黃曉真，卜婉萍，莊婉玉，林棟（福建中醫(yī)藥大學(xué)針灸學(xué)院，福建福州350122）

電針、手針長強(qiáng)穴對FMR1基因敲除小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

黃曉真，卜婉萍，莊婉玉，林棟
（福建中醫(yī)藥大學(xué)針灸學(xué)院，福建福州350122）

目的觀察電針、手針長強(qiáng)穴對FMR1基因敲除小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測試電針、手針長強(qiáng)穴對FMR1基因敲除小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。結(jié)果①空間航行實(shí)驗(yàn)，手針組比電針組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；②空間搜索實(shí)驗(yàn)，各象限無明顯差異，F(xiàn)MR1基因敲除小鼠在電針干預(yù)后，在2、3象限停留的時(shí)間比其它2個(gè)象限長。結(jié)論手針長強(qiáng)穴能提高FMR1基因敲除小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。

FMR1基因敲除小鼠；水迷宮實(shí)驗(yàn)；學(xué)習(xí)能力；記憶能力；長強(qiáng)穴；電針；手針

脆性X綜合征（Fragile X syndrome，F(xiàn)XS）是一種由于單基因突變所導(dǎo)致的精神發(fā)育遲滯，具有明顯的遺傳傾向，其機(jī)制主要是X染色體上的CGG突變導(dǎo)致FXS發(fā)病，CGG突變使得脆性X智力低下蛋白（fragile X Mental Retardation protein，F(xiàn)MRP）的表達(dá)減少或者缺失。FMR1基因敲除小鼠模型是靶向破壞正常小鼠的FMR1基因，使其不能表達(dá)FMRP，這種模型小鼠與FRX患者有很多相似特征，如空間學(xué)習(xí)記憶障礙、樹突棘異常等，這主要是與FMRP基因缺失導(dǎo)致的發(fā)育異常有關(guān)。目前針灸臨床中多采取督脈相關(guān)穴位治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變或者是神經(jīng)功能發(fā)育障礙類疾?。?-3］。我們采用水迷宮實(shí)驗(yàn)對電針、手針長強(qiáng)穴的FMR1基因敲除小鼠進(jìn)行觀察，為開展腦發(fā)育及老化研究提供行為學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物5對SPF級性成熟FMR1基因敲除型（knockout，KO）純合子（-／-）近交系小鼠，F(xiàn)MR1基因敲除小鼠是荷蘭伊拉斯塔大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)及遺傳學(xué)研究中心Oostra BA教授、美國貝勒醫(yī)學(xué)院人類遺傳學(xué)及分子生物學(xué)研究部門David L.Nelson博士惠贈，福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心飼養(yǎng)繁殖，按SPF環(huán)境喂養(yǎng)，12 h明暗循環(huán)，自由飲食、飲水。經(jīng)基因鑒定后，選取KO小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。選擇28日齡FMR1基因敲除小鼠18只，分為空白組、手針組、電針組，每組6只。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器MT-200Morris水迷宮儀器（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）。

1.3 水迷宮實(shí)驗(yàn)基因鑒定成功后，選擇28日齡FMR1基因敲除小鼠18只，在干預(yù)前后進(jìn)行5 d的水迷宮實(shí)驗(yàn)。水迷宮是1個(gè)由不銹鋼噴塑圓柱形水池圖像采集分析系統(tǒng)組成的，水池長120 cm，寬60 cm，平臺高度30 cm（直徑10 cm），平臺低于水面1 cm，按東西南北將水池劃分為1、2、3、4個(gè)象限，象限池壁圓弧中點(diǎn)為動物入水點(diǎn)，水溫（22±5）℃。迷宮上方安置帶有顯示系統(tǒng)的攝像機(jī)，計(jì)算機(jī)自動跟蹤并記錄小鼠游泳軌跡，實(shí)驗(yàn)期間迷宮外參照物保持不變。

1.3.1 定位航行實(shí)驗(yàn)1～4天：平臺固定于第3象限中心，水面下1.5 cm。實(shí)驗(yàn)物品及人員位置固定作為小鼠空間參照物。小鼠表面貼3 cm×3 cm的白色小膠布，連續(xù)訓(xùn)練4 d，每日1次，每次從1、2、3、4不同象限入水點(diǎn)將小鼠面向池壁放入水中，檢測90 s，臺上停留超過3 s視為尋臺成功。每次測試前將動物放置臺上適應(yīng)15 s，測試完畢無論尋臺是否成功均將其放在臺上10 s。記錄小鼠從不同象限的不同點(diǎn)入水至找到平臺的時(shí)間，即逃避到平臺時(shí)間。如果小鼠在90 s內(nèi)未找到平臺者，其逃避潛伏期按90 s計(jì)算，用逃避潛伏期評價(jià)動物空間學(xué)習(xí)能力。

1.3.2 空間搜索實(shí)驗(yàn)第5天撤去平臺，從隱藏平臺所在的第3象限為入水點(diǎn)。記錄90 s內(nèi)小鼠的穿越平臺次數(shù)、目標(biāo)象限路程、時(shí)間，評估動物空間記憶能力。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。

表1提示干預(yù)后各組的FMR1基因敲除小鼠第1次穿越平臺時(shí)間比較，手針組與電針組比較具有顯著性差異（P＜0.05），且手針組較電針組較早完成第1次平臺的穿越。干預(yù)前各組的第1次穿越時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但存在手針組較電針組完成第1次穿越平臺的時(shí)間早的趨勢。表2提示各象限間無明顯差異（P＞0.05），但FMR1基因敲除小鼠在電針干預(yù)后，在2、3象限停留的時(shí)間明顯比其它2個(gè)象限長，超過總時(shí)間的25%。

表1 干預(yù)前后FMR1基因敲除小鼠第1次穿越平臺時(shí)間s

表1 干預(yù)前后FMR1基因敲除小鼠第1次穿越平臺時(shí)間s

注：與電針組比較，1）P＜0.05。

分組手針組電針組空白組干預(yù)后第1次穿越平臺時(shí)間9.877081）22.76975 17.66158小鼠／只6 6 6干預(yù)前第1次穿越平臺時(shí)間22.53671 26.00188 24.00875

3 討論

本實(shí)驗(yàn)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)對18只適齡FMR1基因敲除小鼠在電針、手針干預(yù)前后的學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)手針長強(qiáng)穴后，F(xiàn)MR1基因敲除小鼠獲取隱藏平臺位置的速度明顯比電針干預(yù)組、空白干預(yù)組快，這一結(jié)果提示手針長強(qiáng)穴后FMR1基因敲除小鼠利用水迷宮外周參照物獲取利用平臺相關(guān)信息的能力比電針干預(yù)組、空白干預(yù)組強(qiáng)，即手針長強(qiáng)穴能提高FMR1基因敲除小鼠的學(xué)習(xí)能力，這與以往的實(shí)驗(yàn)結(jié)論一致［4］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示FMR1基因敲除小鼠存在一定的記憶障礙，空間搜索實(shí)驗(yàn)結(jié)果雖然沒有顯著差異性，但FMR1基因敲除小鼠在電針干預(yù)后，在2、3象限探索的時(shí)間明顯比其它2個(gè)象限長，超過總時(shí)間的25%，說明針刺干預(yù)對FMR1基因敲除小鼠的學(xué)習(xí)記憶有影響，手針長強(qiáng)穴能改善FMR1基因敲除小鼠學(xué)習(xí)能力。

表2 小鼠4個(gè)象限空間搜索情況

表2 小鼠4個(gè)象限空間搜索情況

電針干預(yù)前19.35333 34.10667 24.27833 12.20667象限1 2 3 4手針干預(yù)前24.80500 26.83333 21.19667 17.05333空白干預(yù)前24.21667 26.89667 21.36333 17.41333電針干預(yù)后13.61833 37.02500 32.39833 6.833333手針干預(yù)后18.30333 38.01000 25.29833 7.886667空白干預(yù)后23.43333 24.22500 26.21667 16.00667

［1］林棟，吳強(qiáng).針灸對精神發(fā)育遲滯的作用機(jī)制研究進(jìn)展［J］.福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，21（2）：66-69.

［2］林棟，吳強(qiáng).針灸治療精神發(fā)育遲滯的現(xiàn)代研究及古籍記載的相關(guān)性探討［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2011，38（9）：1915-1240.

［3］韓平，王振宇，林棟，等.淺談針刺長強(qiáng)穴改善兒童智力殘疾［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（5）：1238-1240.

［4］孫衛(wèi)文，黃越玲，張維雯，等.30日齡Fmr1基因敲除小鼠的水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察［J］.解剖學(xué)研究，2011，17（1）：1-4.

R224

A

1000-338X（2017）01-0028-02

2016-11-30

國家自然科學(xué)基金資助課題（81273672）

黃曉真（1989—），女，2014級針灸推拿專業(yè)碩士研究生，主要從事針灸研究。

林棟（1977—），男，副教授。E-mail：bluelikel@sina.com