陳靜，魏曉亮，陳雅琴

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高效液相色譜法測(cè)定多維礦物質(zhì)片中維生素C的含量

陳靜，魏曉亮，陳雅琴

（東北制藥集團(tuán)股份有限公司，遼寧 沈陽(yáng) 110027）

目的：建立多維礦物質(zhì)片中維生素C的高效液相色譜檢測(cè)方法。方法：色譜柱為Thermo ODS-2 HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為0.1%草酸溶液-甲醇（98∶2），流速為1.0 mL·min-1，柱溫為25 ℃，進(jìn)樣量為20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。結(jié)果：維生素C在6.91～27.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（=1），平均回收率為99.0%，RSD為1.31%（=9）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單，精密度好，準(zhǔn)確度高，可用于多維礦物質(zhì)片中維生素C的含量測(cè)定。

多維礦物質(zhì)片；維生素C；含量測(cè)定；高效液相色譜法

維生素C，又稱抗壞血酸，是人體必須的維生素之一。在生物體內(nèi)，維生素C是一種抗氧化劑，保護(hù)身體免于自由基的威脅，同時(shí)也是一種輔酶；其來(lái)源于各類新鮮蔬果及藥品。目前，維生素C已在感染及炎癥、防治腫瘤、心血管等疾病中有廣泛的應(yīng)用[1,2]。因此，維生素 C 的含量成為評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥品質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。

文獻(xiàn)報(bào)道的食品與藥品中維生素 C的檢測(cè)方法主要包括滴定分析法[3]、光度法[4]、電化學(xué)法[5]、液相色譜法[6]以及原子吸收間接法[7]等。對(duì)于成分較復(fù)雜的制劑來(lái)說(shuō)，常見(jiàn)的滴定分析法存在滴定終點(diǎn)判定困難的弊端，其它方法也存在專屬性差、或所用分析儀器應(yīng)用普及性不高的缺點(diǎn)。而液相色譜法較其它方法有著靈敏度高，專屬性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)。本文建立了一種高效液相色譜法，可以快速、準(zhǔn)確的測(cè)定多維礦物質(zhì)片中維生素C的含量。

1 儀器與試藥

Waters E2695高效液相色譜儀（沃特世公司）；MSU125P-100DU型電子天平（賽多利斯公司）；DL-820B超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）。維生素 C對(duì)照品（購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100425-201504）；維生素C原粉（東北制藥集團(tuán)股份有限公司，含量為99.9%）；多維礦物質(zhì)片（東北制藥集團(tuán)股份有限公司研究院， 批號(hào)為20150619、20150820、20150821）；愛(ài)樂(lè)維（外購(gòu)，批號(hào)為ARV316）；其他成分與輔料均由東北制藥集團(tuán)股份有限公司提供；水為超純水；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo ODS-2 HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1% 草酸溶液-甲醇（98∶2）；流速：1.0 mL∶min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取維生素C對(duì)照品13 mg， 置100 ml量瓶中，加10 g·L-1草酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取多維礦物質(zhì)片（批號(hào)為20150619）20片，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于維生素C 65.6 mg），置250 mL量瓶中，加10 g·L-1草酸溶液適量，超聲2 min，冷卻至室溫，用10 g·L-1草酸溶液稀釋至刻度，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液5.0 mL置100 mL量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

取除維生素C的其余原輔料，按處方比例混合，照2.2.2項(xiàng)下方法操作，制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣 20μL，記錄色譜圖。結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液主峰位置無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 3種溶液的HPLC色譜圖

A. 對(duì)照品溶液； B. 供試品溶液； C. 陰性對(duì)照溶液

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取維生素C對(duì)照品適量，加10 g·L-1草酸溶液制成每1 mL中含108 μg的溶液，作為貯備液。分別精密量取貯備液3.2 mL置50 mL量瓶、1.0 mL置10 mL量瓶、6.5 mL置50 mL量瓶、2.0 mL置10 mL量瓶、2.5 mL置10 mL量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀釋成不同濃度的溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度（）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積（）為縱坐標(biāo)，得回歸方程=47006+2139，相關(guān)系數(shù)=1。結(jié)果表明維生素在6.91～27.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。計(jì)算維生素C峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.09%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批多維礦物質(zhì)片（批號(hào)為20150619）20片，研細(xì)，稱取6份，制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜圖，測(cè)定維生素C的標(biāo)示百分含量。6份樣品的平均含量為97.8%，RSD為1.62%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

取不含維生素C的其它成分及輔料9份，分別置于9個(gè)250 mL量瓶中，精密稱取維生素C原粉（含量：99.9%）52.5 mg、65.6 mg、78.7 mg各3份，置于上述250 mL量瓶中，按“2.2.2”項(xiàng)下配制成高、中、低3個(gè)濃度樣品，每個(gè)濃度3份樣品，測(cè)定維生素C的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.0%，RSD=1.31%。見(jiàn)表1。

表1 維生素C回收率測(cè)定結(jié)果

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.2.2”項(xiàng)下方法，制備1份供試品溶液，分別于配制后0，1，2，3，4 h進(jìn)樣，測(cè)定維生素C峰面積的RSD為0.89%，表明供試品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 耐用性試驗(yàn)

通過(guò)適當(dāng)改變流動(dòng)相比例，改變流動(dòng)相不同鹽濃度，選用2種不同型號(hào)的液相色譜儀（日立L-2400及沃特世E2695），考察方法的耐用性。結(jié)果表明，供試品中維生素C的含量在不同考察條件下無(wú)明顯差別，方法耐用性良好。

2.10 檢測(cè)限與定量限

取維生素C對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋，得本法的檢測(cè)限為0.041 μg·mL-1；定量限為0.138 μg·mL-1。

2.11 樣品含量測(cè)定

取3批多維礦物質(zhì)片（批號(hào)為20150619、20150820、20150821）及1批愛(ài)樂(lè)維（批號(hào)為ARV316），按“2.2.2”項(xiàng)下方法，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定維生素C含量。結(jié)果3批多維礦物質(zhì)片及1批愛(ài)樂(lè)維中維生素C的含量分別為標(biāo)示量的98.5%，96.3%，95.4%，124.5%。

3 討論

多維礦物質(zhì)片中成分比較復(fù)雜，特別是含有多種礦物質(zhì)，金屬離子在樣品配制及測(cè)定中易起到催化作用，使得維生素C的穩(wěn)定性變差，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。本文考察了水、醋酸溶液[8]、草酸溶液[9]作為提取溶劑，發(fā)現(xiàn)采用草酸溶液作為溶劑，操作簡(jiǎn)單，方法回收率高，維生素C的溶液穩(wěn)定性良好。

通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法操作簡(jiǎn)單，專屬性、重現(xiàn)性、精密度良好，方法準(zhǔn)確、耐用，試用于成分復(fù)雜的多維礦物質(zhì)片中維生素C的含量測(cè)定。

［1］李志惠，宋海亭. 大劑量維生素C粉針治療社區(qū)獲得性下呼吸道感染[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006,15（3）：323-324.

［2］荊曉娟，杜冀暉，賀克儉. 維生素C在腫瘤治療中的作用研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2010, 16（4）：554-557.

［3］王元秀, 莊海燕. 微量滴定法測(cè)定獼猴桃中維生素C的含量[J]. 濟(jì)南大學(xué)學(xué)報(bào), 2001, 15: 374-378.

［4］陳煥文, 宋慶宇, 劉宏偉，等. 測(cè)定抗壞血酸的亞甲藍(lán)褪色光度法[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2001, 20(2): 55-57.

［5］Y. P. Wen, X. M. Duan, J. K. Xu, et al. One-step electrosynthesis of poly(3,4-ethylenedioxy-thiophene)-ethylsulfate matrix for fabricating vitamin C electrochemical biosensor and its determination in commercial juices. Chinese Journal of Polymer Science, 2012, 30(3): 460-469.

［6］李榮瑋，何曉艷，潘振宇. HPLC法測(cè)定小兒復(fù)方賴氨酸顆粒中維生素C的含量[J]. 中國(guó)藥師，2016，19（8）：1588-1589.

［7］劉國(guó)勝, 張玉銘, 王玨云，等. 用原子吸收間接法測(cè)定水果蔬菜和果汁飲料中的維生素C[J]. 河北大學(xué)學(xué)報(bào), 1999, 19(3): 260-263.

［8］中國(guó)藥典[S]. 2015年版. 二部. 1237.

［9］中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[S]. GB/T 5009.86-2003. 第二法．

Content Determination of Vitamin C in Multivitamin Mineral Tablets by HPLC

，，

（Northeast Pharmaceutical Group Co.,Ltd., Liaoning Shenyang 110027, China）

Objective: To establish a method for the content determination of vitamin C in multivitamin mineral tablets by HPLC. Methods: The content determination was performed on a Thermo ODS-2 HYPERSIL（250mm×4.6mm，5μm）column with 0.1% oxalic acid solution-methanol（98:2）as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was 25℃. The injection volume was 20μL and the detection wavelength was 254nm. Results: The linear range of vitamin C was 6.91～27.0 μg·mL-1（=1）, and the average sampling recovery was 99.0% with RSD of 1.31%(=9). Conclusion: The method is simple, precise and accurate, and it can be used for the determination of vitamin C in multivitamin mineral tablets.

multivitamin mineral tablets; vitamin C; content determination; HPLC

O 657

A

1004-0935（2017）10-1039-03

2017-07-24

陳靜（1984-），女，工程師，碩士學(xué)位，遼寧省沈陽(yáng)市人，2010年畢業(yè)于沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥物分析學(xué)專業(yè)，研究方向：藥物分析。