劉玉才 （山東省五蓮縣動物疫病預(yù)防控制中心 262300）

動物樣品采樣方法及采樣中常見的問題

劉玉才 （山東省五蓮縣動物疫病預(yù)防控制中心 262300）

近年來，實驗室監(jiān)測在重大動物疫病的診斷及防控中發(fā)揮了不可取代的重要作用。而實驗室監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、有效性除受實驗方法、實驗設(shè)備、監(jiān)測試劑、實驗操作等因素影響外，還要受到樣品的采集、運(yùn)輸、保存等因素的影響。動物病料樣品的采集是動物疫病實驗室檢驗工作中的重要內(nèi)容。怎樣采集動物病料、采集時機(jī)、樣品的處理和保存、運(yùn)送是否合適等，都直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性，對動物疫病的診斷、流行病學(xué)的調(diào)查和免疫監(jiān)測等影響極大。筆者根據(jù)多年工作經(jīng)驗，對動物疫病樣品采樣前準(zhǔn)備、采集方法、記錄、常見問題等做了詳細(xì)的總結(jié)。

1 采集前的準(zhǔn)備

采集用的刀、剪、鑷子等用具煮沸30min，使用前用酒精擦拭、火焰消毒。裝載的器皿經(jīng)103kPa高壓30min或160℃干烤2h；使用一次性針頭和注射器；采取一種病料，使用一套器械與容器；做好采樣計劃，如要采集足夠的數(shù)量及采集的部位、種類等；還要準(zhǔn)備采集后的用具等消毒、清洗用的消毒液及容器等用品。

2 常見的不同動物樣品采集方法

2.1 血液

2.1.1 部位 牛、羊常用頸靜脈采血，豬用耳靜脈(較大的豬)或前腔靜脈(較小的豬)采血，禽用翅靜脈采血，兔從耳靜脈或頸靜脈采血。

2.1.2 操作 動物采血時，采血部位先將毛清洗干凈，用75%的酒精消毒，待干燥后采血。牛、羊、豬、兔采血一般用一次性采血器或注射器，吸出后放試管內(nèi)或直接用針頭(一般用三棱針)穿刺靜脈后，將血液滴到直徑為3～4mm(可用人用的一次性輸液管)塑料管內(nèi)(長度一般為5cm)，將口封好，豎立存放。

2.1.3 保存 如用全血樣品，樣品中加抗凝劑(在采血前直接加入)，并充分搖勻；如用血清樣品，則血液不加抗凝劑，在室溫下(不能曝曬)靜置，待血清析出，經(jīng)離心機(jī)離心分離出血清(與血凝塊分開放置)，若要長時間保存，則將血清置冰箱冷凍層保存(保存時間視冰箱的溫度)，但不可反復(fù)凍融。

2.2 組織

2.2.1 內(nèi)臟 采集動物的內(nèi)臟組織，如已死亡的動物應(yīng)盡快采集，夏天應(yīng)不超過2h，冬天不超過6h(還要視具體溫度)。采集的動物病料必須新鮮，盡可能減少污染。用于微生物學(xué)檢驗的內(nèi)臟組織塊不必太大1～2cm2(如有少量污染或不能保證無污染，組織塊取大些，切割后用)，存放在消毒過的容器內(nèi)；若用于病理組織學(xué)檢查，則要采集病灶及臨近正常組織，并存放于10%福爾馬林溶液中(如作冷凍切片用，應(yīng)將組織塊放在冷藏容器中(如作冷凍切片用，應(yīng)將組織塊放在冷藏容器中，并盡快送實驗室檢驗)。

2.2.2 尿液 在動物排尿時，用一次性塑料杯接取。

2.2.3 呼吸道 用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉內(nèi)的分泌物，蘸后立即放入特定的保存液中(如滅菌肉湯、磷酸相加緩沖液、Hanks液等)每支拭子需保存液5ml。

2.2.4 皮膚 直接采集病變部位，如病變部位的水泡液、水泡皮等。

2.2.5 腸內(nèi)容物 選病變明顯腸道的內(nèi)容物，用吸管扎穿從中吸取內(nèi)容物，放入30%甘油鹽水緩沖液保存送檢，或?qū)⒁欢斡袃?nèi)容物的腸管兩端扎緊，剪下送檢。

3 送樣

采集的樣品最好能在24h內(nèi)專人送達(dá)實驗室(夏天需4℃左右冷藏)，如在不影響檢測的情況下，又不能在24h內(nèi)送檢，可把樣品冷凍，并以此狀態(tài)送檢。送檢過程中要防止傾倒、破碎，避免樣品泄露，要注意有的樣品不能劇烈震蕩，要注意緩沖放置，所有樣品都要貼上能標(biāo)示采樣動物的詳細(xì)標(biāo)簽。

4 送檢樣品應(yīng)作的記錄

送檢樣品記錄至少要有一份備案，一份隨樣品送往化驗室。內(nèi)容至少要有一份備案，一份隨樣品送往化驗室。內(nèi)容至少包括：（1）動物飼養(yǎng)場的場名、地址、場主姓名、聯(lián)絡(luò)方式 送檢人的姓名及聯(lián)絡(luò)方式；（2）送檢樣品的名稱及數(shù)量；（3）要求做何種試驗；（4）送檢日期；（5）免疫情況；（6）目前飼養(yǎng)的數(shù)量情況及首發(fā)病例和繼發(fā)病例的日期,出現(xiàn)的臨床癥狀、發(fā)病數(shù)、死亡數(shù)、治療史等(如有病時)。

5 采樣中常見的問題

5.1 采血后血清不見析出 如果將采出的血液馬上離心，未有血清析出。操作中應(yīng)將血液斜面靜置一段時間(視當(dāng)時的氣溫，一般2h)，再進(jìn)行離心就可以分離出血清。此外，氣溫太低(在冬天氣溫較低時)，未等血清析出，血液已整體凝成塊狀，也可能不能分離出血清，這時需要適當(dāng)加溫(但不能太高)或保溫。

5.2 送檢的血清有溶血現(xiàn)象 消毒采血部位時，酒精未干，即行采血，有可能混進(jìn)酒精引起溶血；血清未離前，攜帶血液經(jīng)坐摩托車、拖拉機(jī)等劇烈震蕩，使血細(xì)胞破裂引起溶血；血液存放的容器(如試管)不潔。

5.3 禽類采血中血液難以流入塑料管 采血中有人犯過這樣的錯誤：將塑料管的一頭先封死后再進(jìn)行接血，由于塑料管內(nèi)的空氣壓力，血液不能進(jìn)入。操作中應(yīng)將塑料管兩端敞開，待血液進(jìn)入后再進(jìn)行封口。

5.4 送檢的血清變質(zhì) 有的離化驗室較遠(yuǎn)，不能及時送檢，將分離出的血清長時間存放冰箱的冷藏層，造成變質(zhì)。分離出的血清，若不能馬上送檢，應(yīng)將血清保存在冰箱的冷凍層，放置時間較長，不易變質(zhì)。

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1007-1733(2017)01-0048-02

2016–08–31）