呼吸傳感器、血壓傳感器及心電極，觀察描記血壓、心電、呼吸各參數(shù)值。待基線平穩(wěn)后，記錄動(dòng)物各項(xiàng)指標(biāo)藥前值，按上述設(shè)計(jì)給藥，連續(xù)采集給藥后4 h動(dòng)物血壓、心電、呼吸等各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)，并在檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)-5、0、15、30、60、90、120、150、180、240 min進(jìn)行標(biāo)記。在試驗(yàn)過(guò)程中，認(rèn)真觀察動(dòng)物的臨床癥狀，及時(shí)記錄陰性對(duì)照組及給藥組試驗(yàn)期間動(dòng)物的血壓、心電、心率、心律的變化及呼吸頻率和呼吸幅度等各項(xiàng)指標(biāo)的變化及臨床癥狀，記錄每次給予麻醉藥的量和時(shí)間，異常情況要進(jìn)行詳細(xì)描述。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，Q-T間期使用QTcF校正進(jìn)行分析。QTc Fridercia'rate校正公式=QT/RR1/3。所有檢測(cè)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用雙尾檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Leneve test進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，如果方差齊（P > 0.05），采用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；如果方差不齊（P < 0.05），用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。供試品組均與陰性對(duì)照組比較，分析時(shí)既考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，也考慮生物學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)Beagle犬一般狀況的影響

試驗(yàn)過(guò)程中，犬基本上處于比較穩(wěn)定的麻醉狀態(tài)，角膜反射消失，四肢及腹部肌肉松弛，呼吸深大且平穩(wěn)。

2.2 對(duì)Beagle犬心血管系統(tǒng)的影響

參知健腦膠囊以50、200、800 mg/kg灌胃給藥后，低、中、高劑量組動(dòng)物心電圖各參數(shù)值（心率、P-R間期、QRS間期、QRS電壓、Q-T間期、QTc間期）與同一時(shí)間點(diǎn)陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），各組動(dòng)物心電圖波形均未見異常改變，未見對(duì)心臟的傳導(dǎo)有影響，見表3～8。血壓指標(biāo)：給藥后，低、中、高劑量組動(dòng)物的收縮壓、舒張壓和平均動(dòng)脈壓與同一時(shí)間點(diǎn)陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），見表9～11。

2.3 對(duì)Beagle犬呼吸系統(tǒng)功能的影響

呼吸系統(tǒng)指標(biāo)：參知健腦膠囊以50、200、800 mg/kg灌胃給藥后，各劑量給藥組動(dòng)物的呼吸頻率和呼吸幅度與同一時(shí)間點(diǎn)陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表12～13。

2.4 影響研究可靠性和造成研究工作偏離實(shí)驗(yàn)方案的異常情況

試驗(yàn)過(guò)程中，飼養(yǎng)室濕度出現(xiàn)異常波動(dòng)（33%～39%、71%～94%），最長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間不超過(guò)2.5 h，由于各劑量給藥組動(dòng)物和陰性對(duì)照組動(dòng)物是在同一條件下進(jìn)行試驗(yàn)的，并且未見動(dòng)物出現(xiàn)異常表現(xiàn)，因此認(rèn)為此波動(dòng)對(duì)研究結(jié)果的可靠性無(wú)影響。此外，未見影響研究可靠性和造成研究工作偏離實(shí)驗(yàn)方案的其他異常情況。

3 討論

在本試驗(yàn)條件下，參知健腦膠囊以50、200、800 mg/kg單次灌胃給藥后，動(dòng)物的心電、血壓、呼吸各參數(shù)值與陰性對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異，說(shuō)明供試品對(duì)Beagle犬呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均無(wú)明顯影響。

人參、知母和赤芍是臨床治療血管性癡呆的常用藥物，全方具有“扶正、祛毒、通絡(luò)”的作用。人參為五加科草本植物人參的根，具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)肺、脾、心、腎氣，生津，安神益智的功效。研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷具有廣泛的藥理作用，包括抗疲勞、抗應(yīng)激、抗自由基、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等，其中還能保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，提高記憶力[7-12]，可以用來(lái)“扶正”，但久服亦可出現(xiàn)脘腹脹滿、食欲減退、初感外邪而無(wú)虛證時(shí)若投人參，也可使表邪久滯不去，加重病情[13]。知母，苦、寒、無(wú)毒，為百合科植物知母的根莖，能清熱降火，滋陰潤(rùn)燥。研究發(fā)現(xiàn)，知母皂苷能夠抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松、抗炎、降血壓、降血糖及降血脂，另外還能抗腦缺血，改善記憶力，防治老年癡呆[14-19]，可以用來(lái)“清熱以祛毒”，該藥臨床安全性高，曾有研究表明，知母水提取液的小鼠經(jīng)口最大耐受量為生藥35.0 g/kg，相當(dāng)于人用量的145～291倍，知母乙醇提取液的小鼠經(jīng)口最大耐受量為生藥37.5 g/kg，相當(dāng)于人用量的156～312倍[20]。赤芍，苦，微寒，歸肝經(jīng)，清熱涼血，散瘀止痛。研究發(fā)現(xiàn)，赤芍化學(xué)成分除了具有保肝、抗凝血、抗血栓、抗炎、抗氧化等作用外，還有神經(jīng)保護(hù)、抗抑郁、改善學(xué)習(xí)記憶的作用，可以“散瘀涼血，以通腦絡(luò)”[21-22]，但過(guò)量服用可有心悸、頭暈等不良反應(yīng)[23]。該方劑組方精巧，療效顯著，未見有明顯的不良反應(yīng)，為全面了解該復(fù)方中藥對(duì)心血管及呼吸系統(tǒng)的可能的毒性反應(yīng)，特進(jìn)行該試驗(yàn)研究。根據(jù)本研究結(jié)果，參知健腦膠囊單次灌胃給予Beagle犬，在50、200、800 mg/kg劑量范圍內(nèi)對(duì)動(dòng)物的呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均無(wú)明顯影響。

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