湯倩倩，孫育紅，鄒丹蓉，章 超，史國(guó)平

（1.上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201103；2.上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，上海 201399；3.上海市嘉定區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201800；4.上海農(nóng)益科技有限公司，上海 201700）

靈芝固體液化菌種栽培初探*

湯倩倩1，孫育紅2，鄒丹蓉3，章 超2，史國(guó)平4

（1.上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201103；2.上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，上海 201399；3.上海市嘉定區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201800；4.上海農(nóng)益科技有限公司，上海 201700）

通過靈芝（Ganoderma lucidum）固體液化菌種的制作，以及不同濃度和不同接種量的靈芝固體液化菌種對(duì)栽培袋中發(fā)菌和出菇影響進(jìn)行研究。結(jié)果表明，靈芝固體液化菌種菌絲量多、流動(dòng)性好；將靈芝專用固體菌種稀釋1 500倍，接種35 mL，需11 d即可長(zhǎng)滿，47 d即可采收子實(shí)體，平均單產(chǎn)42.8 g·袋-1（干品）。

靈芝；固體菌種；液化菌種

固體液化菌種是通過制作專用固體菌種后將其粉碎液化獲得的菌種，能夠有效解決固體菌種發(fā)菌慢、操作繁瑣，而液體菌種投入大、難度高的問題。本試驗(yàn)對(duì)靈芝固體液化菌種的制作和栽培應(yīng)用進(jìn)行了初步研究[1]。

1 材料與方法

1.1 材料儀器

靈芝菌種由上海市崇明區(qū)嘉靈農(nóng)業(yè)種植專業(yè)合作社提供。

快速接種器、原液貯存罐、增量罐為上海農(nóng)益科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 專用固體菌種的制作

專用固體菌種的培養(yǎng)基原料為雜木屑，粉碎成300目的超微結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)含水量為80%，裝入300 mL三角瓶中，滅菌冷卻后接入PDA母種，24℃培養(yǎng)成專用固體菌種[2]。

1.2.2 菌種液化原液的制備

在無菌環(huán)境下，將靈芝專用固體菌種加入勻漿機(jī)中，添加無菌水1.8 L，攪拌勻漿后制得菌種液化原液，倒入原液罐中待用。

1.2.3 接種流水線消毒、滅菌

快速接種器內(nèi)部使用高錳酸鉀和甲醛混合液消毒。

連接管道系統(tǒng)使用75%酒精消毒。

增量罐滅菌：打開增量罐進(jìn)料口加水50 L，而后密封。及時(shí)通入蒸汽，至壓力表達(dá)1.5 kg·m-2、溫度表指示121℃時(shí)，維持時(shí)間1.5 h可達(dá)到滅菌效果。

1.2.4 液化原液的二次稀釋

在無菌條件下，將原液罐與50 L增量罐連接，通過增量罐內(nèi)負(fù)壓將原液罐中的原液吸入增量罐，經(jīng)過濾的空氣不斷充入增量罐，使菌液在罐內(nèi)上下翻滾稀釋均勻，接種時(shí)防止沉淀。

1.2.5 接種

打開液化罐出液管閥門，利用快速接種器吸出稀釋菌液，接種器置于工作狀態(tài)時(shí)，即可開始接種。栽培袋規(guī)格為17 cm×33 cm，采用常規(guī)方式制作，培養(yǎng)基含水量為58%。

1.2.6 菌絲培養(yǎng)和出菇管理

進(jìn)行菌絲培養(yǎng)和出菇管理。比較不同稀釋倍數(shù)的固體液化種，以及不同接種量對(duì)栽培袋中發(fā)菌、出菇的影響，分別制作100袋進(jìn)行菌絲和出菇觀察。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 固體液化菌種的制備

制作固體專用菌種的培養(yǎng)基是采用超微粉碎后的木屑，易破碎成細(xì)小顆粒。培養(yǎng)基基質(zhì)緊實(shí)，培養(yǎng)30 d可長(zhǎng)滿待用，雖時(shí)間較長(zhǎng)，但粉碎后菌絲量多，可見明顯的細(xì)微懸浮顆粒，顆粒中伴有靈芝菌絲。專用固體菌種、固體液化菌種原液見圖1、圖2。

圖1 專用固體菌種Fig.1 Special solid spawn

圖2 固體液化菌種原液Fig.2 Liquefied solid spawn

2.2 不同稀釋倍數(shù)的固體液化種對(duì)栽培袋中發(fā)菌和出菇的影響

分別取不同量的專用固體菌種制作原液并二次稀釋，分別制成1 500倍、2 000倍、3 500倍、5 000倍的稀釋菌液，將稀釋菌液25 mL接入栽培袋中，每隔12 h觀察菌絲萌發(fā)情況，5 d后觀察菌絲生長(zhǎng)情況，記錄長(zhǎng)滿時(shí)間、原基形成時(shí)間、采收時(shí)間。不同濃度的固體液化菌種在栽培袋中發(fā)菌和出菇比較見表1。

表1 不同濃度固體液化菌種在栽培袋中發(fā)菌和出菇比較Tab.1 Comparison of mycelial growth and fruiting condition withspawn in different concentration

從表1可以看出，接種稀釋1 500倍和2 000倍菌液的菌袋48 h即可萌發(fā)，接種稀釋3 500倍菌液的菌袋60 h萌發(fā)，接種稀釋5 000倍菌液的菌袋72 h萌發(fā)。稀釋1 500倍、2 000倍、3 500倍的菌液接種后菌絲生長(zhǎng)情況均較好，稀釋5 000倍的菌液接種后菌絲相對(duì)較弱。稀釋1 500倍的菌液接種后21 d即可長(zhǎng)滿，與更低濃度菌液發(fā)菌速度相比相對(duì)較快。

2.3 不同接種量對(duì)栽培袋中發(fā)菌和出菇的影響

制作1 500倍的固體液化菌種，分別在栽培袋中接入15 mL、25 mL、35 mL的稀釋菌液，比較發(fā)菌和出菇情況，結(jié)果見表2、圖3、圖4。

表2 不同接種量對(duì)發(fā)菌、出菇的影響Tab.2 Effect of different inoculum size on mycelial growth and fruiting condition

接種量為15 mL、25 mL、35 mL的情況下均易萌發(fā)，48 h可見明顯萌發(fā)，15 mL的接種量菌絲長(zhǎng)勢(shì)略弱。35 mL的接種量生長(zhǎng)周期較15 mL、25 mL的縮短，11 d即可長(zhǎng)滿，17 d可見原基，47 d即可采收靈芝子實(shí)體，平均單產(chǎn)41.8 g·袋-1；而15 mL的接種量生長(zhǎng)周期最長(zhǎng)，需28 d長(zhǎng)滿全袋，34 d出現(xiàn)原基，63 d子實(shí)體成熟采收。

圖3 接種量為35 mL的第4天、第6天、第8天、第10天菌絲生長(zhǎng)情況Fig.3 Mycelium growth condition with 35mL spawn on the 4th,6th,8th and 10th day

圖4 接種量為35 mL的第37天、第44天出菇情況Fig.4 Fruiting condition of Ganoderma lucidum with 35mL spawn on the 37th and 44th day

3 結(jié)論

固體液化菌種在接種栽培時(shí)，更易達(dá)到菌液流動(dòng)性好，擴(kuò)散范圍大且均勻的效果，固體液化原液用無菌水稀釋后，無需培養(yǎng)，營(yíng)養(yǎng)成分少，能夠減少污染。利用稀釋1 500倍的靈芝固體液化菌種，接種35 mL僅需11 d即可長(zhǎng)滿，17 d可見原基，47 d即可采收靈芝子實(shí)體，平均單產(chǎn)42.8 g·袋-1（干品）。

專用固體菌種的培養(yǎng)基為300目的細(xì)小顆粒，加水滅菌后較為緊實(shí)，培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，可能需要繼續(xù)研究調(diào)整培養(yǎng)基的原材料選擇以及制作方式等，縮短專用固體菌種培養(yǎng)時(shí)間。在固體液化菌種的制作、稀釋過程中需嚴(yán)格控制無菌環(huán)境，稀釋后的固體液化菌種應(yīng)確定無污染后才能使用。

[1]胡曉艷.食用菌菌種的最新技術(shù)革命還原型液體菌種[J].北京農(nóng)業(yè)，2010（12）：19-20.

[2]余維良，鄭明海，方國(guó)平，等.秀珍菇固體專用菌種液化生產(chǎn)自動(dòng)接種技術(shù)與固液兩態(tài)菌種的出菇比較[J].食藥用菌，2015，23（2）：102-105.

Test on Production and Cultivation of Ganoderma lucidum Liquefied Solid Spawn

TANG Qian-qian1,SUN Yu-hong2,ZOU Dan-rong3,ZHANG Chao2,SHI Guo-ping4
(1.Shanghai Agricultural Technology Extention and Service Center,Shanghai 201103,China;2.Pudong Agricultural Technology ExtentionCenter,Shanghai 201399,China;3.Jiading Agricultural Technology Extention and Service Center,Shanghai 201800, China;4.Shanghai Nongyi Technology Company,Shanghai 201700,China)

Ganoderma lucidumliquefied solid spawn was tried to be produced.The cultivation ofG.lucidumliquefied solid spawn under different concentration and different inoculum size was studied.The result showed that liquefied solid spawn had advantage of high hyphae amount and good fluidity.With 35 mL liquefied solid spawn which is diluted 1 500 times,the mycelium could grow full of the bags in 11 days,andG.lucidumcan be harvest in 47 days with 42.8 g per bag.

Ganoderma lucidum;solid spawn;liquefied spawn

S646.9

A

1003-8310（2017）02-0024-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.02.007

上海市科技興農(nóng)攻關(guān)項(xiàng)目（滬農(nóng)攻字（2015）第3-6號(hào)）。

湯倩倩（1987-），女，碩士，農(nóng)藝師，主要從事食用菌技術(shù)推廣。E-mail:qqtang71@yeah.net

2017-01-17