陳志斌，周春權(quán)，李雅敏，吳華嵩，梁淑敏，曾雪愛，王春娥，李希，程佑民（.福建省中醫(yī)藥研究院，福建福州5000；.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建福州5000；.泉州市中醫(yī)院，福建泉州6000；.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州50）

麻荊止咳顆粒對(duì)咳嗽變異型哮喘豚鼠BALF炎癥細(xì)胞和肺支氣管組織形態(tài)的影響

陳志斌1，2，周春權(quán)1，李雅敏3，吳華嵩1，梁淑敏4，曾雪愛1，王春娥2，李希2，程佑民1
（1.福建省中醫(yī)藥研究院，福建福州350003；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建福州350003；3.泉州市中醫(yī)院，福建泉州362000；4.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122）

目的觀察麻荊止咳顆粒對(duì)豚鼠咳嗽變異型哮喘模型BALF炎癥細(xì)胞和肺支氣管組織形態(tài)學(xué)的影響。方法用Muraki法建立咳嗽變異型哮喘豚鼠模型，觀察BALF炎癥細(xì)胞和右肺支中葉氣管組織切片的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果①麻荊止咳顆粒低、中、高劑量組BALF中EOS高于正常對(duì)照組，低于模型組，低劑量組與中、高劑量組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；②光鏡觀察各劑量組較模型組，支氣管黏膜充血及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)有不同程度的減輕，高劑量組減輕明顯，管腔內(nèi)上皮細(xì)胞脫落及黏液栓形成少見。結(jié)論麻荊止咳顆粒能減少BALF的嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量，降低支氣管黏膜炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)作用。

咳嗽變異型哮喘；麻荊止咳顆粒；BALF炎癥細(xì)胞；肺支氣管組織形態(tài)；豚鼠

麻荊止咳顆粒是我院治療咳嗽變異型哮喘的經(jīng)驗(yàn)方，具有宣肺化痰、養(yǎng)陰潤(rùn)肺、祛風(fēng)止咳的功效。為探討麻荊止咳顆粒的止咳機(jī)制，我們建立咳嗽變異型哮喘豚鼠模型，觀察麻荊止咳顆粒對(duì)豚鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）致炎癥細(xì)胞尤其特別是嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）和肺支氣管組織形態(tài)的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物體質(zhì)量（200±30）g雄性豚鼠70只，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0011。

1.1.2 藥物及試劑卵蛋白（OVA）（美國(guó)Sigma公司）；水合氯醛（青島宇龍海藻有限公司）；環(huán)磷酰胺（通化市茂祥制藥有效公司）；氫氧化鋁（上海國(guó)藥集團(tuán)）。麻荊止咳顆粒（福建中醫(yī)藥大學(xué)第二人民醫(yī)院，批號(hào)：20140923）。

1.1.3 主要儀器魚躍牌402型超聲霧化器、5417高速冷凍離心機(jī)、BX51T-PHD-J11顯微鏡（日本奧林巴斯有限公司）；Image-Pro Plus多功能真彩色細(xì)胞圖象分析管理系統(tǒng)（美國(guó)Media Cybernetics公司）；RM2015石蠟切片機(jī)（德國(guó)萊卡公司）；MDF-382E型低溫冰箱（日本三洋電機(jī)株式會(huì)社）；移液器（德國(guó)Eppendorf公司）；DSHZ-300型恒溫水浴箱（江蘇太倉醫(yī)用儀器廠）等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組70只清潔級(jí)雄性豚鼠，體質(zhì)量（200±30）g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組、模型組，每組14只。

1.2.2 造模方法根據(jù)Muraki法建立咳嗽變異型哮喘模型。操作：第1天以30 mg／kg劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺，第3天肌肉注射4%OVA溶液0.5 mL，腹腔注射2%Al（OH）30.2 mL，第14天開始，造模豚鼠放入4 L的霧化玻璃罩內(nèi)，用1%OVA溶液超聲霧化吸入2 min，霧化流量3 mL／min，隔日1次，共7次。正常組豚鼠同一時(shí)間同一途經(jīng)注射等量生理鹽水。造模后豚鼠出現(xiàn)呼吸急促，腹肌抽搐，口鼻分泌物增多，表明造模成功。

1.2.3 給藥造模后隨機(jī)分為模型組、1.25 g／（kg／d）組（低劑量組）、2.5 g／（kg／d）組（中劑量組）、5.0 g／（kg／d）組（高劑量組），灌胃給藥，每次10 mL，每日1次。正常對(duì)照組、模型組，每日1次，用10 mL生理鹽水灌胃。5組灌胃7 d，可以自由進(jìn)食豚鼠飼料和水。

1.2.4 標(biāo)本采集及檢測(cè)指標(biāo)末次給藥后24 h，稱體質(zhì)量，用10%水合氯醛0.3 mL／100 g腹腔注射，麻醉后切開頸部皮膚，充分暴露氣管，夾閉右主支氣管，于左主氣管用灌洗針注入2 mL生理鹽水，灌洗左肺，反復(fù)3次，回收灌洗液，15 000 r／min離心10 min，沉淀物涂片，瑞氏—姬姆薩染色，水洗后存放，光鏡下細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。油鏡下計(jì)數(shù)分類200個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞所占百分比。氣道黏膜及肺組織形態(tài)觀察，即打開胸腔，取右肺中葉，肺組織用生理鹽水沖洗后，放入4%多聚甲醛中固24 h，石蠟包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察每張肺組織切片的形態(tài)特征。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 5組細(xì)胞分類計(jì)數(shù)比較

表1 5組細(xì)胞分類計(jì)數(shù)比較

注：與正常組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05；與中劑量組比較，3）P＜0.05；與低劑量組比較，4）P＜0.05。

組別模型組正常組高劑量組中劑量組低劑量組n細(xì)胞分類計(jì)數(shù)／×109／L白細(xì)胞／×109／L 9.72±0.831）4.03±0.122）4.18±0.081）2）3）4）4.20±0.071）2）4.56±0.101）2）14 14 14 14 14嗜酸性粒細(xì)胞1.76±0.251）0.18±0.122）0.35±0.111）2）3）4）0.39±0.101）2）0.55±0.071）2）中性粒細(xì)胞0.81±0.071）0.37±0.022）0.35±0.011）2）4）0.39±0.042）0.41±0.021）2）淋巴細(xì)胞0.47±0.041）0.40±0.022）0.48±0.031）4）0.34±0.011）2）0.47±0.021）單核細(xì)胞6.55±0.561）3.08±0.092）3.00±0.061）2）4）3.08±0.052）3.13±0.072）（嗜酸性粒細(xì)胞／總細(xì)胞）／% 18.00±1.061）4.33±2.812）8.33±2.391）2）3）4）9.33±2.311）2）12.15±1.401）2）

2.2 肺支氣管形態(tài)觀察見圖1。

圖15 組豚鼠肺支氣管形態(tài)圖（×400）

3 討論

3.1 麻荊止咳顆由蜜麻黃、荊芥、蟬蛻、瓜蔞皮、旋覆花、蜜款冬花、北沙參、甘草等12味藥組成，方中以蜜麻黃、荊芥、旋復(fù)花祛風(fēng)降氣；瓜蔞皮清熱化痰；蟬蛻祛風(fēng)止癢，解痙止咳；密款冬花潤(rùn)肺下氣止咳；北沙參養(yǎng)陰生津潤(rùn)肺。全方共奏宣肺化痰、養(yǎng)陰潤(rùn)肺、祛風(fēng)止咳之功。治療以肺臟為重點(diǎn)，利咽祛癢并重，有別于西醫(yī)的哮喘。我們課題組前期研究［1］表明，麻荊止咳顆粒合丙卡特羅治療咳嗽變異型哮喘患者，療效明顯優(yōu)于西藥治療，同時(shí)證實(shí)麻荊止咳顆粒具有良好的止咳作用。

3.2 咳嗽變異性哮喘是由氣道炎癥引起的氣道高反應(yīng)性，通過釋放細(xì)胞因子導(dǎo)致嗜酸粒細(xì)胞（E0S）黏附于微血管內(nèi)皮細(xì)胞上，使嗜酸性粒細(xì)胞活化而產(chǎn)生顆粒蛋白，進(jìn)而引起支氣管痙攣、氣流受阻和組織損傷，是一種氣道反應(yīng)性炎癥和以氣道高反應(yīng)為特征的疾?。?-4］。目前認(rèn)為，氣道炎癥是哮喘氣道高反應(yīng)的基礎(chǔ)，在咳嗽變異型哮喘的支氣管黏膜的特征性炎癥中，EOS是關(guān)鍵的效應(yīng)細(xì)胞。

3.3 研究結(jié)果表明，麻荊止咳顆粒低、中、高劑量組均能降低咳嗽變異型哮喘豚鼠BALF中的EOS數(shù)量，減少肺組織嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，中、高劑量組療效，優(yōu)于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。肺支氣管形態(tài)學(xué)觀察表明，麻荊止咳顆粒低、中、高劑量組支氣管粘膜充血水腫及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，較模型組有不同程度的減輕，其中高劑量組明顯減輕，管腔內(nèi)上皮細(xì)胞脫落及粘液栓形成較少。本實(shí)驗(yàn)為麻荊止咳顆粒治療咳嗽變異型哮喘提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，證實(shí)麻荊止咳顆粒通過減少BALF的嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量，降低支氣管粘膜炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，減輕氣道炎癥，達(dá)到治療咳嗽的目的。

［1］陳志斌，黃民華，連林輝，等.咳平湯治療風(fēng)邪客肺、肺熱傷津型感染后咳嗽臨床觀察［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，20（4）：7-9.

［2］MENZIES-GOW A，ROBINSON DS.Eosinophils eosinophilis Cytokines（interleukim5），and antieosinophilic therapy in asthma［J］.Curr Opin Med，2002，8（8）：33-38.

［3］SHIMODA T，OBASE Y，KISHIKAWA R，et al.Comparison of central and peripheral airway inflammation between cough variant asthma and mild asthma by examination of hypertonic saline inhalation-induced sputum［J］.J Allergy Clin Immunol，2007. 19（1）：130-132．

［4］MATSUOKA H，NIIMI A，MATSUMOTO H，et al.Inflammatory subtypes in cough-variant asthma：association with maintenance doses of inhaled corticosteroids［J］.Chest，2010.138（6）：1418-1420.

R285.5

B

1000-338X（2017）01-0019-02

2016-10-26

福建省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研資助課題（WZHW201303），福建省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015R1035-2）

陳志斌（1960—），男，主任醫(yī)師，主要從事呼吸病的中西醫(yī)結(jié)合研究。