楊艷麗

（舞鋼市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南舞鋼 462500）

舞鋼市禽衣原體病流行病學(xué)調(diào)查

楊艷麗

（舞鋼市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南舞鋼 462500）

本試驗(yàn)采集了舞鋼市8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的 20 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的待檢樣品進(jìn)行血清學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)。結(jié)果表明：8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)禽衣原體血清陽(yáng)性率分別為 45. 54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和38.92%；分子生物學(xué)檢查共檢測(cè)出陽(yáng)性數(shù)102個(gè)，陽(yáng)性率為12.23%，其中喉頭棉拭子樣品、精液樣品的陽(yáng)性率分別為12.04% 和 14.29%，證實(shí)鸚鵡熱嗜性衣原體己在雞群中流行，并可通過(guò)種蛋垂直傳播。

禽衣原體病；鸚鵡熱嗜性衣原體；人畜共患??；血清學(xué)；熒光定量 PCR

衣原體病主要是由鸚鵡熱嗜性衣原體（ACP）和流產(chǎn)嗜性衣原體感染畜禽引起的不同征候群的一種接觸性人畜共患病[1]。由于衣原體可以感染各年齡段家禽，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，所以衣原體病的危害應(yīng)引起足夠的重視。為了掌握舞鋼市禽衣原體病的流行情況，筆者于2014～2016 年對(duì)舞鋼市禽衣原體病的流行現(xiàn)狀進(jìn)行了跟蹤調(diào)查，從而為舞鋼市研究制訂禽衣原體病預(yù)防控制措施提供技術(shù)支持。

1 材料

1.1 樣品

于2014年6月～2016年5月在舞鋼市的八臺(tái)鎮(zhèn)、楊莊鎮(zhèn)、武功鄉(xiāng)、棗林鎮(zhèn)、鐵山鄉(xiāng)、尚店鎮(zhèn)、安寨鄉(xiāng)和廟街鄉(xiāng)8個(gè)不同地區(qū)的20個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）共采集血清樣品4368份，其中蛋雞血清2 000份，肉雞血清1050份，肉鴨血清1318 份；種雞精液及喉頭棉拭子樣品834份，其中精液70份，喉頭棉拭子764份。

1.2 診斷試劑

衣原體間接凝集診斷試劑盒（抗原批號(hào)為140524，稀釋液批號(hào)為140524，陽(yáng) 性 血 清 批 號(hào) 為140403，陰性血清批號(hào)為140524），購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。鸚鵡熱嗜性衣原體核酸檢測(cè)試劑盒（批號(hào)為20140615），購(gòu)自北京索奧生物醫(yī)藥科技有限公司。

2 方法

2.1 間接血凝試驗(yàn)

（1）衣原體 IHA 抗原使用前搖勻。（2） 每孔加75μl稀釋液。（3）在第1孔加入25μL被檢血清，呈4倍遞增稀釋3孔（1；4～1：16），第3孔棄去25μl。同一板上同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照各2 孔。（4）每孔加入稀釋的抗原25μL，置微型振蕩器上振蕩2 min，封口，在37℃下作用2 h 后判定結(jié)果。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：在對(duì)照孔成立的條件下，觀察各待檢血清孔，被檢血清 1：16 孔為 + + 及以上凝集者為陽(yáng)性，1∶4 孔為 ++ 及以下者為陰性。

2.2 熒光定量PCR法檢測(cè)

2.2.1 衣原體基因組DNA提取

樣品預(yù)處理。①精 液 樣 品：將 精 液 充 分 混 勻，取 0.5 ml轉(zhuǎn) 至1.5 ml干凈離心管中，加入等體積的 4% Na OH 溶液，充分混勻，室溫下放置 10 min，13 000 r/min離心5 min，棄上清液，保留沉淀；② 喉頭棉拭子樣品：取1 m l生理鹽水加入到 5 ml離心管中，充分洗滌棉拭子，將 洗 滌 液 轉(zhuǎn) 至 1.5 ml干 凈 離 心 管 中，13 000 r/min 離心 5 min，棄上清液，保留沉淀。③DNA 提取。向上述標(biāo)本中加入50μl核酸提取液 B 充分混勻，100 ℃裂解 10 min，13 000 r/min 離心 3 min，取上清液4μl 做 PCR 擴(kuò)增。④ 陰性質(zhì)控品處理。取50μl陰性質(zhì)控品加入50μl核酸提取液 B，充分振蕩，然后 100 ℃ 裂解10 min，13 000 r/min 離心 3 min，取上清液 4 μl做PCR擴(kuò)增。⑤陽(yáng)性質(zhì)控品處理。直接取4μl陽(yáng)性質(zhì)控品進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。

2.2.2 PCR擴(kuò)增

從試劑盒中取出ACP－PCRMIX、Taq 酶系，室溫融化并振蕩混勻，10000 r/min離心10s。設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N（N =樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+ 4管陽(yáng)性對(duì)照），測(cè)試反應(yīng)體系為ACP－PC RMIX 24μl、Taq 酶系2μl。

2.2.3 結(jié)果判定

（1）如果Ct值＜38，則試驗(yàn)樣品的ACP DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）= Qty－Copies /ml。（2）如果38＜Ct值＜40，為灰區(qū)，建議重新檢測(cè)，重新檢測(cè)若仍然是38＜Ct值＜40，判為陽(yáng)性，否則為陰性。（3）如果Ct值=40，則ACP DNA 含量（基因拷貝數(shù)/ml）＜1×102拷貝數(shù)/ml（低于檢測(cè)下限）。

3 結(jié)果與分析

3.1 血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

以 IHA 間接凝集法檢測(cè)4368 份被檢血清。八臺(tái)鎮(zhèn)、楊莊鎮(zhèn)、武功鄉(xiāng)、棗林鎮(zhèn)、鐵山鄉(xiāng)、尚店鎮(zhèn)、安寨鄉(xiāng)和廟街鄉(xiāng)的血清陽(yáng)性率分別為45.54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和 38.92%。舞鋼市衣原體血清陽(yáng)性率平均為36.97%。

3.2 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)出陽(yáng)性數(shù)102 個(gè)（喉頭拭子陽(yáng)性92份，精液陽(yáng)性10份），陽(yáng)性率為12.23%，其中喉頭拭子樣品、精液樣品的陽(yáng)性率分別為12.04% 和14.29%。證實(shí)鸚鵡熱嗜性衣原體已在雞群中流行，并可通過(guò)種蛋傳染給子代。

[1] 邱昌慶.禽衣原體病研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2002，（8）：16-17.

張隨玲（1969—），女，養(yǎng)職工技師，主要從事畜禽疫病防治技術(shù)研究與推廣工作。