楊霖，范哲賢，李孝棟（福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建福州350122）

吸波面積法測定烏頭注射液中堿性物質(zhì)的含量

楊霖，范哲賢，李孝棟
（福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建福州350122）

目的測定烏頭注射液中堿性物質(zhì)的含量，考察吸波面積法的可行性。方法以烏頭堿為對照品，用吸波面積法獲得烏頭注射液提取物中的堿性物質(zhì)在200～600 nm波長下的吸光度-波長曲線下面積，計算含量。結(jié)果線性方程為：Y＝0.14542 X＋3.2404，r＝0.9993，平均加樣回收率為109.08%，RSD為1.63%，3批樣品平均含量為4 502.560 μg／mL。結(jié)論吸波面積法可用于烏頭注射液堿性物質(zhì)的含量測定。

烏頭注射液；吸波面積法；烏頭注射液；堿性物質(zhì)；含量測定

前期研究表明吸波面積和中藥復方中整體成分的總濃度呈正比［1-7］，本實驗采用吸波面積法測定烏頭注射液中堿性物質(zhì)的含量。

1 材料

1.1 儀器TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；AR-2140十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；VXH-3型微型旋渦混合器（上海躍進醫(yī)療器械廠）；TDL-4低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

1.2 試藥烏頭注射液（中藥制劑，實驗室自制）；烏頭堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110720-200410，質(zhì)量分數(shù)≥98%）；其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 烏頭注射液的制備取川烏50.02 g，草烏50.01 g，粉碎，用3倍量乙醇冷浸提取2次，每次8 h，合并乙醇提取液，備用。藥渣加5倍量水（用0.1 mol／L的鹽酸調(diào)pH至4～5）煎煮3次，每次1 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至200 mL，加入乙醇提取液，攪勻，放置24 h，濾過，回收乙醇并濃縮至無醇味，加水至200 mL（用0.1 mol／L的鹽酸調(diào)pH至3），煮沸1 h，冷卻，濾過，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6.5～7.0，加入0.15%活性炭，煮沸10 min，濾過，加注射用水至200 mL，灌封，滅菌，即得。

2.2 對照品溶液的制備稱取烏頭堿對照品5 mg，精密稱定，置25 mL瓶中，加三氯甲烷溶解，定容，即得濃度為200 μg／mL對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備精密移取烏頭注射液1 mL，用10%氨水調(diào)pH值至10～11，靜置，加4 mL三氯甲烷，渦旋2 min，3 800 r／min離心10 min，取三氯甲烷層，即得供試品溶液。另取注射用水1 mL，同法操作，即為空白參比溶液。

2.4 全波長掃描圖取對照品溶液與供試品溶液，在紫外200～600 nm波長下進行掃描，得全波長掃描圖譜，結(jié)果見圖1、圖2。

2.5 標準曲線的制備精密移取烏頭堿對照品溶液0.25、0.5、1、1.5、2、3、5 mL于5 mL瓶中，加三氯甲烷定容至刻度，即得質(zhì)量濃度梯度的對照品溶液：10、20、40、60、80、120、200 μg／mL。以三氯甲烷作空白對照，在200～600 nm波長下進行紫外掃描，用Origin 8.0軟件計算吸波面積。以吸波面積為縱坐標（Y），質(zhì)量濃度為橫坐標（X），建立烏頭堿線性方程：

圖1 對照品紫外全波長掃描圖

圖2 供試品紫外全波長掃描圖

結(jié)果表明，烏頭堿在10～200 μg／mL呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗取80 μg／mL的烏頭堿對照品溶液，在200～600 nm波長下連續(xù)測定6次，RSD為1.05%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗取烏頭注射液樣品，按2.3項操作，分別制得6份，于200～600 nm波長下進行紫外掃描，RSD為2.36%，表明該方法的重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗取烏頭注射液樣品，按2.3項操作，在0、2、4、6、8、10 h進行紫外掃描，RSD為2.98%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗取烏頭注射液樣品溶液，加入烏頭堿對照品303 μg，混勻，按2.3項操作，制得6份，在200～600 nm波長下掃描，計算加樣回收率和RSD值，結(jié)果見表1。平均加樣回收率為109.08%，RSD為1.63%。

2.10 樣品含量測定取3批樣品測定烏頭注射液中堿性物質(zhì)的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

渦旋能使溶劑與溶質(zhì)混合更充分，有利于堿性物質(zhì)的提?。?］。在吸波面積法測定中，烏頭注射液供試品溶液在進行紫外掃描時，其在241 nm處的A值大于10，故利用移液管精密吸取并將其稀釋6倍后進行測定。吸收光譜體現(xiàn)了所有紫外-可見波長內(nèi)有吸收的所有成分的總和，在堿性條件下，經(jīng)有機溶劑萃取得到的為堿性部分［9］。圖1中掃描所得供試品曲線與烏頭堿對照品較為類似，但又稍有不同。針對現(xiàn)有烏頭或附子類制劑的標準中，多采用比色法進行生物堿限量測定可能不夠完整，如果增加吸波面積法對制劑中整體堿性物質(zhì)的含量測定，將對現(xiàn)有標準具有良好的補充作用。

表1 加樣回收實驗（n＝6）

表23 批樣品含量

［1］李孝棟，李素云，張麗紅，等.吸光度-波長曲線下面積和藥物濃度的線性關系及其在中藥藥動學中的應用［J］.福建中醫(yī)藥大學學報，2012，22（6）：26-31.

［2］張麗紅，肖曉金，楊真真，等.吸波面積法對養(yǎng)血注射液在大鼠體內(nèi)藥代動力學的研究［J］.中醫(yī)臨床研究，2013，5（22）：9-11.

［3］ZHANG L H，XIAO X J，YANG Z Z，et al.A New Method of Area under the Absorbance-Wavelength Curve for Rats Total Metabolomic Pharmacokinetics from Yangxue Injection with Multicomponents［J］.Journal of Spectroscopy，2013，2013（4）：4142-4146.

［4］賴宏強，胡悅，李孝棟.基于吸波面積法對川芎組分片整體成分溶出度的考察及其體內(nèi)外相關性的研究［J］.藥學學報，2015，50（6）：788-792.

［5］賴宏強，胡悅，李孝棟.吸波面積法與HPLC法同步測定川芎組分制劑大鼠體內(nèi)絕對生物利用度［J］.中草藥，2015，46（16）：2421-2427.

［6］胡悅，賴宏強，范哲賢.白花蛇舌草組分膠囊2種方法對大鼠體內(nèi)藥代動力學［J］.中國實驗方劑學雜志，2015，21（16）：42-46.

［7］范哲賢，胡悅，賴宏強，等.透骨消痛膠囊單次與多次給藥對大鼠體內(nèi)藥代動力學行為的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2016，22（15）：92-95.

［8］楊真真，姜夢麗，張麗紅，等.酸性染料渦旋比色法測定大鼠口服麻黃湯后血漿總生物堿［J］.中草藥，2015，46（2）：231-235.

［9］匡海學.中藥化學［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2011：23.

R284.2

B

1000-338X（2017）01-0043-02

2016-11-30

楊霖（1990—），男，2015級藥劑學碩士研究生，主要從事中藥制劑及質(zhì)量控制研究。

李孝棟（1969—），男，教授。E-mail：lxdtcm@163.com