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        舞鋼市禽衣原體病流行病學(xué)調(diào)查

        2017-04-04 07:52:22楊艷麗
        獸醫(yī)導(dǎo)刊 2017年6期
        關(guān)鍵詞:鸚鵡熱舞鋼市衣原體

        楊艷麗

        (舞鋼市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南舞鋼 462500)

        舞鋼市禽衣原體病流行病學(xué)調(diào)查

        楊艷麗

        (舞鋼市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南舞鋼 462500)

        本試驗(yàn)采集了舞鋼市8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的 20 個養(yǎng)殖場(戶)的待檢樣品進(jìn)行血清學(xué)和分子生物學(xué)檢測。結(jié)果表明:8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)禽衣原體血清陽性率分別為 45. 54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和38.92%;分子生物學(xué)檢查共檢測出陽性數(shù)102個,陽性率為12.23%,其中喉頭棉拭子樣品、精液樣品的陽性率分別為12.04% 和 14.29%,證實(shí)鸚鵡熱嗜性衣原體己在雞群中流行,并可通過種蛋垂直傳播。

        禽衣原體病;鸚鵡熱嗜性衣原體;人畜共患??;血清學(xué);熒光定量 PCR

        衣原體病主要是由鸚鵡熱嗜性衣原體(ACP)和流產(chǎn)嗜性衣原體感染畜禽引起的不同征候群的一種接觸性人畜共患病[1]。由于衣原體可以感染各年齡段家禽,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,所以衣原體病的危害應(yīng)引起足夠的重視。為了掌握舞鋼市禽衣原體病的流行情況,筆者于2014~2016 年對舞鋼市禽衣原體病的流行現(xiàn)狀進(jìn)行了跟蹤調(diào)查,從而為舞鋼市研究制訂禽衣原體病預(yù)防控制措施提供技術(shù)支持。

        1 材料

        1.1 樣品

        于2014年6月~2016年5月在舞鋼市的八臺鎮(zhèn)、楊莊鎮(zhèn)、武功鄉(xiāng)、棗林鎮(zhèn)、鐵山鄉(xiāng)、尚店鎮(zhèn)、安寨鄉(xiāng)和廟街鄉(xiāng)8個不同地區(qū)的20個養(yǎng)殖場(戶)共采集血清樣品4368份,其中蛋雞血清2 000份,肉雞血清1050份,肉鴨血清1318 份;種雞精液及喉頭棉拭子樣品834份,其中精液70份,喉頭棉拭子764份。

        1.2 診斷試劑

        衣原體間接凝集診斷試劑盒(抗原批號為140524,稀釋液批號為140524,陽 性 血 清 批 號 為140403,陰性血清批號為140524),購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。鸚鵡熱嗜性衣原體核酸檢測試劑盒(批號為20140615),購自北京索奧生物醫(yī)藥科技有限公司。

        2 方法

        2.1 間接血凝試驗(yàn)

        (1)衣原體 IHA 抗原使用前搖勻。(2) 每孔加75μl稀釋液。(3)在第1孔加入25μL被檢血清,呈4倍遞增稀釋3孔(1;4~1:16),第3孔棄去25μl。同一板上同時設(shè)陽性、陰性和空白對照各2 孔。(4)每孔加入稀釋的抗原25μL,置微型振蕩器上振蕩2 min,封口,在37℃下作用2 h 后判定結(jié)果。

        結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):在對照孔成立的條件下,觀察各待檢血清孔,被檢血清 1:16 孔為 + + 及以上凝集者為陽性,1∶4 孔為 ++ 及以下者為陰性。

        2.2 熒光定量PCR法檢測

        2.2.1 衣原體基因組DNA提取

        樣品預(yù)處理。①精 液 樣 品:將 精 液 充 分 混 勻,取 0.5 ml轉(zhuǎn) 至1.5 ml干凈離心管中,加入等體積的 4% Na OH 溶液,充分混勻,室溫下放置 10 min,13 000 r/min離心5 min,棄上清液,保留沉淀;② 喉頭棉拭子樣品:取1 m l生理鹽水加入到 5 ml離心管中,充分洗滌棉拭子,將 洗 滌 液 轉(zhuǎn) 至 1.5 ml干 凈 離 心 管 中,13 000 r/min 離心 5 min,棄上清液,保留沉淀。③DNA 提取。向上述標(biāo)本中加入50μl核酸提取液 B 充分混勻,100 ℃裂解 10 min,13 000 r/min 離心 3 min,取上清液4μl 做 PCR 擴(kuò)增。④ 陰性質(zhì)控品處理。取50μl陰性質(zhì)控品加入50μl核酸提取液 B,充分振蕩,然后 100 ℃ 裂解10 min,13 000 r/min 離心 3 min,取上清液 4 μl做PCR擴(kuò)增。⑤陽性質(zhì)控品處理。直接取4μl陽性質(zhì)控品進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。

        2.2.2 PCR擴(kuò)增

        從試劑盒中取出ACP-PCRMIX、Taq 酶系,室溫融化并振蕩混勻,10000 r/min離心10s。設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N =樣本數(shù)+1管陰性對照+ 4管陽性對照),測試反應(yīng)體系為ACP-PC RMIX 24μl、Taq 酶系2μl。

        2.2.3 結(jié)果判定

        (1)如果Ct值<38,則試驗(yàn)樣品的ACP DNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)= Qty-Copies /ml。(2)如果38<Ct值<40,為灰區(qū),建議重新檢測,重新檢測若仍然是38<Ct值<40,判為陽性,否則為陰性。(3)如果Ct值=40,則ACP DNA 含量(基因拷貝數(shù)/ml)<1×102拷貝數(shù)/ml(低于檢測下限)。

        3 結(jié)果與分析

        3.1 血清學(xué)檢測結(jié)果

        以 IHA 間接凝集法檢測4368 份被檢血清。八臺鎮(zhèn)、楊莊鎮(zhèn)、武功鄉(xiāng)、棗林鎮(zhèn)、鐵山鄉(xiāng)、尚店鎮(zhèn)、安寨鄉(xiāng)和廟街鄉(xiāng)的血清陽性率分別為45.54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和 38.92%。舞鋼市衣原體血清陽性率平均為36.97%。

        3.2 病原學(xué)檢測結(jié)果

        共檢測出陽性數(shù)102 個(喉頭拭子陽性92份,精液陽性10份),陽性率為12.23%,其中喉頭拭子樣品、精液樣品的陽性率分別為12.04% 和14.29%。證實(shí)鸚鵡熱嗜性衣原體已在雞群中流行,并可通過種蛋傳染給子代。

        [1] 邱昌慶.禽衣原體病研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2002,(8):16-17.

        張隨玲(1969—),女,養(yǎng)職工技師,主要從事畜禽疫病防治技術(shù)研究與推廣工作。

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