杜娟，李慧俠，劉鐘杰，王帥玉，林珈好，范開

(1．開封市畜牧工作站，河南開封475000;2．中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193)

艾葉煙熏對(duì)小鼠呼吸道影響的組織學(xué)觀察

杜娟1，李慧俠2，劉鐘杰2，王帥玉2，林珈好2，范開2

(1．開封市畜牧工作站，河南開封475000;2．中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193)

為研究艾葉煙熏對(duì)正常呼吸道的組織學(xué)影響，將54只健康SPF昆明系小鼠分為對(duì)照組、2 g艾葉/m3組和4 g艾葉/m3組，艾葉煙熏療程，分為艾葉煙熏1次、1周和2周。結(jié)果可見:艾葉煙熏能造成小鼠肺臟和氣管的水腫;2 g艾葉/ m3組艾葉煙熏后氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落數(shù)量出現(xiàn)先升后低的變化，艾葉煙熏2周試驗(yàn)組氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落數(shù)低于對(duì)照組但并無(wú)顯著差異;艾葉煙熏2周試驗(yàn)組鼻黏膜上皮細(xì)胞間杯狀細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比較具有顯著性增加。結(jié)果表明，艾葉煙熏能造成小鼠肺臟和氣管的水腫，但沒有進(jìn)一步的組織損傷。適宜濃度的艾葉煙熏能加強(qiáng)呼吸道黏膜的完整性，并能增加杯狀細(xì)胞的數(shù)量，增加呼吸道黏液分泌。

艾葉煙熏;小鼠;呼吸道黏膜上皮;杯狀細(xì)胞;

在對(duì)多種動(dòng)物的不同呼吸道傳染病的治療中，我們發(fā)現(xiàn)艾葉煙熏療法常能較好地控制噴嚏、流涕、咳嗽癥狀，在一定程度上阻斷疾病的傳播趨勢(shì)，而這些病例中的病原微生物并不確定，由此推測(cè)，艾葉煙熏治療可能主要是作用于動(dòng)物機(jī)體，改變呼吸道的防御狀態(tài)。本試驗(yàn)觀察艾葉煙熏后小鼠呼吸道的組織學(xué)變化，探討艾葉煙熏的治療機(jī)理。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4～6周齡的雌性SPF昆明系小鼠54只，飼養(yǎng)于隔離器內(nèi)。

1．2 艾葉煙熏條件艾葉(Artemisia argyi Levl．et Vant．)，購(gòu)自安國(guó)中藥市場(chǎng)，當(dāng)年產(chǎn)。艾葉煙熏療程，分為艾葉煙熏1次、1周和2周。艾葉煙熏在隔離器(1．5 m×0．75 m×1 m)中進(jìn)行，以2 g艾葉/m3為低劑量，4 g艾葉/m3為高劑量，設(shè)無(wú)艾葉煙熏對(duì)照組。2種劑量，3種療程。

每日9時(shí)、15時(shí)各艾葉煙熏1次。每次操作，先關(guān)閉艾葉煙熏隔離器的通風(fēng)閥門，點(diǎn)燃稱量好的艾葉。艾葉燃燒完全后開始計(jì)時(shí)，1 h后恢復(fù)通風(fēng)。無(wú)艾葉煙熏對(duì)照組同步給予開關(guān)通風(fēng)操作。

1．3 小鼠組織切片制作、染色及分析按各組的試驗(yàn)周期，結(jié)束后處死小鼠，采取鼻腔、氣管和肺。固定好的組織制作石蠟切片進(jìn)行多種染色。H．E．染色分析艾葉煙熏對(duì)肺臟及氣管、鼻黏膜的組織結(jié)構(gòu)影響;并于40倍物鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)氣管黏膜上皮細(xì)胞中脫落細(xì)胞的個(gè)數(shù)，分析艾葉煙熏對(duì)氣管上皮黏膜完整性影響。甲苯胺藍(lán)染色觀察、統(tǒng)計(jì)氣管組織黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)量變化［1－2］。PAS染色:于40倍物鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)鼻黏膜上皮細(xì)胞中杯狀細(xì)胞的數(shù)量，并分類計(jì)數(shù)其中性分泌和酸性分泌細(xì)胞的數(shù)量［3－4］。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2．1 艾葉煙熏對(duì)鼻腔黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)量影響于物鏡20倍鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)甲苯胺藍(lán)染色切片中氣管內(nèi)黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)(見封三彩版圖1)。經(jīng)t檢驗(yàn)各組未見顯著差異(見表1)。

表1 上皮黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)量比較

2．2 H．E．染色觀察艾葉煙熏對(duì)肺臟、氣管和鼻黏膜組織結(jié)構(gòu)影響小鼠肺臟組織切片可見，首次艾葉煙熏后，低劑量單次艾葉煙熏無(wú)明顯病理變化(封三彩版圖2)，高劑量靜脈血管周圍輕微水腫(封三彩版圖3)。艾葉煙熏1周后，低劑量組與對(duì)照組相比較表現(xiàn)出輕微水腫，而高劑量組水腫加劇，兩組肺臟其他結(jié)構(gòu)無(wú)明顯病理變化。艾葉煙熏2周后，低劑量組和高劑量組肺臟血管周圍水腫。

小鼠氣管組織切片可見，首次艾葉煙熏后，有少量黏膜上皮細(xì)胞與基底膜脫落。艾葉煙熏1周后，而對(duì)照組和低劑量組無(wú)顯著病理變化(封三彩版圖4)，高劑量組氣管“C”環(huán)接口處黏膜褶皺結(jié)構(gòu)局部消失，黏膜下層結(jié)締組織水腫(封三彩版圖5);艾葉煙熏2周后，高、低劑量組均見氣管黏膜下層局部水腫，軟骨“C”環(huán)接口處的褶皺狀上皮黏膜結(jié)構(gòu)消失，且高濃度治療組局部上皮黏膜脫落(封三彩版圖6)。

小鼠鼻黏膜組織切片中，各組結(jié)構(gòu)均無(wú)明顯變化(封三彩版圖7)。艾葉煙熏2周后，高、低劑量組杯狀細(xì)胞數(shù)量均增多。

2．3 艾葉煙熏對(duì)小鼠氣管上皮完整性影響經(jīng)單因素多重t檢驗(yàn)可見:同一劑量不同時(shí)間點(diǎn)比較時(shí):低劑量組內(nèi)，2周時(shí)細(xì)胞脫落數(shù)量顯著低于單次刺激后(P＜0．05)，其他各數(shù)據(jù)間差異不顯著，結(jié)果見表2。

相同時(shí)間點(diǎn)不同劑量間比較時(shí):單次艾葉煙熏時(shí)，低劑量和高劑量組細(xì)胞脫落數(shù)量均高于對(duì)照組，并且低劑量組與對(duì)照組差異顯著(P＜0．05)，其他各數(shù)據(jù)間差異不顯著，結(jié)果見表2。

以各組上皮細(xì)胞脫落的均值變化趨勢(shì)看，隨著艾葉煙熏時(shí)間延長(zhǎng)，低劑量組逐漸降低，高劑量組先降低后升高;艾葉煙熏2周時(shí)低劑量組脫落細(xì)胞數(shù)量較低于對(duì)照組，高劑量組細(xì)胞脫落數(shù)量高于對(duì)照組，但未達(dá)顯著差異。

表2 氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落數(shù)比較(n=6)

2．4 艾葉煙熏對(duì)鼻腔黏膜內(nèi)杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液影響經(jīng)單因素多重t檢驗(yàn)可見:單次煙熏，杯狀細(xì)胞數(shù)隨艾葉煙熏濃度增加而增加，并且高劑量組顯著高于對(duì)照組(P＜0．05);1周時(shí)，各組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。2周時(shí)結(jié)果與單次煙熏組相似，高劑量組顯著高于對(duì)照組(P＜0．05)。杯狀細(xì)胞酸性分泌與中性分泌(見封三彩版圖8)，在各時(shí)段、各組間無(wú)顯著差異，未見規(guī)律性變化(見表3)。

表3 上皮細(xì)胞間杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液酸堿性比較(n=6)

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，首次艾葉煙熏后，高低濃度艾煙對(duì)小鼠呼吸道黏膜均有刺激損傷，造成上皮細(xì)胞死亡脫落，但是隨著艾葉煙熏時(shí)間延長(zhǎng)，低劑量艾葉煙熏的小鼠可達(dá)完全修復(fù)。且低劑量艾葉煙熏2周后，其黏膜完整性優(yōu)于對(duì)照組，說(shuō)明了艾葉煙熏在適當(dāng)濃度和適當(dāng)療程下能夠強(qiáng)化氣管上皮黏膜完整性，增強(qiáng)黏膜免疫屏障。

杯狀細(xì)胞對(duì)呼吸道黏膜黏液分泌量有重要影響，本試驗(yàn)中隨著艾葉煙熏時(shí)間增加，杯狀細(xì)胞數(shù)量有增加趨勢(shì)，提示艾葉煙熏會(huì)在一定程度上增加呼吸道黏膜的分泌。實(shí)際治療中，也?？梢娪心摑崽榈膭?dòng)物艾葉煙熏后排出較前稀薄的痰涕。

艾葉煙熏雖可刺激呼吸道造成血管周圍水腫，但在所有組，水腫程度未造成試驗(yàn)鼠出現(xiàn)明確的呼吸不暢癥狀。而且，通過(guò)控制艾煙的濃度和療程，也可限制水腫的程度。

肥大細(xì)胞的變化對(duì)鼻竅充血、瘙癢等炎癥反應(yīng)狀態(tài)有影響。對(duì)感冒鼻腔瘙癢的人作艾葉煙熏后可見自覺癢感減輕，推測(cè)艾葉煙熏有可能對(duì)肥大細(xì)胞的數(shù)量和功能產(chǎn)生影響。但本試驗(yàn)各組間氣管黏膜下肥大細(xì)胞無(wú)顯著差異且數(shù)量很少。另外，本試驗(yàn)結(jié)果為生理狀態(tài)下取得，并不表明病理狀態(tài)下也是如此。

艾葉煙熏是傳統(tǒng)的呼吸道病防治手段，操作簡(jiǎn)便，效果比較可靠。其防治機(jī)理，可能與上述內(nèi)容有關(guān)。要進(jìn)一步研究和發(fā)展這種簡(jiǎn)便的防治手段，還需要進(jìn)一步探討是否有其他組織學(xué)機(jī)制參與，分析艾葉煙熏的作用更多來(lái)源于煙霧顆粒的直接刺激或是其他藥效成分，觀察其他芳香避穢藥物是否有同樣效果，是否可有配伍協(xié)同作用，并探索對(duì)不同動(dòng)物、不同疾病的最適劑量和療程。

［1］郭相杰，許素軍，廖慧丹，等．3種甲苯胺藍(lán)異染肥大細(xì)胞方法的比較［J］．中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2014;29(2):563-565．

［2］趙香汝，王家鑫，崔平．肥大細(xì)胞用甲苯胺藍(lán)染色之體會(huì)［J］．中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2000，9(3):359-359．

［3］白春學(xué)．氣道粘液高分泌和藥物治療研究進(jìn)展［J］．中國(guó)處方藥，2006，01:33-35．

［4］劉大鵬，宋立強(qiáng)．干預(yù)支氣管哮喘小鼠氣道黏液高分泌的研究［J］．中華肺部疾病雜志(電子版)，2013;6(5):416-420．

The observation of histological Impact of respiratory tract in mice by Moxa-smog treatment

DU Juan1，LI Hui-xia2，LIU Zhong-jie2，WANG Shuai-yu2，LIN Jia-hao2，F(xiàn)AN Kai2
(1．Animal Husbandry Station at Kaifeng，Kaifeng 475 000，China;2．College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

To study the histological effect in normal respiratory tract by different Moxa-smog treatment，54 healthy SPF KM mice were divided into control group，2 g Argyi/m3group，and 4 g Argyi/m3group．Mice in each group were exposed in Moxa-smog twice a day and continue 2 weeks．Results:After Moxa-smog treatment，the number of goblet cells in nasal mucosa increased significantly．However，the number of mast cells in nasal mucosa did not changed significantly;the lung and trachea had slight edema;In 2 g Argyi/m3group，the amount of tracheal exfoliated epithelium increased and then decrease．Our results show that the suitable concentration of Moxa-smog can enhance the integrity of respiratory epithelium as well as the mucus secretion，and increase the number of goblet cells．

Moxa-smog;respiratory symptom;goblet cell;respiratory epithelium

FAN Kai

S854．5

A

0529-6005(2017)01-0109-02

2015-10-14

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(2015DY004);中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院臨床基金

杜娟(1989—)，女(回族)，助理獸醫(yī)師，碩士，從事動(dòng)物防疫工作，E-mail:dujuan0824@163．com

作者簡(jiǎn)介:李慧俠(1992—)，女，碩士，從事獸醫(yī)臨床工作，E-mail:lihuixiaecho@126．com

注:李慧俠與杜娟對(duì)本文具有同等貢獻(xiàn)

范開，E-mail:dirtyfan@sina．com