王巧紅，呂朝輝，胡丹，顧建明

(1．啟東市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇啟東226200;2．海門泰森禽業(yè)發(fā)展有限公司，江蘇海門226151)

免疫接種和復(fù)方中藥超微粉聯(lián)用預(yù)防肉雞呼吸道疾病的觀察

王巧紅1，呂朝輝2，胡丹1，顧建明1

(1．啟東市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇啟東226200;2．海門泰森禽業(yè)發(fā)展有限公司，江蘇海門226151)

為研究免疫接種和復(fù)方中藥超微粉聯(lián)用預(yù)防肉雞呼吸道疾病的機(jī)制。本研究選擇1日齡Cobb500肉雞1 000羽，隨機(jī)分為5個(gè)試驗(yàn)組，:試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加0．5%中藥超微粉，試驗(yàn)組3和試驗(yàn)組4按照每公斤體重0．5 g添加10%阿莫西林可溶性粉，試驗(yàn)組5不添加任何藥物。試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組3在基礎(chǔ)免疫基礎(chǔ)上加免雞傳染性支氣管炎疫苗和新流二聯(lián)疫苗，試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組4和試驗(yàn)組5僅進(jìn)行基礎(chǔ)免疫。分別于14日齡、28日齡、42日齡測(cè)定血清中IL-1β、IL-2、TNF和INF-γ含量，ND和AI(H5亞型Re-6和Re-7)抗體。結(jié)果表明，免疫接種和中藥超微粉聯(lián)用可保護(hù)肉雞消化道、呼吸道，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，能顯著提高血清中的抗體水平和細(xì)胞因子的含量。表明二者聯(lián)用通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用，以達(dá)到對(duì)肉雞呼吸道疾病的防控效果。

免疫;接種;中藥超微粉;呼吸道疾病;肉雞呼吸道疾病

隨著人們生活水平的提高，對(duì)肉、奶、蛋的需求量也日益增多，同時(shí)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量和安全提出了更嚴(yán)格的要求，但動(dòng)物疫病防控日益復(fù)雜化，呼吸道疾病是制約肉雞健康發(fā)展的重要因素。引起呼吸道疾病的病原種類繁多，同時(shí)加上雞特殊的呼吸道結(jié)構(gòu)，氣囊多且分布廣，易感染且治療困難。病毒性疾病一旦發(fā)生很難控制，免疫接種是最直接和有效的防控手段。近年來(lái)抗生素在動(dòng)物疫病防控方面的長(zhǎng)期、大量使用及濫用，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生、藥物殘留和二次污染等問(wèn)題日益突出。因此探討有效的防控措施是勢(shì)在必行，本試驗(yàn)通過(guò)給肉雞進(jìn)行免疫接種，同時(shí)在日糧中添加復(fù)方中藥超微粉，觀察肉雞呼吸道疾病發(fā)生情況，對(duì)血清中抗體水平和細(xì)胞因子含量的影響，為肉雞呼吸道疾病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 疫苗、藥品疫苗:雞新城疫活疫苗，遼寧益康生物股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)201203;傳染性支氣管炎活疫苗，山東信得科技股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)201207001;雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)滅活疫苗(Lassota株+F株)，梅里亞公司生產(chǎn)，批號(hào)12102695;禽流感滅活疫苗(H5，Re-6+Re-7株)梅里亞公司生產(chǎn)，批號(hào)12112707。

藥品:復(fù)方中藥超微粉:黃芪150 g、麥芽300 g、穿心蓮100 g、黨參200 g、女貞子250 g，合計(jì)1 000 g，進(jìn)行超微粉粉碎。10%阿莫西林可溶性粉(批號(hào)2014060102)，河南省康星藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

1．2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)1日齡健康Cobb500雛雞1000只，隨機(jī)分為5個(gè)試驗(yàn)組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只雞。分組情況如下:試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加0．5%中藥超微粉，試驗(yàn)組3和試驗(yàn)組4按照每公斤體重0．5 g添加10%阿莫西林可溶性粉，試驗(yàn)組5不添加任何藥物。中藥組1～7日齡連續(xù)用藥7 d，間隔15 d，23～27日齡再連續(xù)用藥5 d，西藥組1～4日齡飲水用藥，21～24日齡再飲水用藥，連續(xù)用藥4 d。試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組3的免疫程序?yàn)?日齡新城疫疫苗和雞傳染性支氣管炎疫苗混合，滴鼻或點(diǎn)眼，0．06 mL/羽，禽流感疫苗和新流二聯(lián)疫苗混合，皮下注射，0．5 mL/羽;試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組4和試驗(yàn)組5的免疫程序?yàn)?日齡新城疫疫苗，滴鼻或點(diǎn)眼，0．03 mL/羽，禽流感疫苗皮下注射，0．25 mL/羽。飼養(yǎng)期間雞群自由采食和飲水。

1．3 檢測(cè)項(xiàng)目和方法

1．3．1 在整個(gè)試驗(yàn)期觀察各試驗(yàn)組肉雞的臨床癥狀、剖檢變化。

1．3．2 分別在14、28日齡和42日齡檢測(cè)各試驗(yàn)組肉雞血清中IL-1β、IL-2、INF-γ和TNF的含量，采用放射免疫法;抗體效價(jià)檢測(cè):采用血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)。

1．4 主要儀器JY2002型電子天平，上海分析儀器廠生產(chǎn);TGL-16G-C型高速離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SAS6．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件與Excel對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 臨床癥狀及剖檢變化在整個(gè)試驗(yàn)期，試驗(yàn)組1雞群精神正常，羽毛光亮，糞便正常且未見明顯的呼吸道癥狀，腸壁和氣管、支氣管、氣囊均未見異常，其他試驗(yàn)組均有不同程度的損傷。在剖檢時(shí)發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組1免疫器官均較其他試驗(yàn)組大。

2．2 對(duì)血清中IL-1β和IL-2含量的影響見表1。

表1 對(duì)血清中IL-1β和IL-2含量的影響(ng/mL)

由表1可知，血清中IL-1β和IL-2含量，在14日齡時(shí)，除試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3與試驗(yàn)組4之間差異不顯著(P＞0．05)，試驗(yàn)組3、試驗(yàn)組4與試驗(yàn)組5之間差異顯著(P＜0．05)外，其余各試驗(yàn)組間差異均極顯著(P＜0．01);在28日齡和42日齡時(shí)，除試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3與試驗(yàn)組4之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗(yàn)組之間差異均極顯著(P＜0．01);。隨著試驗(yàn)期延長(zhǎng)，血清中IL-1β和IL-2含量也升高，試驗(yàn)組1、2含量均高于其他試驗(yàn)組，以試驗(yàn)組1含量最高。

2．3 對(duì)血清中TNF和IFN-γ含量的影響見表2。

表2 對(duì)血清中TNF和IFN-γ含量的影響(ng/mL)

表3 對(duì)血清中ND抗體水平的影響

由表2可知，血清中TNF含量，在14、28日齡和42日齡，除了試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3、試驗(yàn)組4與試驗(yàn)組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗(yàn)組差異均極顯著(P＜0．01)。血清中IFN-γ含量，除了試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3與試驗(yàn)組4之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗(yàn)組之間差異均極顯著(P＜0．01)。隨著試驗(yàn)期延長(zhǎng)，血清中TNF和IFN-γ含量也升高，試驗(yàn)組1、2含量均高于其他試驗(yàn)組，以試驗(yàn)組1含量最高。

2．4 對(duì)血清中ND抗體水平的影響見表3。

由表3可知，14日齡時(shí)，除試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組3試驗(yàn)組2、4、5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余試驗(yàn)組之間差異均極顯著(P＜0．01);28日齡時(shí)，除試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組3、試驗(yàn)組4和試驗(yàn)組5之間差

異不顯著外其余各試驗(yàn)組之間的差異均極顯著(P＜0．01);在42日齡時(shí)，除試驗(yàn)組2與試驗(yàn)組3、試驗(yàn)組4與試驗(yàn)組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗(yàn)組之間的差異均極顯著(P＜0．01)。

2．5 對(duì)血清中禽流感H5亞型Re-6抗體和Re-7抗體的影響見表4。

表4 對(duì)血清中禽流感H5亞型Re-6抗體和Re-7抗體的影響

由表4可知，Re-6和Re-7抗體，在14日齡時(shí)，各試驗(yàn)組之間差異均不顯著(P＞0．05);在28日齡時(shí)，除試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組3、試驗(yàn)組4與試驗(yàn)組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗(yàn)組之間差異均極顯著(P＜0．01);在42日齡時(shí)，除試驗(yàn)組2與試驗(yàn)組3、試驗(yàn)組4與試驗(yàn)組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗(yàn)組之間差異均極顯著(P＜0．01);在28日齡時(shí)，各試驗(yàn)組抗體水平均在有效抗體保護(hù)范圍內(nèi)，在42日齡時(shí)，只有試驗(yàn)組1處于有效抗體保護(hù)范圍內(nèi)。

3 討論

3．1 免疫接種和中藥超微粉聯(lián)用對(duì)肉雞血清中細(xì)胞因子的影響細(xì)胞因子是具有很強(qiáng)功能的蛋白介質(zhì)，由免疫細(xì)胞分泌并參與機(jī)體免疫應(yīng)答，細(xì)胞分化、調(diào)控造血，腫瘤免疫等多種生理和病理過(guò)程。主要包括:白細(xì)胞介素(IL)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)等。IL-1是一組主要起免疫調(diào)節(jié)作用的激素樣肽類物質(zhì)。IL-2是T細(xì)胞的自分泌或旁分泌因子，其主要生理功能是促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分化。TNF主要由激活的單核巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生，T細(xì)胞、B細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞也是其分泌細(xì)胞［1］。TNF具有雙重作用，在正常情況下，其具有抗腫瘤、抗感染和促進(jìn)組織修復(fù)等重要作用，對(duì)機(jī)體有利，若持續(xù)釋放，則會(huì)引起機(jī)體發(fā)熱、休克、惡病質(zhì)和組織損傷［2］。TNF可以選擇性溶解感染病毒的細(xì)胞以限制病毒增殖［3］，IFN具有抗病毒、抗增殖活性、能保護(hù)細(xì)胞免受病毒感染，對(duì)正常細(xì)胞具有重要的抗增生活性［4］。王萌等［5］采用自擬中藥方劑防治雞傳染性支氣管炎，結(jié)果表明，中藥方劑可持續(xù)誘生IFN-γ和TNF-β，發(fā)揮了免疫調(diào)節(jié)機(jī)能，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)，達(dá)到對(duì)雞傳染性支氣管炎的防治效果。鋼強(qiáng)等［6］用三葉青提取物對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，結(jié)果表明，三葉青能明顯提高小鼠免疫功能和TNF-α、IFN-γ指標(biāo)。陳培榮等［7］研究的蛇附子對(duì)肉雞免疫功能的影響，結(jié)果顯示，蛇附子可以提高雞的細(xì)胞因子水平和免疫器官指數(shù)，具有免疫增強(qiáng)作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)給肉雞進(jìn)行免疫注射和飼喂復(fù)方中藥超微粉，呼吸道病發(fā)生率降低，腸道和呼吸道結(jié)構(gòu)正常，免疫器官增大，血清中IL-1β、IL-2、INF-γ和TNF的含量均高于其他試驗(yàn)組。與上述結(jié)果一致。

3．2 免疫接種和中藥超微粉聯(lián)用對(duì)肉雞抗體水平的影響動(dòng)物機(jī)體抗體水平的高低是反映機(jī)體對(duì)抗病源保護(hù)能力的重要指標(biāo)，也是評(píng)價(jià)免疫效果的重要手段。司昌德等［8］研究表明，黃芪可提高肉雞血清中ND抗體水平。顧建明等［9］采用復(fù)方中藥超微粉飼喂肉雞結(jié)果顯示，0．5%中藥超微粉能顯著提高肉雞的臟器系數(shù)，提高血清ND、Re-6、Re-7抗體水平。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)給肉雞免疫接種和飼喂復(fù)方中藥超微粉能提高血清中抗體水平，而且均高于其他試驗(yàn)組，與以上結(jié)果一致。

綜上所述，通過(guò)給肉雞進(jìn)行免疫接種和飼喂復(fù)方中藥超微粉，可保護(hù)腸道和呼吸道結(jié)構(gòu)的完整性，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體持續(xù)釋放細(xì)胞因子，發(fā)揮細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)，促進(jìn)機(jī)體抗體產(chǎn)生和延長(zhǎng)維持時(shí)間，體液免疫和細(xì)胞免疫雙重保護(hù)進(jìn)而達(dá)到對(duì)肉雞呼吸道疾病的防控效果。

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S858．31

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0529-6005(2017)01-0060-03

2016-04-07

2014年江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目〔SXGC(2014)112〕

王巧紅(1982-)，女，獸醫(yī)師，碩士，研究方向?yàn)橹胁菟庯暳咸砑觿┰趧?dòng)物疫病預(yù)防中的作用，E-mail:wqhwch@163．com