張穎/天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

豬細(xì)小病毒病的綜合防治

張穎/天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

豬細(xì)小病毒病（porcine parvovirus,PPV）是引起豬繁殖障礙性疾病之一。該病主要特征為母豬孕前期感染病毒后，經(jīng)胎盤(pán)使胚胎或胎兒受到侵襲，引起母豬流產(chǎn)、死胎、胎兒畸形、胎兒木乃伊化及不孕等，同時(shí)還可引起仔豬的皮炎和腹瀉。1966年，德國(guó)人Mayr和Mahnel在進(jìn)行豬瘟病毒組織培養(yǎng)時(shí)首次發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)潛伏感染的病毒，并隨后自一些正常的豬腎細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了直徑22 nm～23 nm的病毒粒子，經(jīng)核酸鑒定為DNA。1967年，英國(guó)人Cartwringht和Huck等首次自不孕母豬、流產(chǎn)胎兒、死胎中分離到PPV，并證實(shí)了該病原的致病作用。隨后該病在比利時(shí)、美國(guó)、日本、荷蘭、澳大利亞、芬蘭、法國(guó)、加拿大等國(guó)都相繼報(bào)道。

在國(guó)內(nèi)，潘雪珠等于1983年首次分離到豬細(xì)小病毒，隨后國(guó)內(nèi)其它學(xué)者相繼在四川、廣西、江西、黑龍江等地分離到病毒，這表明豬細(xì)小病毒病已呈全國(guó)性分布。上世紀(jì)80年代到90年代中期，國(guó)內(nèi)豬群PPV感染率極高，感染率普遍在60%以上，個(gè)別省份甚至達(dá)87.5%，隨著疫苗的大量投入使用，使得PPV得到了有效的控制，到上世紀(jì)90年代中期，豬群的發(fā)病率顯著下降。但近幾年來(lái)，該病感染率和發(fā)病率又呈不斷升高的趨勢(shì)，且該病毒除能單獨(dú)引起豬繁殖障礙外，還能與在豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（porcine circovirus type 2，PCV2），可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS），即協(xié)同作用引起臨床型豬繁殖障礙性疾病。

一、病原學(xué)

豬細(xì)小病毒屬于細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒屬，病毒粒子呈圓形或六角形，直徑約20 nm，無(wú)囊膜，為單鏈線狀DNA，可在豬腎、豬睪丸細(xì)胞等豬原代細(xì)胞及PK15、ST、IBRS2等細(xì)胞中生長(zhǎng)。目前國(guó)內(nèi)PPV只有一個(gè)血清型。

二、流行病學(xué)

本病主要來(lái)自感染PPV的母豬，感染母豬的糞、尿及其分泌物可排毒，感染的公豬可從其精液、精索、附睪中分離出PPV。感染PPV母豬可通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播，所產(chǎn)的死胎、仔豬中均含有大量的病毒；大多數(shù)母豬若在懷孕前已受到自然感染，而產(chǎn)生主動(dòng)免疫力，甚至可終生免疫，并通過(guò)哺乳使仔豬從初乳中獲得高滴度的PPV抗體；若在懷孕前沒(méi)有產(chǎn)生免疫力的后備母豬，被感染和形成繁殖障礙的幾率很高；感染PPV公豬往往通過(guò)配種將PPV傳染給易感母豬；公豬、育肥豬和母豬可通過(guò)污染的飼料、環(huán)境、用具等經(jīng)呼吸道、消化道感染；另外，鼠類也能傳播PPV。

當(dāng)前豬細(xì)小病毒病已在世界各地普遍流行，尋找陰性豬群已比較困難。近些年，隨著集約化的發(fā)展，發(fā)病的季節(jié)性越來(lái)越不明顯，即一年四季均可發(fā)生。PPV的繁殖障礙性疾病已不局限于初產(chǎn)母豬，臨床病例發(fā)現(xiàn)，在3～4胎后的死胎中仍能分離到該病毒。隨著豬藍(lán)耳病在全世界的流行，加之圓環(huán)病毒病的出現(xiàn)和興風(fēng)作浪，更多的人們將注意力轉(zhuǎn)向了藍(lán)耳病和圓環(huán)病毒病，往往疏忽了PPV這個(gè)導(dǎo)致母豬繁殖障礙及仔豬死亡的主要病原，掩蓋了PPV對(duì)母豬繁殖障礙和仔豬死亡的危害，據(jù)報(bào)道，全國(guó)范圍內(nèi)PPV陽(yáng)性感染率較高，且西南地區(qū)、華南地區(qū)、華北地區(qū)的陽(yáng)性感染率顯著高于其他地區(qū)。

三、臨床癥狀

PPV感染對(duì)于母豬主要是引起繁殖障礙，可能表現(xiàn)為再度發(fā)情，或不發(fā)情、不產(chǎn)仔，或產(chǎn)仔少，或產(chǎn)出木乃伊胎。唯一的癥狀是在懷孕的中期或后期，胎兒死亡，胎水被重吸收，母豬的腹圍減小，有時(shí)可表現(xiàn)不孕、流產(chǎn)、死胎、新生仔豬死亡和產(chǎn)弱仔。具體表現(xiàn)主要取決于在妊娠期的哪個(gè)階段感染該病毒。若母豬在妊娠前期感染PPV，則引起胚胎或胎兒死亡，并被母體完全吸收；若妊娠50 d左右感染PPV，病毒可通過(guò)胎盤(pán)，選擇性地殺死胎豬，而妊娠70 d時(shí)感染PPV，大多數(shù)胎豬的免疫系統(tǒng)已經(jīng)開(kāi)始形成，已能夠?qū)Σ《井a(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答并產(chǎn)生抗體。該病毒對(duì)初產(chǎn)母豬的危害尤為明顯。對(duì)于存活的帶毒仔豬，可引起皮炎、腸炎性腹瀉、呼吸道癥狀。

四、病理變化

在非妊娠母豬及懷孕母豬感染PPV時(shí)，均看不到病理變化，但胎豬呈現(xiàn)出不同程度的發(fā)育不良，隨著體腔內(nèi)漿液性滲出物的淤積及血液滲入組織，胎兒出現(xiàn)淤血、水腫和出血，胎兒最終死亡，隨著死胎逐漸變黑及體液的重吸收，呈現(xiàn)“木乃伊”化。

五、診斷

（一）病原學(xué)檢測(cè)

最初，以腸系膜淋巴結(jié)和肝臟進(jìn)行病毒分離鑒定在PPV診斷中發(fā)揮了重要作用，但檢測(cè)結(jié)果易受胎兒死亡時(shí)間的影響，即PPV感染力隨胎兒死亡時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，而且分離病毒過(guò)程繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，易受其他病毒干擾，因此，在臨床應(yīng)用上受限。

（二）血清學(xué)診斷

1.血凝抑制試驗(yàn)。用于檢測(cè)或定量分析體液PPV抗體。操作簡(jiǎn)便、快速，適合大量樣本的檢測(cè)，在基層獸醫(yī)中廣泛使用，但是不能區(qū)分滅活疫苗和野毒感染，而且被檢血清需加熱滅活，然后用紅細(xì)胞和高嶺土吸附以減少血清中非特異性血凝抑制因子。

2.血清中和試驗(yàn)。通過(guò)檢查細(xì)胞核內(nèi)包涵體、感染細(xì)胞的熒光和細(xì)胞培養(yǎng)液中血凝素是否消失或減少來(lái)確定病毒的感染性是否被中和。曾有報(bào)道，病毒中和試驗(yàn)要比血凝抑制試驗(yàn)更敏感，但操作要比血凝抑制試驗(yàn)復(fù)雜。

3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。1989年Westenbrink F等建立，經(jīng)大量試驗(yàn)試驗(yàn)證明，利用雙抗體夾心法檢測(cè)PPV，具有較高的特異性，操作簡(jiǎn)便，便于基層的快速診斷。

4.乳膠凝集試驗(yàn)。該方法在我國(guó)率先成功地用于PPV的檢測(cè)，不需特殊設(shè)備，在現(xiàn)場(chǎng)數(shù)秒或3～5 min即可得出結(jié)果，適合基層診斷，但只能檢測(cè)IgM用于PPV定性診斷，不能進(jìn)行抗體滴度的檢測(cè)。

（三）分子生物學(xué)診斷

1.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。自1985年Mullis發(fā)明該技術(shù)，已被作為一種快速、高效、敏感性高、特異性強(qiáng)的技術(shù)廣泛運(yùn)用于病原微生物的診斷，并延伸出套式PCR、熒光定量PCR等，其中熒光定量PCR比常規(guī)PCR的檢出率更高。

2.核酸探針技術(shù)。具有快速、敏感、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，適用于疾病的早期診斷和類癥鑒別診斷，但該方法對(duì)操作要求高，只適用于實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)。

3.基因芯片技術(shù)。該技術(shù)是以核酸雜交與測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，在保持基因序列的特異性的條件下，能夠快速鑒別大量基因序列。具有特異性強(qiáng)，靈敏，快速等優(yōu)點(diǎn)，但是在制備診斷基因芯片的過(guò)程中比較復(fù)雜，成本高，不利于基層人員使用。

4.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）。該技術(shù)是2000年由日本學(xué)者建立，利用兩對(duì)引物在鏈置換DNA聚合酶的作用下，等溫?cái)U(kuò)增靶序列，并在反應(yīng)體系中加入SYBR Green I，可直接肉眼觀察反應(yīng)結(jié)果。用時(shí)短，對(duì)設(shè)備要求低，非常適合基層和現(xiàn)場(chǎng)使用，目前，該技術(shù)商品化的試劑盒已問(wèn)世。

六、防治

（一）疫苗預(yù)防

1.滅活疫苗。1976年國(guó)外已有關(guān)于PPV滅活疫苗的研究報(bào)道，20世紀(jì)80年代，在美國(guó)、澳大利亞、法國(guó)等國(guó)家普遍使用。我國(guó)于1987年由潘雪珠等首次研制成功PPV滅活疫苗，以氫氧化鋁和油水乳劑為佐劑的效果較好，當(dāng)前國(guó)內(nèi)使用的是滅活疫苗，為了簡(jiǎn)化免疫程序，降低臨床應(yīng)激反應(yīng)，豬細(xì)小病毒滅活多聯(lián)疫苗的使用比較廣泛，主要有豬細(xì)小病毒-豬偽狂犬病、豬細(xì)小病毒-乙腦病毒等二聯(lián)苗。

2.弱毒疫苗。目前的弱毒疫苗主要有NADL-2、HT株、HTSK-C株和N株，這些弱毒疫苗主要在國(guó)外應(yīng)用。最早用于臨床的NADL-2弱毒株，是PPV強(qiáng)毒株在細(xì)胞上經(jīng)連續(xù)傳50代以上致弱的，該毒株的VP2基因比強(qiáng)毒株NADL-8少300bp左右。經(jīng)大量試驗(yàn)證明，該毒株經(jīng)口鼻接種后，不能通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，而經(jīng)子宮接種，則造成胎兒死亡，因此，僅限非懷孕母豬使用。HT株是日本學(xué)者將豬細(xì)小病毒野毒株在豬腎細(xì)胞上低溫（30℃）連續(xù)傳54代產(chǎn)生，接種后可產(chǎn)生高低度的抗體，但不產(chǎn)生病毒血癥，HT-SK-C株是在豬腎細(xì)胞上培養(yǎng)并用紫外線照射后繼續(xù)傳代所得，安全性更好，但由于PPV強(qiáng)毒株的大量存在，有病毒重組及毒力反強(qiáng)的可能，因此弱毒苗的應(yīng)用受到一定的限制。

3.基因工程活病毒載體疫苗。病毒載體疫苗與弱毒疫苗相似，不僅能誘導(dǎo)強(qiáng)而持久的免疫反應(yīng)，又比傳統(tǒng)疫苗具有更高的安全性，但生產(chǎn)技術(shù)復(fù)雜，成本高，目前仍多處于實(shí)驗(yàn)室研究階段，華中農(nóng)大陳煥春院士將豬細(xì)小病毒VP2基因插入豬偽狂犬病毒，構(gòu)建重組偽狂犬病毒TK-/gG-/VP2+株及二價(jià)基因工程疫苗，于2007年通過(guò)了湖北省科技廳組織的技術(shù)鑒定，并獲得國(guó)家發(fā)表明專利及農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物安全證書(shū)。

（二）加強(qiáng)管理

1.定期對(duì)豬群進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)可疑豬，進(jìn)行淘汰，并對(duì)其豬舍、飼具、車(chē)輛等進(jìn)行徹底消毒。

2.堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，引進(jìn)種豬要進(jìn)行PPV的血凝抑制試驗(yàn)，陰性才可引進(jìn)。

3.改善飼養(yǎng)環(huán)境，驅(qū)除和消滅鼠類，嚴(yán)禁飼養(yǎng)貓、狗及鳥(niǎo)。

（略）