孫慧穎，史光華，黃憲章，王惠民，胡衛(wèi)江，呂磊，胡濱，王建兵，王建新，劉春龍，陳寶榮，呂京

(1.北京航天總醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100076；2.中國合格評定國家認(rèn)可委員會(huì)技術(shù)處，北京 100062；3.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部醫(yī)學(xué)校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 518034；4.南通大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226001；5.浙江清華長三角研究院浙江省應(yīng)用酶學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江嘉興 314006；6.四川邁克生物科技股份有限公司參考系統(tǒng)部，成都 610097；7.北京利德曼生化股份有限公司質(zhì)量技術(shù)中心，北京 100176)

·質(zhì)量管理研究·

基于參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值的人血清樣本量值傳遞效果評價(jià)*

孫慧穎1，史光華2，黃憲章3，王惠民4，胡衛(wèi)江5，呂磊6，胡濱1，王建兵3，王建新4，劉春龍7，陳寶榮1，呂京2

(1.北京航天總醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100076；2.中國合格評定國家認(rèn)可委員會(huì)技術(shù)處，北京 100062；3.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部醫(yī)學(xué)校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 518034；4.南通大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226001；5.浙江清華長三角研究院浙江省應(yīng)用酶學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江嘉興 314006；6.四川邁克生物科技股份有限公司參考系統(tǒng)部，成都 610097；7.北京利德曼生化股份有限公司質(zhì)量技術(shù)中心，北京 100176)

目的 研究基于參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值的人血清樣本對改進(jìn)臨床實(shí)驗(yàn)室丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、α-淀粉酶(Amy)、堿性磷酸酶(ALP)等7個(gè)酶學(xué)指標(biāo)量值傳遞的效果。方法 依托華北、華南、華東、西南4個(gè)區(qū)域的5家參考實(shí)驗(yàn)室輻射區(qū)域內(nèi)的各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)，建立相應(yīng)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室量值傳遞/溯源網(wǎng)絡(luò)；北京航天總醫(yī)院提供互換性良好、具有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性的冰凍人血清樣品(校準(zhǔn)品、評估樣品1、評估樣品2)，由4個(gè)區(qū)域5家參考實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合賦值；將樣品發(fā)送至全國48家實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室按各自的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程先測量2個(gè)評價(jià)樣品，再用提供的冰凍人血清樣品作為校準(zhǔn)品校準(zhǔn)廠家系統(tǒng)后再次測量2個(gè)評價(jià)樣品，依據(jù)WS/T 403-2012衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)判斷各實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果正確度的變化，ALT、AST觀察結(jié)果一致性的變化。結(jié)果 Amy、ALP、GGT、CK、LDH的校準(zhǔn)品、樣品1及樣品2網(wǎng)絡(luò)定值結(jié)果分別為138.7 U/L、278.5 U/L、68.3 U/L，265.3 U/L、94.5 U/L、134.4 U/L，195.8 U/L、89.0 U/L、158.9 U/L，393.7 U/L、260.0 U/L、645.3 U/L，302.0 U/L、250.0 U/L、452.7 U/L；常規(guī)測量系統(tǒng)Amy、ALP、GGT量值傳遞前樣品1及樣品2滿足WS/T 403-2012偏移要求的百分率分別為65.9%、61.0%,76.6%、78.7%,66.7%、70.8%，量值傳遞后分別為89.2%、83.8%,86.7%、80.0%,85.4%、91.7%，CK、LDH量值傳遞前樣品2滿足行標(biāo)要求的百分率為64.6%、58.3%，量值傳遞后為93.5%、84.8%；ALT、AST實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測量系統(tǒng)量值傳遞前后一致性：量值傳遞前樣品1及樣品2為12.9%、11.3%，10.2%、8.9%，量值傳遞后為9.3%、8.2%，5.6%、5.9%。結(jié)論 基于參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值人血清樣本建立的校準(zhǔn)常規(guī)系統(tǒng)量值傳遞路徑明顯提高了我國各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室Amy等7個(gè)酶學(xué)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果的可比性，值得進(jìn)一步推廣。

量值傳遞；溯源；參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)；正確度

臨床實(shí)驗(yàn)室在采用不同測量原理、測量技術(shù)的商品試劑盒測量相同檢驗(yàn)指標(biāo)時(shí)不可避免會(huì)帶來檢驗(yàn)結(jié)果可比性的問題[1]。ISO 17511[2]、ISO 15189[3]等實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理文件及我國政府部門發(fā)布的檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)一互認(rèn)的相關(guān)文件[4]均要求臨床實(shí)驗(yàn)室建立適當(dāng)方法解決臨床檢驗(yàn)結(jié)果的量值溯源[5-6]問題。本研究依托我國近十年來建立的醫(yī)學(xué)參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)[7]，以γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、淀粉酶(Amy)、堿性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)為待評價(jià)溯源傳遞指標(biāo)，自2013至2015年對上述7個(gè)參考體系完整的臨床常規(guī)生化指標(biāo)設(shè)計(jì)了互換性良好[8]、具有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性的冰凍人血清樣本校準(zhǔn)廠家系統(tǒng)的量值傳遞路徑，并在我國西南、華南、華東、華北4個(gè)地區(qū)的48家三級、二級、一級醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室試應(yīng)用，以探討該路徑對檢驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化的改進(jìn)效果。

1 材料和方法

1.1 參與定值的參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò) 華北地區(qū)為北京航天總醫(yī)院參考實(shí)驗(yàn)室(通過CNAS、JCTLM認(rèn)可)，華東地區(qū)為南通大學(xué)附屬醫(yī)院參考實(shí)驗(yàn)室(通過CNAS、JCTLM認(rèn)可)和清華長三角研究院參考實(shí)驗(yàn)室(已申請CNAS認(rèn)可)，華南地區(qū)為廣東省中醫(yī)院參考實(shí)驗(yàn)室(通過CNAS、JCTLM認(rèn)可)，西南地區(qū)是邁克公司參考系統(tǒng)部(通過CNAS、JCTLM認(rèn)可)。

1.2 參與量值傳遞效果評價(jià)的實(shí)驗(yàn)室及測量系統(tǒng) 華北地區(qū)12家，包括Olympus AU、Hitachi、Beckman系列儀器；華東地區(qū)5家，包括Olympus AU、Hitachi系列儀器；華南地區(qū)21家，包括Olympus AU、Hitachi、Abbott、Beckman、東芝邁瑞、Advia、Roche系列儀器；西南地區(qū)10家，包括Olympus AU、Hitachi、迪瑞系列儀器；以上測量系統(tǒng)均含配套及開放性質(zhì)。

1.3 校準(zhǔn)品及評價(jià)樣品 為無添加物冰凍保存的人血清基質(zhì)，由北京航天總醫(yī)院研制，均勻性、穩(wěn)定性均符合國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性，互換性良好。每個(gè)項(xiàng)目校準(zhǔn)品1個(gè)濃度，評價(jià)樣品2個(gè)濃度，均由參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值。

1.4 校準(zhǔn)品及評價(jià)樣品定值方法的選擇 7個(gè)酶學(xué)項(xiàng)目的定值方法為國際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)(IFCC)37 ℃酶活性濃度參考測量程序，ALT、AST為添加磷酸吡哆醛的方法，定值實(shí)驗(yàn)室數(shù)量ALT、AST、GGT各4家，ALP、Amy、CK、LDH各5家。

1.5 評價(jià)樣本測量方法 實(shí)驗(yàn)室按各自標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)測量樣品1和樣品2各3次；用參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值的冰凍人血清作為校準(zhǔn)品按SOP校準(zhǔn)，校準(zhǔn)后再重新測量2個(gè)濃度樣品各3次。

1.6 正確度評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 以國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 403-2012臨床生物化學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)[9]中“允許偏移”作為全國各類實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果正確度的判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 人血清樣本參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值結(jié)果及判斷標(biāo)準(zhǔn) 見表1，其中部分實(shí)驗(yàn)樣品為國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

表1 5個(gè)項(xiàng)目參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值結(jié)果及正確度判斷標(biāo)準(zhǔn)

注：#，為二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；-，不作為正確度判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 量值傳遞前后測量結(jié)果的正確度通過率 分別計(jì)算48家實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目測量結(jié)果的偏移，按WS/T 403-2012標(biāo)準(zhǔn)中允許偏移判斷測量結(jié)果正確度是否通過，匯總后判斷評估樣品的正確度通過率，CK、LDH由于樣品1發(fā)放錯(cuò)誤無統(tǒng)計(jì)結(jié)果。表2為各項(xiàng)目量值傳遞前后評價(jià)樣本測量結(jié)果的正確度通過率。5個(gè)酶的正確度通過率在量值傳遞前正確度通過率53.7%～78.7%，量值傳遞后正確度通過率75.6%～93.5%。ALP效果量值傳遞前后不明顯，其他4個(gè)項(xiàng)目效果顯著。圖1～圖3為雙樣品測量結(jié)果的Youden圖，X軸與Y軸分別為評估樣品1、2的結(jié)果，以WS/T 403-2012的允許偏移為合格框，圖中可明顯觀察到測量結(jié)果正確度通過率提高。

表2 Amy 5個(gè)項(xiàng)目評估樣品量值傳遞前后正確度通過率(%)

注：A,量值傳遞前；B，量值傳遞后。

圖1 Amy測量系統(tǒng)量值傳遞前后測量結(jié)果正確度Youden圖

注：A,量值傳遞前；B，量值傳遞后。

圖2 ALP測量系統(tǒng)量值傳遞前后測量結(jié)果正確度Youden圖

注：A,量值傳遞前；B，量值傳遞后。

圖3 GGT測量系統(tǒng)量值傳遞前后測量結(jié)果正確度Youden圖

2.3 ALT、AST量值傳遞前后測量結(jié)果的一致性 計(jì)算48家實(shí)驗(yàn)室ALT、AST結(jié)果量值傳遞前后的測量變異系數(shù)(CV),見表3。ALT、AST量值傳遞前48家實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果總的變異系數(shù)為8.9%～12.9%，量值傳遞后為5.6%～9.3%。

表3 ALT、AST評估樣品測量變異的結(jié)果[CV(%)]

3 討論

根據(jù)ISO 17511討論稿等[10]采用有互換性、可溯源的樣品校準(zhǔn)常規(guī)系統(tǒng)是解決常規(guī)系統(tǒng)測量結(jié)果正確度的有效途徑。為驗(yàn)證該路徑解決臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可比的效果，2013～2015年在我國4大區(qū)域48家各級醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取得了滿意的效果，見表2、3及圖1～3。

有調(diào)查顯示，我國7個(gè)酶學(xué)項(xiàng)目的偏移符合率很低[11]，改善血清酶分析質(zhì)量首先需要解決正確度的問題，因此迫切需要解決能夠保證檢測結(jié)果溯源性的有效量值傳遞路徑。本研究結(jié)果顯示，Amy、CK、LDH、GGT經(jīng)過量值傳遞后單一樣品正確度通過率和雙樣品正確度通過率均能達(dá)到80%以上，說明該量值傳遞路徑可明顯提高我國各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室Amy等常規(guī)酶學(xué)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性，有效解決測量結(jié)果的正確度。但在研究中發(fā)現(xiàn)，48家實(shí)驗(yàn)室酶學(xué)測量系統(tǒng)復(fù)雜，部分實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果的精密度較差，個(gè)別實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)室差異較大，這可能會(huì)導(dǎo)致部分測量結(jié)果不能真實(shí)體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室測量結(jié)果的正確度。因?yàn)闇y量精密度是保證正確度的前提，因此各實(shí)驗(yàn)室在解決測量結(jié)果正確度之前，須保證測量方法的性能符合要求。

對于ALT、AST，由于國內(nèi)大部分測量系統(tǒng)采用不添加磷酸吡哆醛(PAP)的方法，與IFCC方法原理不一致，因此本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅以測量變異系數(shù)來觀察量值傳遞效果，結(jié)果顯示，該量值傳遞路徑可提高測量結(jié)果的一致性。在今后的研究中可進(jìn)行無磷酸吡哆醛方法的正確度驗(yàn)證，以滿足國內(nèi)常規(guī)檢測的需要。

值得注意的是，ALP在酶學(xué)研究中起步最晚，且常規(guī)測量系統(tǒng)中緩沖體系不一致，有2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、2-乙基氨基乙醇等。量值傳遞前ALP雙樣品正確度通過率接近70%，雖然量值傳遞后正確度通過率提升不明顯，但結(jié)果更集中。另外，CK、LDH的樣品1由于定值樣品與發(fā)放樣品不一致，因此未能進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

綜上，利用有互換性、可溯源的樣品校準(zhǔn)常規(guī)系統(tǒng)的量值傳遞路徑可有效改善Amy等臨床常規(guī)酶學(xué)項(xiàng)目測量結(jié)果的溯源性，但不能解決ALP等項(xiàng)目測量結(jié)果溯源性的問題，還需關(guān)注溯源性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的問題。

[1]Jansen R,Schumann G,Baadenhuijsen H, et al．Trueness verification and traceability assessment of results from commercial systems for measurement of six enzyme activities in serum: an international study in the EC4 framework of the Calibration 2000 project[J].Clin Chim Acta, 2006, 368(1-2): 160-167.

[2]ISO 17511. In vitro diagnostic medical devices measurementofquantities in samples of biological origin-metrological traceability of values assigned to calibrators and control materials[S].International Standards Organization, 2003．[3]ISO 15189.Medical laboratories-Particular requirements for quality and competence[S].International Standards Organization，2012．

[4]衛(wèi)辦醫(yī)發(fā)[2006]32號. 衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)間醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、醫(yī)學(xué)影響檢查有關(guān)問題的通知[S]. 衛(wèi)生部辦公廳，2006.

[5]International vocabulary of metrology——Basic and general concepts and associated terms (VIM)[S]. International Standards Organization/International Electro technical Commission，2007．

[6]陳寶榮．臨床檢驗(yàn)結(jié)果量值溯源存在的問題與思考[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30(12)：943-945.

[7]楊振華．建設(shè)我國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考體系任重道遠(yuǎn)[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30(10)：734-736.

[8]王軍，劉毅．ISO 17511 臨床檢驗(yàn)量值溯源國際標(biāo)準(zhǔn)修訂解讀[J].中華臨床實(shí)驗(yàn)室管理電子雜志，2015，3(3)：168-170.

[9]WS/T 403-2012.臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)[S].中華人民共和國衛(wèi)生部，2012.

[10]Greg Miller. Presented at the JCTLM Members and Stakeholders Meeting[EB/OL].(2015-12-07)[2016-10-29].http://www.bipm.org/cc/AllowedDocuments.jsp?cc=JCTLM.html

[11]汪靜，曾潔，閆穎，等．我國七個(gè)血清酶檢驗(yàn)項(xiàng)目檢測質(zhì)量分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，38(5)：313-317.

(本文編輯：王海燕)

Investigations on the effect of measuring value transfer for human serum samples assigned by the reference laboratory network

SUNHui-ying1,SHIGuang-hua2,HUANGXian-zhang3,WANGHui-min4,HUWei-jiang5,LVLei6,HUBin1,WANGJian-bing3,WANGJian-xin4,LIUChun-long7,CHENBao-rong1,LVJing2

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,BeijingAerospaceGeneralHospital,Beijing100076; 2.OfficeofTechnology,ChinaNationalAccreditationServiceforConformityAssessment,Beijing100062; 3.MedicalCalibrationLaboratory,DepartmentofLaboratoryMedicine,GuangdongProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou518034,Guangdong; 4.DepartmentofClinicalLaboratory,AffliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong226001,Jiangsu; 5.KeyLaboratoryofAppliedEnzymologyofZhejiangProvince,YangtzeRiverDeltaInstituteofTsinghuaUniversity,Jiaxing314006,Zhejiang; 6.DepartmentofReferenceSystem,SichuanMakerBiotechnologyCo.,Ltd,Chengdu610097,Sichuan; 7.CenterforQualityTechnology,BeijingLeadmanBiochemistryCo.,Ltd,Beijing100176,China)

Objective To investigate the effect of measuring value transfer for human serum samples assigned by the reference laboratory network on improving the trueness of seven enzyme activities in clinical laboratories, such as ALT, AST, GGT, LDH, CK, AMY and ALP. Methods Depending on the medical institutions at all levels contacted by 5 reference laboratories in North China, South China, East China and Southwest China, the corresponding clinical laboratory measuring value transfer/traceability network was established. The frozen human serum samples with good interchangeability and standard material characteristics, including calibrator, sample 1 and sample 2, were provided by Beijing Aerospace General Hospital, and were assigned by 5 reference labotatories in four regions. These samples were sent to 48 clinical laboratories. These clinical laboratories measured sample 1 and sample 2 according to their standard operating procedures, and then measured the two samples again after adjusting their measurement system by using the supplied calibrator. The changes of trueness of detection results in these laboratories were evaluated according to the WS/T 403-2012 standard, and the changes of consistency for ALT and AST before and after measuring value transfer were investigated. Results The results of AMY, ALP, GGT, CK and LDH calibrator, sample 1 and sample 2 assigned by the established network were 138.7 U/L, 278.5 U/L and 68.3 U/L, 265.3 U/L, 94.5 U/L and 134.4 U/L, 195.8 U/L, 89.0 U/L and 158.9 U/L, 393.7 U/L, 260.0 U/L and 645.3 U/L, and 302.0 U/L, 250.0 U/L and 452.7 U/L, respectively. The percentages of sample 1 and sample 2 which met the bias requirements of the WS/T 403-2012 standard before measuring value transfer for AMY, ALP and GGT were 65.9% and 61.0%, 76.6% and 78.7%, and 66.7% and 70.8%, respectively, while after measuring value transfer, they were 89.2% and 83.8%, 86.7% and 80.0%, and 85.4% and 91.7%, respectively. The percentages of sample 2 which met the bias requirements of the WS/T 403-2012 standard before measuring value transfer for CK and LDH were 64.6% and 58.3%, respectively, while after measuring value transfer, they were 93.5% and 84.8%, respectively. The coefficients of variation (consistency) of sample 1 and sample 2 for ALT and AST before measuring value transfer were 12.9% and 11.3%, and 10.2% and 8.9%, respectively, while after measuring value transfer, they were 9.3% and 8.2%, and 5.6% and 5.9%, respectively. Conclusion The calibration of routine measurement systems based on the measuring value transfer for human serum samples assigned by the reference laboratory network may improve the comparability of 7 enzyme activities measurement results in clinical laboratories at all levels obviously, which deserves to be further spread.

measuring value transfer; traceability; reference laboratory network; trueness

10.13602/j.cnki.jcls.2017.02.16

國家質(zhì)檢公益性行業(yè)科研指標(biāo) (201210066)；北京市科技計(jì)劃(Z141107006614010)。

陳寶榮，主任技師，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：jyk711@sina.com；呂京，研究員，博士，E-mail：lvj@cnas.org.cn。

R446

A

2016-11-14)

作者介紹：孫慧穎，1978年生，女，副主任技師，大學(xué)本科，主要從事臨床標(biāo)準(zhǔn)化研究。