黃潔 李承紅 石奕

循環(huán)微顆粒在阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征表達(dá)及臨床意義

黃潔 李承紅 石奕

目的 分析阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(obstructive sleep apnea syndrome ，OSAS)患者血漿中血小板微顆粒(platelet microparticles ，PMP)和內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒(endothelial microparticles ，EMP)水平表達(dá)變化及其臨床意義。方法 以2014年1月-2016年1月在本院門診及住院治療的OSAS患者120例為研究對(duì)象，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組血漿中EMP、PMP水平，并比較OSAS患者治療前后EMP、PMP水平。結(jié)果 不同AHI的OSAS患者EMP、PMP水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OSAS患者中，AHI>30次/小時(shí)者EMP、PMP水平均高于AHI 5-15次/小時(shí)者和AHI>15-30次/小時(shí)者，而AHI>15-30次/小時(shí)者EMP、PMP水平均高于AHI 5-15次/小時(shí)者(P<0.05)。OSAS患者治療后EMP、PMP水平均明顯低于治療前，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 EMP、PMP水平變化在OSAS的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義，可作為其判斷病情和治療效果的重要生物學(xué)標(biāo)志物之一。

阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征；血小板微顆粒；內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒；臨床意義

阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(obstructive sleep apnea syndrome ，OSAS)是指在睡眠期間因上氣道阻塞導(dǎo)致反復(fù)發(fā)生的間歇性低氧血癥、高碳酸血癥，發(fā)病率在30-70歲人群中男性為10%-17%，女性為5%-9%[1]。循環(huán)微顆粒(microparticles，MPs)是指細(xì)胞激活或損傷時(shí)，以出芽的方式從胞漿膜表面脫落的，體積不等的膜性囊泡[2]，近年研究發(fā)現(xiàn)MPs具有很多生物學(xué)活性，并且在多種細(xì)胞生理過(guò)程中扮演重要角色，包括細(xì)胞間生物活性信號(hào)傳遞、免疫調(diào)節(jié)、凋亡、穩(wěn)定等[3]。隨著對(duì)它的認(rèn)識(shí)也不斷更新，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與許多疾病如血管性疾病、癌癥、糖尿病等密切相關(guān)[4-5]。在本研究中擬探討MPs中血小板微顆粒(platelet microparticles ，PMP)和內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒(endothelial microparticles ，EMP)在OSAS患者中水平表達(dá)變化及其臨床意義。

資料與方法

一、 一般資料

以2014年1月-2016年1月在本院門診及住院治療的OSAS患者120例為研究對(duì)象，其中輕度患者56例，中度患者40例，重度患者24例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①OSAS診斷符合2011年中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，其中睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)5-15次/小時(shí)為輕度、>15-30次/小時(shí)為中度、>30次/小時(shí)為重度；②患者能配合完成多導(dǎo)睡眠圖(PSG)監(jiān)測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其它肺部疾病如阻塞性肺疾病、支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張癥、肺纖維化、肺結(jié)核、胸腔積液等；②合并心血管疾病、糖尿病等其他慢性內(nèi)科疾病。OSAS組120例：男88例，女32例，平均年齡(55.64±8.06)歲。各組間性別和年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。各組間性別和年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本臨床研究的各程序已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

二、 方法

1 PSG監(jiān)測(cè)：所有研究對(duì)象均在我科接受每晚至少7小時(shí)的多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)(PSG)(儀器采用邦德安百N7000型睡眠監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(北京中美特新醫(yī)藥療用品有限公司)，監(jiān)測(cè)內(nèi)容包括口鼻氣流、血氧飽和度、胸腹運(yùn)動(dòng)、鼾聲、腦電圖、眼電圖、肌電圖等。檢測(cè)當(dāng)天禁服咖啡因、酒精、鎮(zhèn)靜劑、催眠藥等。

2 EMP、PMP測(cè)定：各組于清晨空腹時(shí)抽取肘靜脈血6mL經(jīng)EDTA抗凝后，立即加入前列腺素E1(PGE1)11μL和三磷酸腺苷雙磷酸酶(Apyrase，sigma公司)5μL, 400 ×g離心15 min得到富血小板血漿，然后以1800×g離心15 min后得無(wú)血小板血漿(PPP)，吸取上層血漿置于-80℃凍存，用于測(cè)定血漿EMP、PMP水平的檢測(cè)。應(yīng)用流式細(xì)胞儀(美國(guó) BECKMAN 公司的 EPICS AlTRA Ⅱ)檢測(cè)血漿EMP、PMP：PE標(biāo)記的抗CD41a抗體、FITC標(biāo)記的抗CD31抗體、APC標(biāo)記的Annexin V 均購(gòu)于BD公司；0.3um和0.8um的標(biāo)準(zhǔn)微球購(gòu)于sigma公司；絕對(duì)計(jì)數(shù)微球購(gòu)于Ebioscience公司。凍存后的PPP在0℃解凍，每管取PPP 40μL,分別與10μL抗CD31抗體和抗CD41a抗體充分混合，避光孵育20min后，分別加入420μL結(jié)合緩沖液及5μL Annexin V抗體，充分混勻后經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定EMP、PMP。對(duì)照管選用5μL鼠抗人IgG-PE,加入462μL結(jié)合緩沖液、5μL Annexin V抗體、1.5μL 0.3μm及1.5μL 0.8μm的標(biāo)準(zhǔn)微球，再加入5μL絕對(duì)計(jì)數(shù)微球，混合后行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。

三、觀察指標(biāo)

微顆粒水平(EMP、PMP)、OSAS患者治療前后(治療為每天4-8h的無(wú)創(chuàng)呼吸機(jī)治療3個(gè)月)微顆粒水平。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、各組血漿微顆粒水平變化的比較

不同AHI的OSAS患者EMP、PMP水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OSAS患者中，AHI>30次/小時(shí)者EMP、PMP水平均高于AHI 5-15次/小時(shí)者和AHI>15-30次/小時(shí)者，而AHI>15-30次/小時(shí)者EMP、PMP水平均高于AHI 5-15次/小時(shí)者，P<0.05，(見(jiàn)表1)。

表1 不同AHI的OSAS患者微顆粒水平比較

aP<0.05，與AHI 5-15次/小時(shí)者比較；bP<0.05，與AHI>15-30次/小時(shí)者比較

二、OSAS患者治療前后微顆粒水平比較

OSAS患者治療后EMP、PMP水平均明顯低于治療前，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01，(見(jiàn)表2)。

表2 OSAS患者治療前后微顆粒水平比較

aP<0.05，EMP與治療前比較；bP<0.05，PMP與治療前比較

討 論

MPs主要存在于外周血液循環(huán),根據(jù)細(xì)胞來(lái)源，可以分為PMP、EMP、粒細(xì)胞微顆粒(granulocyte microparticles, GMPs)、淋巴細(xì)胞微顆粒(lymphocyte microparticles,LMPs)等。PMP占總數(shù)量的70%-90%,病理狀態(tài)下，PMP的數(shù)目可明顯增多，為凝血蛋白組裝提供組織因子和陰離子磷脂表面，是介導(dǎo)這兩個(gè)復(fù)合物形成的最有效的陰離子磷脂，因此能夠介導(dǎo)凝血產(chǎn)生；研究證實(shí),PMP還能作用于不同的細(xì)胞，使其表達(dá)黏附分子，釋放大量的細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)血管反應(yīng)性、誘導(dǎo)血管生成以及腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移。EMP所占MPs約10%，主要通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞的活化或凋亡產(chǎn)生，被認(rèn)為是內(nèi)皮功能障礙的指標(biāo)。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EMP可通過(guò)釋放大量的炎癥因子、過(guò)氧化物酶，上調(diào)IL-1β、TNF-а的表達(dá)使大量的中性粒細(xì)胞聚集和激活，加重炎癥反應(yīng)[7]，并在血栓形成、血管生成、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)血管張力等方面中均起了重要的作用[8-10]。

OSAS患者在睡眠期間低氧血癥及高碳酸血癥交替發(fā)生，會(huì)導(dǎo)致超氧負(fù)荷增加，引起血管內(nèi)皮功能紊亂，導(dǎo)致系統(tǒng)性炎癥，而這些與高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中等心腦血管系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[11-12]，且已證實(shí)與代謝綜合征、其他呼吸系統(tǒng)疾病如慢性阻塞性肺疾病、支氣管哮喘等有很高的并存率[13-14]。因此，我們考慮OSAS可能與PMP、EMP等相關(guān)指標(biāo)密切相關(guān)。在本研究中，我們觀察EMP、PMP在OSAS患者中水平表達(dá)變化，并發(fā)現(xiàn)在不同AHI的OSAS患者EMP、PMP水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究數(shù)據(jù)表明，重度患者EMP、PMP水平均高于輕、中度患者，而中度患者EMP、PMP水平均高于輕度患者，提示OSAS患者的睡眠呼吸紊亂程度與內(nèi)皮功能損害、炎癥反應(yīng)等多方面正相關(guān)。

目前無(wú)創(chuàng)呼吸機(jī)是OSAS患者的標(biāo)準(zhǔn)而有效的治療方法。研究發(fā)現(xiàn)，OSAS患者采用輔助通氣不僅改善呼吸功能，糾正夜間低氧及高碳酸血癥等，還可明顯改善血管硬化和內(nèi)膜增厚，糾正血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，降低相關(guān)的心腦血管風(fēng)險(xiǎn)[15-16]。本研究中，我們對(duì)OSAS患者采用無(wú)創(chuàng)呼吸機(jī)治療3個(gè)月后發(fā)現(xiàn)EMP、PMP水平均明顯低于治療前，也說(shuō)明隨著AHI降低，EMP、PMP隨之下降，在OSAS疾病嚴(yán)重程度及演變中有非常重要的預(yù)示作用。

綜上所述，循環(huán)微顆粒中的EMP、PMP水平變化與OSAS嚴(yán)重程度及治療轉(zhuǎn)歸過(guò)程密切相關(guān)，可作為其病情變化的標(biāo)志物，亦可能為其重要的干預(yù)治療靶點(diǎn)，但還有待于更進(jìn)一步研究。

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Clinical significance of circulating microparticles levels in patients with obstructive sleep apnea syndrome

HUANGJie,LICheng-hong,SHIYi

DepartmentofRespiratoryMedicine,theAffiliatedHospitalofJianghanUniversity,Wuhan,Hubei430025,China

Objective To analyze the levels and clinical significance of platelet microparticles (PMP) and endothelial microparticles (EMP) in patients with obstructive sleep apnea syndrome. Methods 120 cases of OSAS were collected in our hospital from January 2014 to January 2016 as the research object, and their levels of EMP and PMP were detected by flow cytometry and compared before and after treatment. Results The difference of EMP and PMP were statistically significant in OSAS patients with different AHI, the levels of EMP and PMP in the AHI > 30/h group were significantly higher than in the AHI 5-15/h group and the AHI>15-30/h group, and it was higher in the AHI>15-30/h group than in the AHI 5-15/h group. The levels of EMP and PMP in patients with OSAS after treatment were significantly lower than before treatment. Conclusion Endothelial microparticles and platelet microparticle levels play important roles in the development of overlap syndrome, which can be used as biological markers of disease progression and treatment effect.

obstructive sleep apnea syndrome; platelet particles; endothelial microparticles; clinical significance

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.04.016

武漢市衛(wèi)生計(jì)生委醫(yī)療衛(wèi)生科研項(xiàng)目(No WX15D57)

430025 湖北 武漢，江漢大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科

李承紅，E-mail：lichenghong138@sina.com

2016-07-25]