楊艷麗

（舞鋼市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南舞鋼 462500）

舞鋼市禽衣原體病流行病學調查

楊艷麗

（舞鋼市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南舞鋼 462500）

本試驗采集了舞鋼市8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的 20 個養(yǎng)殖場（戶）的待檢樣品進行血清學和分子生物學檢測。結果表明：8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)禽衣原體血清陽性率分別為 45. 54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和38.92%；分子生物學檢查共檢測出陽性數(shù)102個，陽性率為12.23%，其中喉頭棉拭子樣品、精液樣品的陽性率分別為12.04% 和 14.29%，證實鸚鵡熱嗜性衣原體己在雞群中流行，并可通過種蛋垂直傳播。

禽衣原體??；鸚鵡熱嗜性衣原體；人畜共患病；血清學；熒光定量 PCR

衣原體病主要是由鸚鵡熱嗜性衣原體（ACP）和流產嗜性衣原體感染畜禽引起的不同征候群的一種接觸性人畜共患病[1]。由于衣原體可以感染各年齡段家禽，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經濟損失，所以衣原體病的危害應引起足夠的重視。為了掌握舞鋼市禽衣原體病的流行情況，筆者于2014～2016 年對舞鋼市禽衣原體病的流行現(xiàn)狀進行了跟蹤調查，從而為舞鋼市研究制訂禽衣原體病預防控制措施提供技術支持。

1 材料

1.1 樣品

于2014年6月～2016年5月在舞鋼市的八臺鎮(zhèn)、楊莊鎮(zhèn)、武功鄉(xiāng)、棗林鎮(zhèn)、鐵山鄉(xiāng)、尚店鎮(zhèn)、安寨鄉(xiāng)和廟街鄉(xiāng)8個不同地區(qū)的20個養(yǎng)殖場（戶）共采集血清樣品4368份，其中蛋雞血清2 000份，肉雞血清1050份，肉鴨血清1318 份；種雞精液及喉頭棉拭子樣品834份，其中精液70份，喉頭棉拭子764份。

1.2 診斷試劑

衣原體間接凝集診斷試劑盒（抗原批號為140524，稀釋液批號為140524，陽 性 血 清 批 號 為140403，陰性血清批號為140524），購自中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所。鸚鵡熱嗜性衣原體核酸檢測試劑盒（批號為20140615），購自北京索奧生物醫(yī)藥科技有限公司。

2 方法

2.1 間接血凝試驗

（1）衣原體 IHA 抗原使用前搖勻。（2） 每孔加75μl稀釋液。（3）在第1孔加入25μL被檢血清，呈4倍遞增稀釋3孔（1；4～1：16），第3孔棄去25μl。同一板上同時設陽性、陰性和空白對照各2 孔。（4）每孔加入稀釋的抗原25μL，置微型振蕩器上振蕩2 min，封口，在37℃下作用2 h 后判定結果。

結果判定標準：在對照孔成立的條件下，觀察各待檢血清孔，被檢血清 1：16 孔為 + + 及以上凝集者為陽性，1∶4 孔為 ++ 及以下者為陰性。

2.2 熒光定量PCR法檢測

2.2.1 衣原體基因組DNA提取

樣品預處理。①精 液 樣 品：將 精 液 充 分 混 勻，取 0.5 ml轉 至1.5 ml干凈離心管中，加入等體積的 4% Na OH 溶液，充分混勻，室溫下放置 10 min，13 000 r/min離心5 min，棄上清液，保留沉淀；② 喉頭棉拭子樣品：取1 m l生理鹽水加入到 5 ml離心管中，充分洗滌棉拭子，將 洗 滌 液 轉 至 1.5 ml干 凈 離 心 管 中，13 000 r/min 離心 5 min，棄上清液，保留沉淀。③DNA 提取。向上述標本中加入50μl核酸提取液 B 充分混勻，100 ℃裂解 10 min，13 000 r/min 離心 3 min，取上清液4μl 做 PCR 擴增。④ 陰性質控品處理。取50μl陰性質控品加入50μl核酸提取液 B，充分振蕩，然后 100 ℃ 裂解10 min，13 000 r/min 離心 3 min，取上清液 4 μl做PCR擴增。⑤陽性質控品處理。直接取4μl陽性質控品進行 PCR擴增。

2.2.2 PCR擴增

從試劑盒中取出ACP－PCRMIX、Taq 酶系，室溫融化并振蕩混勻，10000 r/min離心10s。設所需要的PCR反應管管數(shù)為N（N =樣本數(shù)+1管陰性對照+ 4管陽性對照），測試反應體系為ACP－PC RMIX 24μl、Taq 酶系2μl。

2.2.3 結果判定

（1）如果Ct值＜38，則試驗樣品的ACP DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）= Qty－Copies /ml。（2）如果38＜Ct值＜40，為灰區(qū)，建議重新檢測，重新檢測若仍然是38＜Ct值＜40，判為陽性，否則為陰性。（3）如果Ct值=40，則ACP DNA 含量（基因拷貝數(shù)/ml）＜1×102拷貝數(shù)/ml（低于檢測下限）。

3 結果與分析

3.1 血清學檢測結果

以 IHA 間接凝集法檢測4368 份被檢血清。八臺鎮(zhèn)、楊莊鎮(zhèn)、武功鄉(xiāng)、棗林鎮(zhèn)、鐵山鄉(xiāng)、尚店鎮(zhèn)、安寨鄉(xiāng)和廟街鄉(xiāng)的血清陽性率分別為45.54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和 38.92%。舞鋼市衣原體血清陽性率平均為36.97%。

3.2 病原學檢測結果

共檢測出陽性數(shù)102 個（喉頭拭子陽性92份，精液陽性10份），陽性率為12.23%，其中喉頭拭子樣品、精液樣品的陽性率分別為12.04% 和14.29%。證實鸚鵡熱嗜性衣原體已在雞群中流行，并可通過種蛋傳染給子代。

[1] 邱昌慶.禽衣原體病研究進展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2002，（8）：16-17.

張隨玲（1969—），女，養(yǎng)職工技師，主要從事畜禽疫病防治技術研究與推廣工作。