劉子花　楊玲

摘要：以Hort16A獼猴桃（Actinidia chinensis Planch.）頂芽為外植體，研究了不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)叢生芽誘導(dǎo)、生根培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，在叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)中，培養(yǎng)基中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑最適濃度組合為6-BA 1 mg/L與NAA 0.03 mg/L，叢生芽的誘導(dǎo)率到達(dá)92%，芽的長(zhǎng)勢(shì)較好。生根培養(yǎng)中，在1/2MS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑IBA最適濃度為0.5 mg/L，生根率到達(dá)了98%。

關(guān)鍵詞：Hort16A獼猴桃（Actinidia chinensis Planch.）；頂芽；組織培養(yǎng)；叢生芽；生根

中圖分類號(hào)：S663.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）04-0749-03

Hort16A獼猴桃（Actinidia chinensis Planch.）是新西蘭園藝與食品研究院雜交選育而成的獼猴桃新品種，屬中華獼猴桃。其樹勢(shì)強(qiáng)健，適應(yīng)性廣，果肉黃色至金黃色，風(fēng)味甜香，果實(shí)倒圓錐形，重80～140 g，果實(shí)軟熟時(shí)可溶性固形物含量為15%～17%，維生素C含量120～150 mg/100 g[1，2]。10月中旬成熟，耐貯藏，是市場(chǎng)售價(jià)較高的品種，市場(chǎng)發(fā)展?jié)摿薮蟆?/p>

Hort16A為雌雄異株，可進(jìn)行扦插、嫁接、種子播種。雖然種子繁殖較無(wú)性繁殖容易，但實(shí)生苗性狀不穩(wěn)定，且難以獲得大批雌株；用扦插、嫁接繁殖成活率較低，效率也低，采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)良種獼猴桃的快速繁殖。獼猴桃組織培養(yǎng)的外植體種類很多，當(dāng)前選用的外植體包括莖段、葉片、根段、頂芽、花藥、花粉以及胚[3]。但不同品種不同外植體之間愈傷組織發(fā)生率和植株再生率均有較大的差異，且多是通過(guò)愈傷組織培養(yǎng)獲得再生植株[4-6]。而在植物快繁中，通過(guò)叢生芽發(fā)生型途徑進(jìn)行器官再生，不經(jīng)過(guò)愈傷組織，能使無(wú)性系后代保持原品種的特性[7]。本試驗(yàn)利用植物的頂芽分生組織旺盛分裂的特點(diǎn)，進(jìn)行Hort16A獼猴桃組織培養(yǎng)，探索了組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，為將引種和育種有機(jī)結(jié)合，更好地開發(fā)利用本土的種質(zhì)資源，進(jìn)行分子輔助育種奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料采自西南林業(yè)大學(xué)苗圃的Hort16A獼猴桃，選擇生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲害植株上帶頂芽的枝條。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基配制 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3%蔗糖+0.7%瓊脂（pH 5.8），添加不同濃度組合的6-BA和NAA。生根培養(yǎng)基為1/2MS或1/4MS+3%蔗糖（pH 5.8），添加不同濃度的IBA。

1.2.2 外植體預(yù)處理 將采回帶頂芽的枝條先用洗滌劑溶液刷洗，再用自來(lái)水充分沖洗。瀝干水分后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)進(jìn)行表面滅菌，75%的乙醇浸泡30 s后，用20%的次氯酸鈉溶液（每升滴加5滴吐溫-80）進(jìn)行表面滅菌14～16 min，然后用無(wú)菌水清洗備用。

1.2.3 外植體接種 將滅菌后的材料剝?nèi)?.3～0.5 cm大小的頂芽接種于培養(yǎng)基上，每瓶接種2個(gè)，每處理接3瓶，2次重復(fù)。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)條件；培養(yǎng)溫度（25±2） ℃，暗培養(yǎng)20 d后，然后光照培養(yǎng)，時(shí)間12 h/d，光照度1 000 lx。生根誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件，溫度25±2 ℃，光照時(shí)間12 h/d，光照度1 000 lx。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析 光照條件下培養(yǎng)20 d，觀察并統(tǒng)計(jì)各處理下外植體的誘導(dǎo)情況，包括叢生芽誘導(dǎo)率、叢生芽生長(zhǎng)狀況、存活率等；對(duì)生根處理的進(jìn)行定期觀察，并統(tǒng)計(jì)生根率和生長(zhǎng)情況。用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 叢生芽的誘導(dǎo)

將剝?nèi)〉捻斞拷臃N在添加不同濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，為了防止褐化在培養(yǎng)初期需要暗培養(yǎng)20 d左右，然后轉(zhuǎn)移至光照條件下培養(yǎng)20 d，觀察記錄培養(yǎng)情況，誘導(dǎo)結(jié)果見表1。由表1可知，在不同濃度6-BA與NAA的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合誘導(dǎo)下有不同的培養(yǎng)情況。在6-BA濃度為1 mg/L的培養(yǎng)基中，Hort16A獼猴桃頂芽能誘導(dǎo)出叢生芽，并且叢生芽的生長(zhǎng)情況都較好（圖1A）；當(dāng)6-BA濃度為2 mg/L時(shí)，多數(shù)誘導(dǎo)形成愈傷組織，少數(shù)愈傷組上長(zhǎng)出不定芽（圖1B）；而6-BA濃度為3 mg/L時(shí)雖然也能誘導(dǎo)出叢生芽，但是部分叢生芽的葉片細(xì)長(zhǎng)或不長(zhǎng)葉片或形成畸形（圖1C）。

2.2 生根培養(yǎng)

選擇長(zhǎng)勢(shì)健壯的組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，其誘導(dǎo)生根情況見表2。由表2可知，在培養(yǎng)基中不添加任何植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，組培苗沒(méi)有生根，并且苗的長(zhǎng)勢(shì)也不好。在相同濃度IBA的1/2MS和1/4MS培養(yǎng)基中，根的誘導(dǎo)情況和苗的長(zhǎng)勢(shì)明顯不同，1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)15 d有不定根生成，而1/4MS培養(yǎng)基中15 d時(shí)則觀察不到，且1/2MS培養(yǎng)基中組培苗的根數(shù)多且根分布均勻，總體上1/2MS培養(yǎng)基中組培苗從誘導(dǎo)生根情況和苗的長(zhǎng)勢(shì)都優(yōu)于1/4MS培養(yǎng)基（圖2），與張海平等[7]研究結(jié)果一致。

對(duì)表2中1/2MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的IBA對(duì)生根率的影響進(jìn)行t檢驗(yàn)，t=24.276（自由度df=3，P=0.000<0.01），IBA對(duì)生根率有極顯著差異。在1/2MS培養(yǎng)基中IBA濃度為0.1 mg/L根率達(dá)到80.5%，當(dāng)IBA濃度為0.5 mg/L生根率最高達(dá)到98%，而IBA濃度為0.7 mg/L時(shí)生根率為89%，生根率隨IBA濃度升高而升高，但當(dāng)IBA上升到一定濃度時(shí)生根率下降。

將生長(zhǎng)良好的獼猴桃生根苗在大棚中進(jìn)行1周煉苗即可進(jìn)行移栽，移栽后的前10 d每天給移栽苗噴水至少3次，移栽苗葉片鮮綠，長(zhǎng)旺盛。

3 結(jié)論與討論

細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例是影響增殖系數(shù)和不定芽質(zhì)量的主要因素[8-10]。在Hort16A獼猴桃頂芽的誘導(dǎo)中，培養(yǎng)基中不同濃度6-BA對(duì)頂芽的誘導(dǎo)有不同的影響，在6-BA 1 mg/L時(shí)全部誘導(dǎo)生成叢生芽，誘導(dǎo)率均達(dá)到70%以上；當(dāng)6-BA 2 mg/L的培養(yǎng)基中則全部誘導(dǎo)形成愈傷組織，僅有部分愈傷組織有不定芽分化；而在6-BA 3 mg/L時(shí)誘導(dǎo)率有所下降，并且出現(xiàn)外植體褐化死亡或無(wú)菌苗出現(xiàn)畸形等現(xiàn)象。該現(xiàn)象與李浚明等[11]提出的較高水平細(xì)胞分裂素能有利于誘導(dǎo)不定芽的形成，但添加的細(xì)胞分裂素濃度過(guò)高會(huì)引起形態(tài)上異常出現(xiàn)畸形甚至抑制生長(zhǎng)或死亡相符。本研究中在6-BA濃度相同的情況下，不同濃度的NAA也對(duì)誘導(dǎo)結(jié)果有不同的影響，在6-BA濃度固定不變的情況下誘導(dǎo)率隨著NAA濃度增高而增高，當(dāng)NAA達(dá)到一定濃度時(shí)誘導(dǎo)率開始下降。本研究中叢生芽誘導(dǎo)時(shí)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的最佳濃度組合為6-BA 1 mg/L+NAA 0.03 mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)到了92%，并且叢生芽長(zhǎng)勢(shì)健壯，數(shù)量也較多。在1/2MS培養(yǎng)基中組培苗的生根率隨著IBA濃度的升高而升高，但當(dāng)IBA升到一定濃度時(shí)生根率又下降，IBA為0.5 mg/L時(shí)組培菌苗生根率最高到達(dá)98%。

參考文獻(xiàn)：

[1] 徐小彪.新西蘭Hort16A獼猴桃的主要特性及其夏季“零葉”修剪技術(shù)[J].中國(guó)南方果樹，2005，34（5）：57-60.

[2] 張道建，王熙龍，楊永泰，等.獼猴桃品種Hort16A在西峽縣的引種表現(xiàn)及栽培技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（14）：66，73.

[3] 桂耀林.獼猴桃離體莖段愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生[J].植物生理學(xué)通訊，1979，21（4）：339-343.

[4] 文國(guó)琴，石大興，吳雪梅，等.獼猴桃組織培養(yǎng)研究的現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].北方果樹，2004（3）：1-3.

[5] 劉長(zhǎng)春，陳澤雄，龔雪芹，等.金富獼猴桃離體培養(yǎng)與植株再生的優(yōu)化研究[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，32（5）：124-128.

[6] 尚霄麗，馬春華，馮建燦，等.中華獼猴桃葉片再生體系的建立[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22（4）：50-52.

[7] 張海平，周建峰，任目槿.海沃德獼猴桃組織培養(yǎng)快速繁育技術(shù)研究[J].陜西林業(yè)科技，2011（2）：8-9.

[8] SHEVADE A，PREECE J E. In Vitro Shoot and floral organogenesis from stamen explants from a rhododendron“P.J.M” group clone[J].Scientia Horticulture，1993，56：163-170.

[9] ECONOMOU A S，READ P E. In vitro shoot proliferation of minnesota deciduous azaleas[J].Hortscience，1984，19（1）：60-61.

[10] 洪淑榮.獼猴桃離體莖段和葉片愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，1981（9）：28-30.

[11] 李浚明，朱登云.植物組織培養(yǎng)教程[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2005.