朱軍 趙琴

宮頸癌是世界上第二大婦科惡性腫瘤疾病，發(fā)病率已占到全球所有癌癥的12%左右[1]。由于基因水平表觀遺傳的改變，宮頸癌患者細(xì)胞增殖分化侵襲均不受機(jī)體控制[2]。盡管越來(lái)越多的研究顯示，宮頸癌早期檢出能夠大大降低死亡率，但一旦病情到中晚期才開(kāi)始干預(yù)治療時(shí)，其預(yù)后療效往往不佳[3-4]。已有的報(bào)道表明，宮頸癌患者年齡、腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管血管浸潤(rùn)以及血紅蛋白濃度與生存周期相關(guān)，然而這些指標(biāo)對(duì)于宮頸癌預(yù)后的指導(dǎo)作用不大[5-7]。miRNA是一類(lèi)較為保守的非編碼小RNA，主要通過(guò)靶向作用miRNA降解或抑制翻譯調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)[8]。miRNA參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡等與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的機(jī)體生理過(guò)程，已在許多不同類(lèi)型的腫瘤類(lèi)型中發(fā)現(xiàn)miRNA表達(dá)水平出現(xiàn)失調(diào)現(xiàn)象[9]。研究表明，miRNA可作為多種癌癥預(yù)后的生物標(biāo)志物[10]。因此，對(duì)于新的分子生物學(xué)標(biāo)志物的研究來(lái)作為該疾病的預(yù)后治療指標(biāo)具有重要的臨床意義。本文就宮頸癌患者miR-425-5p的表達(dá)情況進(jìn)行分析，并探討兩者的相關(guān)性。

資料與方法

1.臨床資料：選擇2014年1月—2016年4月在本院婦產(chǎn)科就診的宮頸癌患者共38例作為觀察組，年齡范圍為48～72歲，平均年齡(62.7±17.5)歲，其中宮頸癌I期患者7例、II期患者13例、III期患者18例。所有患者均通過(guò)病理醫(yī)生對(duì)病變組織切片HE染色的觀察，分期標(biāo)準(zhǔn)采用UICC/AJCC系統(tǒng)進(jìn)行確認(rèn)[11]。同時(shí)，手術(shù)獲取各患者癌旁組織。選擇同期38例正常健康人為對(duì)照組，年齡范圍45～74歲，平均年齡(63.1±16.3)歲，經(jīng)統(tǒng)計(jì)兩組年齡、體重以及BMI等一般臨床指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有納入的宮頸癌患者之前均未接受手術(shù)、化療或放療等相關(guān)治療手段。

2.檢測(cè)方法：收集所有入組患者的病變和癌旁組織以及促凝血5 ml，促凝血通過(guò)水平離心機(jī)3 000 rpm離心15 min后收集上清。采用QIAGEN miRNAeasy Mini kit試劑盒進(jìn)行抽提各組織和血清總RNA。隨后使用NanoDrop 2000儀器對(duì)提取的各樣本RNA濃度進(jìn)行檢測(cè)，OD值在1.8～2.0之間。通過(guò)ABI TaqMan miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的10 ng總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。QRT-PCR運(yùn)用ABI公司合成miR-425-5p和內(nèi)參RNU6B的Taqman探針。ABI 7500熒光定量PCR儀對(duì)靶miRNA和內(nèi)參進(jìn)行qRT-PCR，每個(gè)標(biāo)本均有3個(gè)復(fù)孔。結(jié)果統(tǒng)計(jì)采用相對(duì)表達(dá)水平，采用2-ΔCT方法，ΔCT=CT目的-CT內(nèi)參。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)分析采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.宮頸癌患者miR-425-5p在癌旁正常組織和腫瘤組織中的表達(dá)情況：由圖1可以看出，宮頸癌組織中的miR-425-5p表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，平均值的差異倍數(shù)大于3倍，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，宮頸癌患者臨床分期為II/III期的miR-425-5p表達(dá)水平則顯著高于I期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 宮頸癌患者不同組織和臨床分期miR-425-5p表達(dá)水平對(duì)比

2.兩組患者血清miR-425-5p水平的表達(dá)對(duì)比：圖2所示，與宮頸癌患者癌旁組織和腫瘤組織類(lèi)似，觀察組宮頸癌患者血清miR-425-5p表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組健康人群，差異明顯且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 兩組患者血清miR-425-5p水平的表達(dá)對(duì)比

3.宮頸癌患者病變組織miR-425-5p的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系對(duì)比：與癌旁正常組織miR-425-5p表達(dá)水平比較，腫瘤組織中其表達(dá)上調(diào)小于150%的共有20例(表1所示的低表達(dá)組)，而大于等于150%共有18例(表1所示的高表達(dá)組)。由表1可以看出，宮頸癌患者miR-425-5p病理組織中表達(dá)水平與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，即當(dāng)患者臨床分期在II-III期或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為陽(yáng)性時(shí)，其病變組織miR-425-5p表達(dá)水平較高，miR-425-5p高低表達(dá)組和低表達(dá)組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，患者年齡和腫瘤大小則與miRNA-425-5p表達(dá)水平無(wú)明顯相關(guān)性。

表1宮頸癌患者病變組織miR-425-5p高表達(dá)和低表達(dá)組臨床指標(biāo)對(duì)比[例(%)]

指標(biāo)低表達(dá)組(n=20)高表達(dá)組(n=18)年齡(歲) >607(467)8(533) ≤6013(565)10(435)腫瘤大小(cm) <2010(500)10(500) ≥2010(556)8(444)臨床分期 I9(818)2(182) II?III11(407)16(593)?淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 陽(yáng)性3(200)12(800)? 陰性17(680)6(320)

注：與低表達(dá)組比較，*P<0.05

4.宮頸癌患者血清miR-425-5p水平與臨床病理特征的關(guān)系對(duì)比：表2顯示,血清miRNA-425-5p表達(dá)水平同樣與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)性，且低表達(dá)組和高表達(dá)組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，年齡和腫瘤大小則與血清miRNA-425-5p表達(dá)水平無(wú)明顯相關(guān)性。

表2宮頸癌患者血清miR-425-5p水平與臨床病理特征的關(guān)系對(duì)比[例(%)]

指標(biāo)低表達(dá)組(n=20)高表達(dá)組(n=18)年齡(歲) >606(467)9(533) ≤6014(565)9(435)腫瘤大小(cm) <209(500)11(500) ≥209(556)9(444)臨床分期? I9(818)2(182) II?III10(407)17(593)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移? 陽(yáng)性2(200)13(800) 陰性17(680)6(320)

注：*P<0.05

討論

miRNA在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中密切相關(guān)[12]。近年來(lái)，有研究報(bào)道m(xù)iRNA分別參與促進(jìn)或抑制不同類(lèi)型腫瘤形成的生物學(xué)過(guò)程，其中包括女性高發(fā)腫瘤宮頸癌[13]。研究顯示，miR-182在宮頸癌的發(fā)生和惡化過(guò)程中呈現(xiàn)明顯的上調(diào)，表現(xiàn)出明顯的正相關(guān)性[14]。同樣，miR-150也參與宮頸癌腫瘤細(xì)胞的增殖[15]。另一方面，miRNA-506通過(guò)調(diào)控Hedgehog通路中一些轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)進(jìn)而抑制宮頸癌的生成[16]。此外，miR-195可以靶向抑制宮頸癌的增殖、遷移和侵襲等生物學(xué)過(guò)程[17]。因此，通過(guò)以上現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)，不同miRNA在宮頸癌的形成和發(fā)展過(guò)程中可以起到相反的生物學(xué)作用。miR-425-5p已在腎癌、肺癌、乳腺癌和膀胱癌中有報(bào)道指出其可作為潛在的腫瘤標(biāo)志物，而在宮頸癌的表達(dá)情況需要進(jìn)一步研究。

本研究顯示，宮頸癌患者病變組織中的miR-425-5p表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，同時(shí)患者與健康人群相比血清miR-425-5p表達(dá)水平也呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)，以上結(jié)果推測(cè)miR-425-5p可能參與宮頸癌的發(fā)生，為促腫瘤發(fā)生因子。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌II-III期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為陽(yáng)性的患者病變組織miR-425-5p的表達(dá)水平顯著高于I期和淋巴結(jié)陰性患者，其表達(dá)水平的高低與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性，且同樣的趨勢(shì)在患者外周血血清樣本中得到進(jìn)一步的確認(rèn)，表明miR-425-5p在宮頸癌形成和惡化過(guò)程中起到一定的促進(jìn)作用。因此，檢測(cè)宮頸癌患者病變組織和血清的miR-425-5p表達(dá)水平均能夠作為一個(gè)可能的標(biāo)志物檢查，以輔助臨床上對(duì)該疾病的診斷。

總之，miR-425-5p在宮頸癌患者病變組織中呈現(xiàn)明顯的上調(diào)現(xiàn)象，與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯的相關(guān)性。miR-425-5p可作為臨床宮頸癌患者確診的潛在生物學(xué)標(biāo)志物之一。

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