崔連艷，楊昭婷，倪衛(wèi)東，玄延花*

(1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2013級口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)，吉林 延吉133002；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室)

SOX9在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義

崔連艷1，楊昭婷2，倪衛(wèi)東2，玄延花2*

(1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2013級口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)，吉林 延吉133002；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室)

目的 觀察性別決定區(qū)Y框蛋白9 (sex-determining region Y box protein 9，SOX9)在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況，并探討其在食管鱗癌中的臨床病理學(xué)意義。方法 在177例食管鱗癌組織中通過免疫組織化學(xué)染色法觀察了SOX9、P21、CyclinD1、p-AKT-Thr308和 CyclinE的表達(dá)情況，并分析研究了SOX9的表達(dá)與食管鱗癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、原發(fā)腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床TNM分期、組織學(xué)分級、放療、化療和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 SOX9在食管鱗癌組織中表達(dá)與T分期(P=0.026)、TNM分期(P=0.030)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.035)和總生存率(P<0.001)密切相關(guān)。此外，食管鱗癌中過表達(dá)的SOX9和細(xì)胞周期相關(guān)因子p-AKT-Thr308(P=0.032)、P21(P=0.021) 和Cyclin D1 (P=0.028)陽性表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論 SOX9與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān),SOX9可能成為治療食管鱗癌的一個重要靶點。

食管鱗癌；SOX9;預(yù)后

(ChinJLabDiagn,2017,21:0386)

在中國，食管鱗癌的發(fā)病率占全部食管癌的60%-70%并且其預(yù)后較差，五年生存率僅僅只有15%[1]。判斷識別有效的預(yù)后因子對于靶向治療食管鱗癌具有重要的臨床價值。人性別決定區(qū)Y框蛋白9 (sex-determining region Y box protein 9，SOX9)是轉(zhuǎn)錄因子SOX家族的一個重要成員，它包含著DNA高突變的結(jié)合位點。有研究報道過表達(dá)的SOX9可增加前列腺癌的侵襲性，促進前列腺癌移植瘤中腫瘤的生長、血管生成和浸潤等[2,3]。本論文通過免疫組織化學(xué)染色法研究SOX9在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況，探討其與食管鱗癌之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究選取韓國首爾三星醫(yī)療中心病理科1998-2008年的食管鱗癌組織存檔蠟塊標(biāo)本157例和20例手術(shù)切緣處正常食管黏膜組織。食管鱗癌組織中男150例，女7例；年齡小于65歲40例，大于65歲117例。依據(jù)美國癌癥聯(lián)合會(AJCC)食管鱗癌TNM分期(2010年)標(biāo)準(zhǔn)：118例無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，39例有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；47例無淋巴轉(zhuǎn)移，110例有淋巴轉(zhuǎn)移；TNM分期I期14例，Ⅱ-Ⅳ期143例；組織學(xué)分級Ⅰ級13例，Ⅱ級116例，Ⅲ級28例。所有病例術(shù)前未經(jīng)任何放化療治療。所有病例隨訪5年以上。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

免疫組織化學(xué)染色采用EnVision法,免疫組化EnVision檢測試劑盒購自DAKO公司,SOX9抗體購自Abnova公司，p-AKT-Thr308抗體、P21抗體、CyclinD1抗體和CyclinE抗體均購自北京中杉金橋公司。染色步驟按免疫組化染色常規(guī)操作步驟進行。 為證明免疫組化檢測的特異性,實驗中應(yīng)用了兔IgG代替一抗作為對照,結(jié)果為陰性。

1.3 染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

以陽性染色細(xì)胞數(shù)所占的百分比作為主要分類依據(jù),陽性細(xì)胞數(shù)超過10%為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)低于10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計學(xué)分析采用SSPS19.0軟件進行，實驗數(shù)據(jù)之間的參數(shù)比較采用χ2檢驗，同時應(yīng)用Kaplan-Meier法繪制SOX9的表達(dá)與患者術(shù)后生存時間曲線的關(guān)系圖，P<0.05的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

SOX9、p-AKT-Thr308、P21和CyclinD1均主要表達(dá)于食管鱗癌組織的細(xì)胞核中(圖1)。SOX9在食管鱗癌組織中的表達(dá)與T分期(χ2=4.966，P=0.026)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=4.449，P=0.035)和TNM分期(χ2=4.691，P=0.030)有關(guān)；而與患者性別、年齡、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、組織學(xué)分級及化療、放療均無顯著關(guān)系(表1)。

此外，SOX9與p-AKT-Thr308(χ2=4.590，P=0.032)，P21(χ2=5.306，P=0.021)和CyclinD1(χ2=4.810，P=0.028)陽性表達(dá)呈正相關(guān)，而與CyclinE(χ2=0.005，P=0.946)陽性表達(dá)無關(guān)(表2)。Kaplan-Meier 分析表明,SOX9表達(dá)陽性組與食管鱗癌患者總生存率(χ2=14.765，P<0.001)顯著相關(guān)，而與無病生存率(χ2=2.712，P=0.100)無關(guān)(圖2)。

表1 SOX9在食管鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 SOX9在食管鱗癌組織中的表達(dá)與細(xì)胞周期相關(guān)因子的關(guān)系

圖1 食管鱗癌組織中SOX9(A),P21(B),CyclinD1(C)和pAKT-Thr308(D)的表達(dá),EnVision法

圖2 SOX9蛋白表達(dá)分別與食管鱗癌患者總生存率(A)、無病生存率(B)的關(guān)系

3 討論

SOX9 在乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌中均異常表達(dá)，并與其發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移、增殖分化及凋亡等密切相關(guān)，但SOX9 與食管鱗癌的關(guān)系尚不清楚。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SOX9在食管鱗癌組織中與T分期、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤細(xì)胞增殖密切相關(guān)。因此，對 SOX9與食管鱗癌關(guān)系的研究有利于進一步了解食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移機制，為靶向治療提供新途徑。

在Barrett食管或食管腺癌的早期階段SOX9的表達(dá)均具有重要的意義[4]。本研究結(jié)果示，SOX9表達(dá)率在食管鱗癌T1期比T2-4期顯著增高，說明SOX9參與食管鱗癌的進展過程。在食管鱗癌細(xì)胞與神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中，過表達(dá)SOX9均顯著增加腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力[5]。邵長明等[6]報道，在胃癌中SOX9的表達(dá)與腫瘤的Lauren分型、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床TNM分期和患者的5年生存率有關(guān)。此結(jié)果與我們研究結(jié)果類似，表明SOX9可能在食管鱗癌進展及預(yù)后過程中起重要的作用。SOX9對神經(jīng)纖維瘤、髓母細(xì)胞瘤、胰腺癌以及前列腺癌預(yù)后具有重要的參考價值[7]。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)SOX9高表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后密切相關(guān)，提示SOX9是評價食管鱗癌患者預(yù)后的一個關(guān)鍵因素。

大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中均存在著細(xì)胞周期功能異常,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞惡性增殖[8]。Jiang 等[9]發(fā)現(xiàn)SOX9 在肺腺癌組織中高表達(dá)，通過影響細(xì)胞周期調(diào)節(jié)分子 P21的表達(dá)促進腫瘤細(xì)胞增殖。Wang等[10]研究結(jié)果顯示，SOX9還能促進前列腺癌的增殖和侵襲。在食管鱗癌中SOX9的表達(dá)與p-AKT-Thr308、P21和CyclinD1陽性表達(dá)呈正相關(guān)。說明SOX9可通過影響細(xì)胞周期,促進食管鱗癌細(xì)胞的增殖，具體的調(diào)節(jié)機制尚有待進一步的深入研究。

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[10]Wang H,Leav I,Ibaragi S et al.SOX9 is expressed in human fetal prostate epithelium and enhances prostate cancer invasion[J].Cancer Res,2008,68:1625.

The clinical pathologic significance of SOX9 expression in esophageal squamous carcinoma

CUILian-yan,YANGZhao-ting,NIWei-dong,etal.

(2013OralMedicineSpecially,YanbianUniversityCollegeofMedicine,Yanji133002,China)

Objective To observe the expression of sex-determining region Y-box 9 (SOX9) proteins and explore the clinicopathologic significance in human esophageal squamous cell cancer (ESCC).Methods The relationship of the expression of SOX9 with sex,age,size,tumor (pT) stage,lymph node metastasis,TNM stage,grade,chemotherapy，radiotherapy and prognosis were examined,respectively.Moreover,we also investigated the SOX9,P21,CyclinD1,CyclinE and p-AKT-Thr308 expression using immunohistochemistry in 177 tissue specimens from ESCC patients.Results The results found that the SOX9 overexpression in ESCC was positively correlated with pT stage (P= 0.026),lymph node metastasis (P=0.035) and TNM stage (P=0.030) and shorter overall survival (P<0.001) markedly.In addition,SOX9 overexpression was positively association with cell cycle-related factors p-AKT-Thr308 (P=0.032),P21(P=0.021) and CyclinD1(P=0.028).Conclusion SOX9 expression was invovled in tumorigenesis,metastasis and prognosis of ESCC and SOX9 maybe a key targeted therapy of ESCC.

esophageal squamous cell cancer;SOX9;prognosis

國家自然科學(xué)基金(81460390)；延邊大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目基金(ydbksky2016169)

1007-4287(2017)03-0386-04

R735.1

A

2016-12-15)

*通訊作者