李華南 陳 浩* 顧 兵 王 力 涂 宏 鄧運明

（1江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨傷三科，南昌330006；2江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南昌330013）

痛風(fēng)清消顆粒急性毒性實驗研究※

李華南1陳 浩1*顧 兵2王 力1涂 宏1鄧運明1

（1江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨傷三科，南昌330006；2江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南昌330013）

目的觀察痛風(fēng)清消顆粒的急性毒性反應(yīng)，評價其臨床用藥的安全性。方法采用清潔級昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為2組，分別給予痛風(fēng)清消顆?；鞈乙汉蜕睇}水0.78 ml/次灌胃，24小時內(nèi)3次，連續(xù)觀察小鼠的體重、飲食、毒性反應(yīng)和死亡情況14天。結(jié)果2組小鼠在第1天、第7天和第14天的體重?zé)o顯著性差異（P＞0.05），小鼠一次性口服痛風(fēng)清消顆粒的最大耐受量為86.88 g durg·kg-1，為成人每日臨床常用量的253倍。結(jié)論痛風(fēng)清消顆?？诜R床常用劑量安全。

痛風(fēng)清消顆粒；急性毒性實驗；最大耐受量；中成藥療法；痹證

痛風(fēng)清消湯[1]是全國第四、五批名老中醫(yī)藥專家學(xué)術(shù)思想繼承工作指導(dǎo)老師、江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院鄧運明教授、主任中醫(yī)師治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的經(jīng)驗方，具有健脾益氣、清熱化濕的功效[2-5]。該方性味平和，無毒副作用，經(jīng)長期臨床驗證提示療效確切，患者依從性良好，接受度高，適宜長期口服，可避免西藥帶來的胃腸道反應(yīng)及肝腎功能損害。湯劑在使用過程中存在臨時煎煮、攜帶不便、服用體積大、口感不好、不能久置等缺點，而顆粒劑吸收快、顯效迅速、加入矯味劑，掩蓋了藥物的苦味，便于服用、便于攜帶、易貯存保管。顆粒制備工藝簡單，有效成分損失少，既能保持中醫(yī)藥傳統(tǒng)用藥特色，又能最大限度提取和保留處方中的有效成分，發(fā)揮有效成分的綜合治療作用，確保臨床療效。故2011年起，我院在固定處方的基礎(chǔ)上通過劑型改革，將湯劑改進(jìn)為顆粒劑型[6]，建立穩(wěn)定、可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，研制開發(fā)院內(nèi)制劑服務(wù)臨床患者。為保證臨床用藥的安全性，并為臨床提供實驗依據(jù)，本實驗通過采用最大用藥量實驗，考查小鼠灌服痛風(fēng)清消顆粒的急性毒性實驗，評估其制劑改造后的臨床應(yīng)用風(fēng)險，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物采用SPF級昆明種健康小鼠，體重18～22（20±2）g，雌雄各半，由江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物科技中心提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（贛）2005-0001。

1.2 藥品制備痛風(fēng)清消顆粒均采用道地藥材制備，由江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科采購并由制劑室按規(guī)定流程生產(chǎn)提供，生產(chǎn)批號20110706，用乳缽磨細(xì)后蒸餾水溶化，配成濃度為0.417 g·ml-1、顆粒密度為4.73 g·ml-1(16.30 g·kg-1，相當(dāng)生藥量86.88 g durg·kg-1)的混懸液。

1.3 實驗方法

1.3.1 預(yù)實驗取SPF級健康昆明種小鼠10只，每籠5只小鼠封閉飼養(yǎng)，雌雄分籠，給藥前禁食24 h，痛風(fēng)清消顆?；鞈乙?.78 ml/次灌胃，24小時內(nèi)3次，觀察小鼠的外觀、精神狀態(tài)、行為、飲食、呼吸、排泄物、分泌物、體重等情況，連續(xù)紀(jì)錄72 h內(nèi)的動物死亡數(shù)及毒性反應(yīng)。藥后觀察小鼠一般情況，結(jié)果見小鼠外觀、精神狀態(tài)、行為、飲食、呼吸、排泄物、分泌物、體重均無明顯異常，72 h內(nèi)10只小鼠無一死亡，也無明顯中毒反應(yīng)，提示本品無法測出LD50，故采用最大耐受量實驗[7]。

1.3.2 最大耐受量（MTD）測定將40只SPF級昆明種小鼠隨機(jī)分為藥物組和對照組。每籠5只小鼠封閉飼養(yǎng)，雌雄分籠，自由飲水，投喂顆粒飼料，自由攝食，實驗前適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，室溫20～25℃，相對濕度40%～50%。將小鼠禁食24 h后，次日給予痛風(fēng)清消顆?；鞈乙夯蛏睇}水0.78 ml/次灌胃，24小時內(nèi)3次，觀察小鼠的外觀、精神狀態(tài)、行為、飲食、呼吸、排泄物、分泌物、體重等情況，連續(xù)紀(jì)錄14天內(nèi)的動物死亡數(shù)及毒性反應(yīng)。試驗結(jié)束處死解剖動物，肉眼進(jìn)行觀察小鼠主要內(nèi)臟變化[7]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法計量資料均以（x±s）表示，組間比較采用成組t檢驗，所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況藥物組灌胃后，小鼠活動減少，約1小時左右逐漸好轉(zhuǎn)，第二天排出深褐色、稀薄糞便，污染肛門周圍。自第三日起，糞便包括形狀、顏色等性狀均恢復(fù)正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物，直至實驗結(jié)束。14天內(nèi)20只小鼠無死亡及明顯中毒反應(yīng)，大體解剖肉眼觀察小鼠無異常變化。

對照組灌胃后，第1、7、14天小鼠外觀、精神狀態(tài)、行為、飲食、呼吸、排泄物、分泌物無異常變化，直至實驗結(jié)束。14天內(nèi)20只小鼠無死亡及中毒反應(yīng)，大體解剖肉眼觀察小鼠無異常變化。

2.2 體重變化兩組小鼠體重變化情況見下表。

表1 痛風(fēng)清消顆粒最大給藥量對小鼠體重的影響（x±s）

▲在第1、7、14天兩組小鼠間體重經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗無顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 小鼠大體解剖情況14天后，40只小鼠無一出現(xiàn)無明顯中毒反應(yīng)或死亡。與對照組相比，藥物組小鼠主要臟器色澤形態(tài)未見異常，胸、腹腔未見積液，胃腸黏膜顏色正常，無出血點或潰瘍。

3 計算方法

按動物表面積比率換算等效劑量換算（20 g小鼠∶70 Kg成人=387.9∶1），常溫下配制的痛風(fēng)清消顆粒最高濃度為0.417 g·ml-1(16.30 g durg·kg-1，相當(dāng)生藥量86.88 g durg·kg-1)，顆粒密度4.73 g·ml-1，20 g小鼠最大灌胃容量0.78 ml計算小鼠最大給藥劑量：4.73×0.78×0.02-1=207.87 g durg·kg-1。按動物表面積比率換算等效劑量換算，折算70kg成人最大給藥量為207.87×0.02×387.9=1612.66g·70kg-1，相當(dāng)生藥劑量7579.5 g×70 Kg-1。以成人每日口服痛風(fēng)清消顆粒生藥劑量30 g×70 kg-1計算，小鼠一次口服痛風(fēng)顆粒為成人每日臨床常用量的253倍：7579.5·30-1=253倍。

4 結(jié)論

痛風(fēng)是因機(jī)體嘌呤代謝障礙而引起的血液內(nèi)尿酸水平升高導(dǎo)致尿酸鹽結(jié)晶析出沉積于關(guān)節(jié)的一種代謝性疾病。急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病部位多以第一跖趾及踇趾關(guān)節(jié)多見[8]。目前臨床治療用藥有NASIDs、秋水仙堿、糖皮質(zhì)激素和人抗白介素-1β單克隆抗體等[9-11]。長期應(yīng)用此類藥物有可胃腸刺激、過敏性藥疹和骨髓抑制等副作用，故臨床接受度有限，患者依從性低，常常轉(zhuǎn)而求助中醫(yī)?！端貑枴け哉摗吩唬骸帮L(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹也……其熱者，陽氣多，陰氣少，病氣勝，陽遭陰，故為痹熱”[12]。元代朱丹溪首創(chuàng)“痛風(fēng)”病名[13]，歷代醫(yī)家多將急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎歸于“痹證”范疇，臨床主要表現(xiàn)為“濕熱痹癥”。鄧運明教授認(rèn)為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病因病機(jī)為脾失健運，濕熱痹阻，經(jīng)脈瘀滯，治療宜補(bǔ)氣健脾、清熱利濕、通絡(luò)止痛。四妙散原載于清代·張秉成《成方便讀》，由元代朱丹溪所設(shè)二妙丸（蒼術(shù)、黃柏）加薏苡仁、牛膝組成，具有清熱利濕的作用。鄧運明教授遵“四妙散”意，總結(jié)近40年臨床經(jīng)驗，立方“痛風(fēng)清消湯”用于治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，經(jīng)多年臨床檢驗，其療效好、安全性高。全方藥用：蒼術(shù)、白術(shù)、黃柏、薏苡仁、川牛膝、金錢草、車前草、青風(fēng)藤、山慈菇、蒲公英、白豆蔻、徐長卿、土茯苓、重樓、萆薢等。方中白蒼二術(shù)補(bǔ)氣健脾、燥濕利水共為君，黃柏清熱燥濕、瀉火解毒；薏苡仁健脾滲濕、清熱排毒、除痹止瀉；白豆蔻化濕行氣、溫中散寒；川牛膝補(bǔ)肝益腎、強(qiáng)筋健骨、活血化瘀、利尿通淋、引藥下行，上四藥共為臣，助二術(shù)健脾滲濕。金錢草利水通淋、清熱消腫；車前草清熱利水；重樓、蒲公英清熱解毒、消腫止痛、利尿通淋；土茯苓祛風(fēng)勝濕；萆薢泌清別濁、祛風(fēng)勝濕；徐長卿活血祛風(fēng)；山慈菇、青風(fēng)藤清熱利濕，共奏有健脾益氣，清熱化濕之功效。本實驗按照現(xiàn)代藥理毒理實驗的要求，探索了痛風(fēng)清消顆粒對小鼠的急性毒性作用。結(jié)果表明小鼠一次性灌服痛風(fēng)清消顆粒，未測出LD50，最大耐受量為86.88 g durg·kg-1，為成人每日臨床常用量的253倍，表明該藥對小鼠無明顯急性毒性反應(yīng)，安全可靠，口服痛風(fēng)清消顆粒臨床常用劑量是安全的。根據(jù)統(tǒng)計學(xué)Wright法則，有99.99%以上的把握證明，昆明種小鼠口服給藥的LD50大于86.889 durg·kg-1，證明痛風(fēng)清消顆粒以常用劑量口服，符合藥品急性毒性要求。本藥乃口服制劑，不作注射給藥，故未作其它途徑給藥的LD50測定。至于痛風(fēng)清消顆粒的口服蓄積毒性及長期毒性，有待進(jìn)一步研究。

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Experimental Study on Acute Toxicity of Tongfeng Qingxiao Granule

LI Huanan1,CHEN Hao1,GU Bing2,WANG Li1,TU Hong1,DENG Yunming1
(1.Department of Orthopedics and Traumatology,the Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006,China; 2.College of Life Science,Jiangxi Science＆Technology Normal University,Nanchang 330013,China)

ObjectiveTo evaluate the acute toxicity of Tongfeng Qingxiao granule.MethodsThe 40 SPF Kun-ming mice were intragastrically administrated with 0.78ml mixed suspension of Tongfeng Qingxiao granule or normal saline,respectively,three times in 24 hours,and the weight,diet,toxic reaction and death of mice for 14 days were constantly observed.ResultsThere were no significant differences between two groups in the body weight of mice in 1st,7th and 14th day(P＞0.05).The maximum tolerated dose (MTD)of Tongfeng Qingxiao granule of mice is 86.88g durg·kg-1which is 253 times of clinical adult daily dose.ConclusionTongfeng Qingxiao granule is safe in the usual clinical dose.

Tongfeng Qingxiao granule;acute toxicity;maximum tolerated dose;therapy of Chinese patent drug;bi syndrome

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.06.059

1672-2779（2017）-06-0132-02

：張文娟本文校對：萬小明

2016-11-09）

國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設(shè)項目【No：國中醫(yī)藥人教發(fā)2001(41)號】；江西省科技廳科技支撐計劃項目【No：20142BBG70084】；江西省衛(wèi)計委中醫(yī)藥科研項目【No：2013B039】

*通訊作者：93133967@qq.com