任 杰，李 娟，李兆星，李明丹，曾宏亮，潘善慶，李日新，李順祥＊＊

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 長沙 410208；2.湖南省中藥活性物質(zhì)篩選工程技術(shù)研究中心 長沙 410208；3.西南大學(xué)藥學(xué)院 重慶 400715；4.湖南省藥物安全評(píng)價(jià)研究中心 長沙 410331；5.郴州五蓋山天時(shí)生態(tài)農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司 郴州 423000）

野茉莉（Styrax japonicus Sieb.et Zucc.）為安息香科安息香屬植物，又名野花棓、茉莉苞、木香柴、野白果樹、脆果子樹、木橘子和耳完桃。生于海拔400-1 800 m的林中，主要分布于我國北自秦嶺和黃河以南，東起山東、福建，西至云南東北部和四川東部，南達(dá)臺(tái)灣、廣東和廣西北部?！吨腥A本草》、《全國中草藥匯編》等典籍記載，野茉莉的藥用部位為其葉及果實(shí)，具有祛風(fēng)除濕，舒筋通絡(luò)之功效，主治風(fēng)濕痹痛，癱瘓等病癥[1,2]。為充分利用野茉莉資源，對(duì)野茉莉葉進(jìn)行了抑菌、抗炎及止咳作用的實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 藥物和試劑

野茉莉葉，由郴州五蓋山天時(shí)生態(tài)農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司提供。藥材來源：于2016年5月采自湖南省郴州五蓋山，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)劉塔斯教授鑒定為安息香科安息香屬植物野茉莉（Styrax japonicus Sieb.et Zucc.）的新鮮嫩葉，憑證標(biāo)本（序號(hào)：20160913）保存在湖南省中藥活性物質(zhì)篩選工程技術(shù)研究中心。MH肉湯（批號(hào)：20160603，青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司）。營養(yǎng)瓊脂（批號(hào)：20150630，青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司）。角叉菜膠（批號(hào)：BCBP8978V，sigma-aldrich），稱取100 mg角叉菜膠粉末至研砵中，分批次緩慢加入10 mL生理鹽水，邊加邊研磨，配成均勻乳白色1%角叉菜膠溶液，使用前臨時(shí)配制。二甲苯（批號(hào)：20160608，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。氨水（批號(hào)：20160708，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），規(guī)格：500 mL/瓶（濃度：25-28%），實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水稀釋至14%備用。碳酸氫鈉（批號(hào)：20130715，廣東光華科技股份有限公司），規(guī)格：500 g/瓶，實(shí)驗(yàn)前配成5%的NaHCO3溶液待用。

1.1.2 菌株名稱及菌株號(hào)和動(dòng)物

大腸埃希氏菌（菌株號(hào)：ATCC25922），肺炎克雷伯氏菌（菌株號(hào)：CMCC(B)46117），沙門氏菌（菌株號(hào)：CMCC(B)50094），金黃色葡萄球菌（菌株號(hào)：CMCC(B)26003），白色念珠菌（菌株號(hào)：CMCC(F)98001）。SD大鼠（SPF級(jí)），雄性，體重范圍為189.1-210.4 g；ICR小鼠（SPF級(jí)），雌雄兼用，體重范圍19.0-24.3 g，均由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

1.1.3 儀器

BSC-1100ⅡA2-X型生物安全柜（二級(jí)）（濟(jì)南鑫貝西生物有限公司），LDZM-80KCS型立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海申安儀器有限公司），PYL-230型電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司），PL2002型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），CP413型分析天平（奧豪斯儀器（常州）有限公司），YLS-7B足趾容積測(cè)量儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司），AUY220型分析天平（日本島津），YLS-8A型誘咳引喘儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司），UV-Power PC型紫外/可見分光光度計(jì)（北京萊伯泰科儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 野茉莉葉水提物的制備

試驗(yàn)前稱取1 000 g野茉莉葉，用10 L煮沸蒸餾水浸泡提取30 min，三層紗布過濾，再用10 L煮沸蒸餾水浸泡提取一次，合并濾液，減壓濃縮（60℃）至1 000 mL（終濃度為1.0 g生藥量·mL-1），搖晃均勻后按50 mL/瓶分裝，密閉保存于4℃冰箱備用（批號(hào)：20160914）。野茉莉葉水提物抗炎、止咳和排痰作用實(shí)驗(yàn)，以人體推薦食用量5 g/天，成人體重按60 kg計(jì)，折合劑量約0.083 g野茉莉葉·kg-1。

1.2.2 野茉莉葉水提物體外抑菌作用[3]

無菌操作條件下，采用肉湯連續(xù)稀釋法將滅菌處理過的野茉莉葉水提物與MH液體培養(yǎng)基（2×）二倍稀釋，使培養(yǎng)基中受試物的終濃度分別為0.500、0.250、0.125、0.063 g生藥量·mL-1，分別接種大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌于含上述濃度受試物的MH液體培養(yǎng)基中，各試驗(yàn)菌最終濃度約為105CFU·mL-1，同時(shí)接種于不含受試物的MH液體培養(yǎng)基中，作為陽性對(duì)照，另設(shè)不接種菌液的MH液體培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，36℃培養(yǎng)48 h，觀察各菌株生長情況及記錄受試物的最小抑菌濃度（MIC）。

1.2.3 野茉莉葉水提物抗炎作用[4]

1.2.3 .1大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)

選用檢疫合格雄性SD大鼠40只（SPF級(jí)），按體重隨機(jī)分為4組，即溶媒對(duì)照組、野茉莉葉水提物低劑量組（0.42 g生藥量·kg-1）、中劑量組（0.83 g生藥量·kg-1）、高劑量組（2.50 g生藥量·kg-1），每組10只，各給樣組大鼠按10 mL·kg-1灌胃給予相應(yīng)劑量的受試物，溶媒對(duì)照組大鼠灌胃給予等量蒸餾水，每日一次。試驗(yàn)結(jié)束前8天將滅菌干燥至恒重的緊致小棉球植入大鼠腹股溝兩側(cè)，縫合切口，繼續(xù)給予受試物，第30天給予受試物1 h后處死大鼠，剝離并取出棉球肉芽組織，干燥后稱重，計(jì)算肉芽腫凈重。

1.2.3 .2大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)

選用檢疫合格雄性SD大鼠40只（SPF級(jí)），按體重隨機(jī)分為4組，即溶媒對(duì)照組、野茉莉葉水提物低劑量組（0.42 g生藥量·kg-1）、中劑量組（0.83 g生藥量·kg-1）、高劑量組（2.50 g生藥量·kg-1），每組10只，各給樣組大鼠按10 mL·kg-1灌胃給予等量的受試物，溶媒對(duì)照組大鼠灌胃給予等量蒸餾水，每日一次，連續(xù)30天。末次給予受試物1h后，測(cè)量各組大鼠注入致炎劑（1%角叉菜膠溶液）前和注入后1 h、2 h、4 h及6 h右后足趾容積，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的足趾腫脹率。

1.2.3 .3小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

選用檢疫合格雄性ICR小鼠50只（SPF級(jí)），按體重隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組（阿司匹林片，39 mg·kg-1）、野茉莉葉水提物低劑量組（0.42 g生藥量·kg-1）、中劑量組（0.83 g生藥量·kg-1）、高劑量組（2.50 g生藥量·kg-1），每組10只，各給樣組小鼠按20 mL·kg-1灌胃給予相應(yīng)劑量的受試物，模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水或阿司匹林藥液，每日一次，連續(xù)7天。末次給予受試物后1 h于每只小鼠右耳廓內(nèi)外側(cè)涂二甲苯致炎，左耳不涂作為對(duì)照，30 min后處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用9 mm直徑打孔器打下左耳和右耳相同部位的圓片，并立即用分析天平準(zhǔn)確稱取左、右耳片重量，計(jì)算耳腫脹率。

1.2.4 野茉莉葉水提物止咳作用[5]

小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)選取檢疫合格的ICR小鼠50只（SPF級(jí)），雌雄各半，按性別體重隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組（枸櫞酸噴托維林片，9.75 mg·kg-1）、野茉莉葉水提物低劑量組（0.42 g生藥量·kg-1）、中劑量組（0.83 g生藥量·kg-1）、高劑量組（2.50 g生藥量·kg-1），每組10只，各給樣組小鼠按20 mL·kg-1灌胃給予相應(yīng)劑量的受試物，模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水或枸櫞酸噴托維林片藥液，每日一次，連續(xù)7天。末次給予受試物1 h后將小鼠放入誘咳引喘儀內(nèi)，噴入14%濃氨水5 s刺激致咳，檢測(cè)小鼠首次咳嗽潛伏期及5 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

全部數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行方差分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“±s”表示。

2 結(jié)果

2.1 野茉莉葉水提物體外抑菌作用

野茉莉葉對(duì)大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙門氏菌的MIC為0.250 g生藥量·mL-1，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為0.125 g生藥量·mL-1，對(duì)白色念珠菌（0.063-0.500生藥量·mL-1）無抑菌活性具體結(jié)果見表1。

2.2 野茉莉葉水提物抗炎作用

2.2.1 對(duì)大鼠棉球植入的影響

與模型組相比，野茉莉葉水提物各給藥組動(dòng)物肉芽腫凈重呈劑量依賴性降低，高劑量組棉球肉芽腫重量及肉芽腫凈重均明顯減少（P＜0.05），可見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表2）。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉葉水提物對(duì)大鼠棉球重量無明顯影響，高劑量組肉芽腫凈重明顯降低，提示野茉莉葉水提物具有抗炎作用。

2.2.2 對(duì)大鼠足趾腫脹的影響

與模型組相比，野茉莉葉水提物各給藥組動(dòng)物足趾腫脹率整體呈降低趨勢(shì)，注射致炎劑后1 h、2 h野茉莉葉水提物低、高劑量組足趾腫脹率均明顯或顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），其中野茉莉葉水提物低劑量組足趾腫脹率在注射致炎劑后4 h、6 h仍顯著降低（P＜0.01）（表3）。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉葉水提物對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹具有明顯抑制作用。

2.2.3 對(duì)二甲苯所致小鼠耳郭腫脹的影響

與模型組相比，野茉莉葉水提物低、高劑量組耳腫脹率均明顯或顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），陽性對(duì)照藥組（阿司匹林片）耳腫脹率亦顯著降低（P＜0.01）（表4）。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉葉水提物可有效改善二甲苯涂布引起的小鼠耳廓腫脹，提示其具有抗炎作用。

表1 野茉莉葉水提物對(duì)實(shí)驗(yàn)菌株生長的影響

表2 野茉莉葉水提物對(duì)肉芽腫凈重的影響（±s）

表2 野茉莉葉水提物對(duì)肉芽腫凈重的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組相比，*P＜0.05。

組別模型組野茉莉葉水提物低劑量組野茉莉葉水提物中劑量組野茉莉葉水提物高劑量組棉球重量（mg）22.4±1.1 22.7±0.9 22.8±0.8 22.6±0.7棉球肉芽腫重量（mg）151.2±23.6 149.7±21.8 141.9±32.9 121.2±23.3*肉芽腫凈重（mg）128.8±23.5 127.0±21.2 119.1±33.4 98.7±22.8*

表3 野茉莉葉水提物對(duì)足趾腫脹率的影響（±s）

表3 野茉莉葉水提物對(duì)足趾腫脹率的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

腫脹率（%）組別模型組野茉莉葉水提物低劑量組野茉莉葉水提物中劑量組野茉莉葉水提物高劑量組注射后1 h 25.9±9.0 17.9±5.3**20.5±6.5 18.0±3.4**注射后2 h 41.8±14.5 27.4±7.8**38.6±12.5 30.5±8.0*注射后4 h 53.0±12.3 35.6±7.3**49.7±13.9 43.5±10.2注射后6 h 52.8±11.3 34.3±5.0**47.8±13.3 43.0±13.2

表4 野茉莉葉水提物對(duì)小鼠耳腫脹率的影響（±s）

表4 野茉莉葉水提物對(duì)小鼠耳腫脹率的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 野茉莉葉水提物止咳作用（對(duì)氨水引起小鼠咳嗽的影響）

與模型組相比，野茉莉茶葉水提物中、高劑量組咳嗽潛伏期均顯著延長（P＜0.01），野茉莉茶葉水提物各給藥組咳嗽次數(shù)均顯著減少（P＜0.01），陽性對(duì)照藥組（枸櫞酸噴托維林片）咳嗽次數(shù)亦顯著減少（P＜0.01）（表5）。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉葉水提物可有效延長氨水引起的咳嗽潛伏期，低、中、高劑量組均顯著減少咳嗽次數(shù)，提示其具有鎮(zhèn)咳作用。

表5 野茉莉葉水提物對(duì)小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響（±s）

表5 野茉莉葉水提物對(duì)小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組相比，**P＜0.01。

咳嗽次數(shù)（次）79.4±14.9 33.4±4.5**50.5±9.8**50.1±7.7**43.1±7.7**組別模型組陽性對(duì)照組（枸櫞酸噴托維林片）野茉莉葉水提物低劑量組野茉莉葉水提物中劑量組野茉莉葉水提物高劑量組咳嗽潛伏期（s）31.4±11.6 43.9±9.9 38.0±4.2 50.0±3.9**53.5±20.3**

3 討論

以上藥理實(shí)驗(yàn)表明，野茉莉葉水提物具有較明顯的抑菌、抗炎及止咳作用，對(duì)不同的致炎以及氨水致咳模型顯示了對(duì)抗作用，其能降低肉芽腫凈重，抑制角叉菜膠引起的足趾腫脹和二甲苯引起的耳廓腫脹，延長氨水引咳潛伏期并降低咳嗽次數(shù)等功能作用，同時(shí)，通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明，野茉莉葉水提物具有體外抑制大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙門氏菌及金黃色葡萄球菌的生長，但對(duì)白色念珠菌無生長抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與資料所載該藥的相關(guān)主治功效相符。

野茉莉作為一種重要的藥用植物，廣泛分布在我國秦嶺和黃河以南各省。研究表明，野茉莉葉中的木脂素類和五環(huán)三萜類化合物具有良好的生物活性，為其傳統(tǒng)功效的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)，也為其藥用資源的合理開發(fā)奠定了初步基礎(chǔ)。而對(duì)該藥材有效成分及作用機(jī)制的探討，有待進(jìn)一步深入研究。因此進(jìn)一步開拓野茉莉的應(yīng)用前景，開展野茉莉葉中化學(xué)成分藥理藥效學(xué)等方面的深入研究，對(duì)加快我國野茉莉資源的合理開發(fā)利用具有重要的學(xué)術(shù)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

1 國家中醫(yī)藥管理局.中華本草(第三冊(cè)).上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1999:446-448.

2 王國強(qiáng).全國中草藥匯編(卷三)(第三版).北京:人民衛(wèi)生出版社,2014:543.

3 Molla Y,Nedi T,Tadesse G,et al.Evaluation of the in vitro antibacteri?al activity of the solvent fractions of the leaves of Rhamnus prinoides L'Herit(Rhamnaceae)against pathogenic bacteria.BMC Complem Altern M,2016,16(1):287.

4 Pérezgonzález M Z,Gutiérrezrebolledo G A,Yépezmulia L,et al.Anti?protozoal,antimycobacterial,and anti-inflammatory evaluation of Cni?doscolus chayamansa(Mc Vaugh)extract and the isolated compounds.Biomed pharmacother,2017,89:89-97.

5 Han N,Chang C,Wang Y,et al.The in vivo expectorant and antitussive activity of extract and fractions from Reineckia carnea[J].J Ethnophar?macol,2010,131(1):220-223.