高均超

摘要：文章建立了水產(chǎn)品中氯霉素藥物殘留量測(cè)定的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS），實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明：該方法用于氯霉素殘留的檢測(cè)中，靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度均能滿(mǎn)足檢測(cè)分析要求，在水產(chǎn)品中氯霉素藥物的殘留測(cè)定中具有很好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：氯霉素；殘留檢測(cè)；GC-MS/MS；試驗(yàn)；樣品前處理

1 引言

氯霉素（chloramphenicol，以下簡(jiǎn)稱(chēng)CAP）作為人工合成的廣譜抗菌藥，因其具有抑菌性和殺菌性而被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中的細(xì)菌性疾病預(yù)防及治療。但同時(shí)也帶來(lái)了水產(chǎn)品中氯霉素殘留的嚴(yán)重問(wèn)題。研究表明，氯霉素一般較穩(wěn)定，不易降解，在水產(chǎn)品中的殘留可通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，易引起人體血中毒，導(dǎo)致不可逆的再生障礙性貧血，嚴(yán)重影響人體的正常生理功能。因此，氯霉素殘留問(wèn)題已引起人類(lèi)的高度重視。本試驗(yàn)采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS），以串聯(lián)質(zhì)譜作為檢測(cè)器進(jìn)行試驗(yàn)檢驗(yàn)?，F(xiàn)將試驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果分析小結(jié)如下。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 試驗(yàn)原材料

魚(yú)肉組織，市場(chǎng)銷(xiāo)售。

2.1.2 主要試劑與材料

乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher Scientific公司）；氯霉素標(biāo)準(zhǔn)、衍生化試劑BSTFA（美國(guó)Supelco公司）；C18固相萃取柱（美國(guó)安捷倫公司）。

2.1.3主要儀器

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（78卯B-7000B，美國(guó)安捷倫公司）；均質(zhì)機(jī)（T18 digital，德國(guó)IKA公司離心機(jī)（CT18RT，上海天美公司）；固相萃取裝置（Visiprep DLSPE，美國(guó)Supelco公司）；分析天平（CP213，美國(guó)OHAUS公司）；氮吹儀（MG-2000，日本EYELA公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（SB-1100，日本EYELA公司）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：配制100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于1～4℃冰箱中冷藏，使用時(shí)用甲醇稀釋至相應(yīng)濃度做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。

2.3 樣品前處理

2.3.1 分離提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取魚(yú)肉（魚(yú)糜狀）（5±0.01）g于具塞離心管中，加人20mL乙酸乙酯，在組織勻漿機(jī)均質(zhì)1min后，用15mL乙酸乙酯清洗刀頭倒人離心管中，高速離心機(jī)10000r/min離心3min，將上清液倒入濃縮品中，濃縮近干，用甲醇-水（V：V=1：l）溶液5mL定容，待凈化。

2.3.2 固相萃取凈化

在固相萃取裝置上放置C18萃取柱，依次用甲醇、蒸餾水活化C18柱后抽干，將2.3.1定容液過(guò)柱，用5mL蒸餾水淋洗柱子，抽干后用甲醇溶劑洗脫，收集洗脫液于10mL試管中氮?dú)獯蹈伞?/p>

2.3.3 衍生化

吹干的試管中加人0.5mL的甲苯和0.2mL的BSTFA衍生化試劑，在70℃烘箱中衍生30min，取出后氮?dú)獯蹈?.5mL正已烷定容上機(jī)。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及質(zhì)控樣

分別配置0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/L濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，按2.3.3衍生化后進(jìn)樣制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，同時(shí)在2.3.1過(guò)程中稱(chēng)取2個(gè)樣品做添加回收率試驗(yàn)。

2.4 測(cè)定方法

2.4.1 儀器條件

色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm，0.5fun）；載氣：氦氣（99.999%）；恒流模式流速：1.0mL/min；進(jìn)樣：1.0nL，不分流；進(jìn)樣口溫度：250V；程序升溫：80℃保持1min，以20℃/min升溫至280℃，保持10min；離子化方式：電子轟擊（EI）；離子化能量：70eV；離子源溫度：230℃；傳輸線(xiàn)溫度270℃；溶劑延遲：3min；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。掃描范圍：50～450amu；定量方式：外標(biāo)法。

2.4.2 樣品測(cè)定

將衍生化后定容的樣品及標(biāo)準(zhǔn)裝入帶內(nèi)襯管的進(jìn)樣瓶中，按上述色譜-質(zhì)譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，通過(guò)色譜工作站記錄保留時(shí)間、峰面積及二級(jí)質(zhì)譜離子的豐度比。

3 結(jié)果與討論

3.1 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）優(yōu)化和選擇

在設(shè)定的色譜條件下對(duì)氯霉素衍生物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)試分析，首先采用全離子掃描確定目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和一級(jí)質(zhì)譜圖，設(shè)定質(zhì)譜條件優(yōu)化子離子及碰撞電壓。

3.2 方法的線(xiàn)性范圍

通過(guò)氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀分析氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，以峰面積對(duì)應(yīng)其濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，方法學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1，

3.3 方法回收率、精密度及檢出限

對(duì)樣品添加0.5和1.0mg/kg兩種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)，按試驗(yàn)步驟操作，每個(gè)濃度各添加5個(gè)平行樣品，進(jìn)行回收率重復(fù)測(cè)定。對(duì)樣品基質(zhì)空白進(jìn)行20次測(cè)定，按照3倍信噪比（S/N）作為定量檢出限，通過(guò)計(jì)算所得氯霉素檢出限為0.01mg/kg。

3.4 樣品的測(cè)定

為驗(yàn)證該方法的可靠性和準(zhǔn)確性，本次試驗(yàn)選擇市場(chǎng)銷(xiāo)售的鯽魚(yú)、草魚(yú)、鯉魚(yú)、河鱸及羅非魚(yú)20個(gè)樣品進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)選擇上述樣品做添加回收試驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)控。在檢測(cè)的樣品中均未檢出氯霉素藥物殘留，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

4 分析

本次試驗(yàn)所選擇的梯度濃度繪制的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程相關(guān)系數(shù)大于0.99以上，表明氯霉素在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，可滿(mǎn)足殘留檢出的定量要求，在對(duì)空白魚(yú)肉樣品添加的兩個(gè)濃度水平的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行質(zhì)控試驗(yàn)，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的回收率大于80%以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%，通過(guò)計(jì)算得到定量檢出限（LOD）為0.01mg/kg，以上指標(biāo)均符合藥物殘留試驗(yàn)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)的分析要求。

5 結(jié)論

試驗(yàn)表明，GC-MS/MS法前處理步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，雜質(zhì)干擾少，線(xiàn)性系數(shù)在0.99以上，檢出限可達(dá)到0.01mg/kg，方法簡(jiǎn)便、快速，具備良好的操作性，以及較高的準(zhǔn)確度和精密度，不失為一種高效的水產(chǎn)品氯霉素類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法，應(yīng)得到推廣使用。

參考文獻(xiàn)

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[2]葉賽，胡瑩瑩，張奎文，那廣水，姚子偉，王菊英，馬德毅. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定海水中氯霉素殘留量[J].分析試驗(yàn)室.2007（02）