史毓杰，楊文林，林 立，陳惠勇，尹嘉文，陳嘉惠

尖銳濕疣是由HPV感染導(dǎo)致的性傳播疾病，該病易反復(fù)發(fā)作難以治愈，研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸與人體的免疫功能密切相關(guān)[1]。Toll樣受體(Toll-like receptor, TLR)通過識別病原相關(guān)分子模式激活機體免疫反應(yīng)，其中MyD88是TLR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中最重要的銜接蛋白。本課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88, MyD88)在尖銳濕疣患者中表達上調(diào)，且MyD88表達與血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、白細胞介素(interleukin, IL)-10呈正相關(guān)[2-4]。本實驗進一步探討MyD88通路下游關(guān)鍵因子白介素-1受體相關(guān)激酶-1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1, IRAK1)、白介素-1受體相關(guān)激酶-4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4, IRAK4)和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TNF receptor associated factor 6, TRAF6)在尖銳濕疣患者皮損組織中的表達，進一步明確HPV感染是否可以激活MyD88依賴的信號傳導(dǎo)通路。

1 材料與方法

1.1一般資料選取2014年5月～2017年5月廣州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的尖銳濕疣患者60例，均符合尖銳濕疣診斷標準[5]，并經(jīng)病理檢查確診。其中男性48例，女性12例，年齡24～62歲，平均(42.25±1.33)歲；病程時間1.2～18.3個月，平均病程(3.85±1.40)個月，所有患者于就診前2周內(nèi)無抗病毒及免疫制劑治療史。取男性患者包皮、冠狀溝及肛周皮損組織，女性患者外陰及肛周皮損組織作為病損組織，同時選取我院行包皮環(huán)切術(shù)后的正常包皮組織60例作為對照組織，年齡25～60歲，平均(43.00±1.25)歲。所有組織經(jīng)10%中性福爾馬林固定后用石蠟包埋切片。

1.2方法IRAK1、IRAK4和TRAF6抗體由北京博奧森生物公司提供。采用丹麥Dako公司生產(chǎn)的通用型EnVision兩步法免疫組化試劑盒進行檢測，所有檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書要求進行。依據(jù)免疫組化染色陽性細胞比例計分：無陽性細胞染色為(-)，陽性細胞數(shù)1%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用率(%)表示，等級資料采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

60例尖銳濕疣患者和對照組在性別、年齡上差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

免疫組化檢測結(jié)果顯示IRAK1、IRAK4和TRAF6在對照組中多呈無表達(-)或低表達(+)；而在尖銳濕疣組中普遍表達，且高表達()例數(shù)較多，陽性表達的棕色顆粒主要位于基底細胞和棘層細胞的細胞質(zhì)和(或)細胞核內(nèi)(圖1～3)。

對兩組免疫組化結(jié)果按染色程度進行統(tǒng)計分析：對照組中3種因子無表達或低表達的比例分別為IRAK1(96.7%)、IRAK4(98.3%)、TRAF6(100%)，均顯著高于尖銳濕疣組。而尖銳濕疣組中，3種因子呈高表達()的比例分別為IRAK1(80%)、IRAK4(83.3%)、TRAF6(91.7%)，也顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。

3 討論

尖銳濕疣是國內(nèi)外目前較為常見的性傳播疾病，自20世紀80年代以來無論是發(fā)病率還是復(fù)發(fā)率均現(xiàn)顯著上升態(tài)勢，成為危害公共安全的重要疾病之一[6]。既往研究發(fā)現(xiàn)HPV進入人體后可形成持續(xù)性感染，而這種持續(xù)性感染與機體的免疫監(jiān)視功能發(fā)生障礙有關(guān)。在TLRs信號傳導(dǎo)的途徑中，MyD88是關(guān)鍵的接頭分子，是啟動下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的靶分子[7]。MyD88表達激活可促進下游包括NF-κb在內(nèi)的多條免疫途徑活化，促進體內(nèi)各種炎癥因子的釋放。

表1 尖銳濕疣組織中IRAK1、IRAK4、TRAF6的表達[n(%)]

①A①B②A②B③A③B

圖1對照組(A)和尖銳濕疣組(B)中IRAK1的表達，EnVision兩步法圖2對照組(A)和尖銳濕疣組(B)中IRAK4的表達，EnVision兩步法圖3對照組(A)和尖銳濕疣組(B)中IRAK6的表達，EnVision兩步法

房婕等[8]發(fā)現(xiàn)，初發(fā)和復(fù)發(fā)尖銳濕疣患者外周血CD3+T細胞內(nèi)MyD88和TRAF6蛋白表達顯著增加，而咪喹莫特聯(lián)合ALA-PDT治療組尖銳濕疣患者外周血CD3+T細胞內(nèi)MyD88和TRAF6蛋白表達顯著降低。本課題組前期實驗亦表明，MyD88在尖銳濕疣患者中表達上調(diào)，且MyD88表達與血清TNF-α、L-10呈正相關(guān)。本實驗進一步對MyD88通路的關(guān)鍵因子檢測發(fā)現(xiàn)，IRAK1、IRAK4和TRAF6在對照組中無表達或呈低表達，而在尖銳濕疣觀察組中普遍呈高表達，兩組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。MyD88與IRAK4結(jié)合后，會促進IRAK4介導(dǎo)的IRAK1磷酸化，高磷酸化的IRAK1進入胞質(zhì)募集可溶性TRAF6，從而導(dǎo)致兩種不同信號途徑的激活[9-10]。因此，結(jié)合前期實驗[2-4]和本實驗結(jié)果，上述通路相關(guān)因子的激活可能與尖銳濕疣的發(fā)生、發(fā)展以及復(fù)發(fā)存在某種關(guān)聯(lián)性，提示在尖銳濕疣患者中，HPV感染可以激活MyD88依賴的信號傳導(dǎo)通路，MyD88可能通過IRAK1、IRAK4和TRAF6的激活實現(xiàn)對下游TNF-α、IL-10等各種免疫因子的調(diào)節(jié)，導(dǎo)致機體的免疫抑制和免疫損傷。

綜上所述，尖銳濕疣患者MyD88及其通路相關(guān)因子IRAK1、IRAK4、TRAF6的表達顯著高于常人，通過對其進行深入分析和研究將有助于臨床尋找預(yù)防及治療尖銳濕疣的新途徑。

[1] Yin G W, Guo Y, Jin B. Expressions of NDRG1, VEGF and Ki-67 in condyloma acuminatum[J]. J Biol Regul Homeost Agents, 2016,30(3):773-776.

[2] 史毓杰, 熊 峰, 楊 健, 等. 髓樣分化因子88在尖銳濕疣組織中的表達及意義[J]. 中國皮膚性病學(xué)雜志, 2010,24(7):626-628.

[3] Shi Y J, Yang J, Yang W L. Mechanistic investigation of immunosuppression in patients with condyloma acuminata[J]. Mol Med Rep, 2013,8(2):480-486.

[4] 史毓杰, 楊 健, 楊文林, 等. 尖銳濕疣患者MyD88表達水平與血清TNF-α、IL-10的關(guān)系[J]. 皮膚性病診療學(xué)雜志, 2016,23(2):97-100.

[5] 趙 辨. 臨床皮膚病學(xué)[M]. 3版. 南京: 江蘇科學(xué)技術(shù)出版社, 2001:535-536.

[6] 蔡為民, 闞延靜, 耿建祥, 等. 子宮頸尖銳濕疣組織中HPV感染基因型別分布[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2015,31(4):395-398.

[7] Ren X, Wang L, Wu X. A potential link between TSLP/TSLPR/STAT5 and TLR2/MyD88/NFκB-p65 in human corneal epithelial cells for aspergillus fumigatus tolerance[J]. Mol Immunol, 2016,71:98-106.

[8] 房 婕, 李志豪, 陳 榕, 等. 尖銳濕疣患者外周血Toll樣受體7、髓系分化因子88、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6的表達[J]. 中華皮膚科雜志, 2013,46(5):332-335.

[9] Wen S J, Wu F Y, Fang L,etal. Associations of genetic polymorphisms of TLR5, TLR9 and transduction molecules in MyD88 signaling pathway with systemic lupus erythematosus in Zhuang and Han ethnics of Guangxi province, China[J]. Int J Clinic Exp Med, 2015,8(5):7872-7880.

[10] 駱 娟, 鄒福蘭, 梁小明, 等. 白細胞介素-1受體相關(guān)激酶在Toll樣受體通路中的作用及臨床意義[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版), 2013,11(7):3137-3140.