劉靜,關瑾,石爽,閻峰
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反相高效液相色譜法分離分析奧美拉唑及其相關組分
劉靜,關瑾,石爽,閻峰
(沈陽化工大學 應用化學學院,遼寧 沈陽 110142)
建立奧美拉唑及其兩種相關組分的反相高效液相色譜分離分析方法??疾炝司彌_鹽的種類、濃度和pH等色譜條件對分離分析的影響。以乙腈-15 mmol﹒L-1磷酸二氫鈉(pH 7.0)為流動相,在C18色譜柱上,采用梯度洗脫,對奧美拉唑及兩種相關組分進行分離分析。在優(yōu)化色譜條件下,奧美拉唑及兩種相關組分在10 min內(nèi)達到基線分離;奧美拉唑、2-巰基-5甲氧基-1H-苯并咪唑(雜質(zhì)A)和奧美拉唑硫醚(雜質(zhì)B)在各自測定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積的線性關系良好(2≥0.9960), 檢出限(信噪比為3)分別為15 ng﹒mL-1、15 ng﹒mL-1和30 ng﹒mL-1;樣品的回收率為98.4%~102.0%,相對標準偏差為0.62%~0.82%。該方法操作簡單、快速、準確可靠,并用于實際樣品的分析,獲得了令人滿意的結果。
奧美拉唑;反相高效液相色譜法;分離分析
奧美拉唑為世界上第一個質(zhì)子泵抑制劑藥物,用于治療消化性潰瘍[1-2]。該藥能選擇性地抑制胃壁細胞的 H+/K+-ATP酶,從而抑制胃酸的分泌,具有療效高、耐受性好等優(yōu)點[3-4]。2-巰基-5-甲氧基-1H-苯并咪唑(雜質(zhì)A)和奧美拉唑硫醚(雜質(zhì)B)為奧美拉唑的合成原料和中間體[5]。目前文獻報道的奧美拉唑的分析方法主要有紫外分光光度計法[6]、高效液相色譜法[7-10]、近紅外光譜法[11]和氣相色譜法[12]。本文采用反相高效液相色譜法同時分離分析奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B,并進行了方法學驗證。該方法操作簡單、快速、準確可靠,可用于奧美拉唑的質(zhì)量控制。
Agilent 1260高效液相色譜儀(包括DAD檢測、化學工作站,美國安捷倫公司)。奧美拉唑(含量質(zhì)量分數(shù)0.62%≥98.0%)、2-巰基-5甲氧基-1H-苯并咪唑(含量質(zhì)量分數(shù)≥99.0%),奧美拉唑硫醚(含量質(zhì)量分數(shù)≥99.0%)對照品(HPLC面積歸一化法測定其含量質(zhì)量分數(shù)),奧美拉唑原料藥由沈陽化工大學精細化工實驗室制備;乙腈(色譜純)和其他試劑(分析純)(天津市大茂化學試劑廠);水為二次重蒸水。
色譜柱:Hypersil ODS2-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流動相:乙腈(A)-15 mmol﹒L-1磷酸二氫鈉(B)(pH 7.0);梯度洗脫程序: 0~7min: 35% A~60% A,7~10 min: 60% A~35% A,10~15 min: 35% A;流速:1 mL﹒min-1;檢測波長: 302 nm;柱溫:30 ℃;進樣量:20 μL。
2.2.1 對照品儲備溶液的配制
精密稱取奧美拉唑、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B對照品各20 mg置10 mL容量瓶中,用甲醇將其溶解、定容、搖勻,制得濃度為2 mg﹒mL-1的標準儲備液。
2.2.2 供試品溶液的配制
精密量取奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B標準儲備液適量,制得奧美拉唑和雜質(zhì)B濃度均為50 μg﹒mL-1、雜質(zhì)A濃度為15 μg﹒mL-1的混合供試品溶液。
實驗考察了乙腈、甲醇對奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B分離分析的影響,乙腈表現(xiàn)出最佳分離效果。由于3個組分的極性相差較大,采用等度洗脫程序分離分析時間長,本實驗采取梯度洗脫程序。
圖1 緩沖溶液pH對奧美拉唑和雜質(zhì)A保留時間和分離度的影響
實驗考察了流動相中乙酸鹽和磷酸鹽溶液對分離分析的影響,磷酸鹽體的分離系更穩(wěn)定。實驗進一步考察了磷酸鹽濃度和pH對分離分析的影響,比較磷酸鹽濃度為10、15、20、25、30 mmol﹒L-1時對分離分析的影響,磷酸鹽濃度為15 mmol﹒L-1時,分離效果最好。實驗考察磷酸鹽溶液的pH對分離的影響,由圖1可見,隨著pH增大,分離度增大,但是保留時間延長。綜合考慮分離度和分析時間,選擇pH為7。
圖2 奧美拉唑及雜質(zhì)A、雜質(zhì)B的HPLC色譜圖
1- 雜質(zhì)A;2- 奧美拉唑;3-雜質(zhì)B
以乙腈-15 mmol﹒L-1磷酸二氫鈉(pH 7.0)為流動相,在C18色譜柱上,采用梯度洗脫,奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的分離色譜圖見圖2,各色譜峰分離度均大于3,理論塔板數(shù)不小于5 000。
2.4.1 方法的線性范圍、檢測限和定量限
配制奧美拉唑系列標準溶液,濃度范圍為1 ~ 1 200 μg﹒mL-1;雜質(zhì)A系列標準溶液,濃度范圍為0.05~1 μg﹒mL-1;雜質(zhì)B系列標準溶液,濃度范圍為0.12~2.4 μg﹒mL-1。以目標分析物峰面積為縱坐標()、質(zhì)量濃度為橫坐標(,μg﹒mL-1)繪制標準曲線,其線性范圍、回歸方程和相關系數(shù)(2) 見表1。2均大于0.996 0,表明奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B在各自的線性范圍內(nèi)呈良好的線性關系。分別以3倍和10倍信噪比(S/N)確定方法的檢測限和定量限,奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的檢測限分別為15、15、30 ng﹒mL-1,定量限分別為30、50、120 ng﹒mL-1。
表1 奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的線性范圍、線性方程、相關系數(shù)
2.4.2 精密度試驗
制備800、1 000、1 200 μg﹒mL-1的奧美拉唑溶液各6份;0.05、1 μg﹒mL-1的雜質(zhì)A溶液各6份;0.12、1 μg﹒mL-1的雜質(zhì)B溶液各6份,按“2.1”節(jié)色譜條件測定峰面積和保留時間,奧美拉唑、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B峰面積和保留時間的日內(nèi)精密度的RSD分別均小于2.79%、1.65%,連續(xù)分析3天,峰面積和保留時間的日間精密度的RSD分別均小于2.40%、0.93%,表明儀器精密度良好。
2.4.3 回收率試驗
制備濃度為50 μg·mL-1的奧美拉唑樣品溶液9份,分別添加濃度為25、500和1 000 μg﹒mL-1的標準樣品溶液各3份,測定回收率。在1 mg﹒mL-1奧美拉唑樣品溶液中按0.1%的雜質(zhì)限度(雜質(zhì)的質(zhì)量濃度為1 μg﹒mL-1)加入雜質(zhì)A和雜質(zhì)B,每個樣品制備6份,測定雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的回收率。本方法測得回收率結果為98.4%~102.0%,RSD為0.62%~0.82%,此方法準確度良好。
2.4.4 真實樣品含量測定
準確稱取實驗室自制奧美拉唑樣品10 mg,置于10 mL容量瓶中,用甲醇定容,按照“2.1”節(jié)的色譜條件進行含量測定,共測試 3批,結果見表2。
表2 真實樣品含量測定結果
奧美拉唑含量在97.5%~99.3%,雜質(zhì)A和雜質(zhì)B含量在定量限以下。
本文建立了奧美拉唑及兩種相關組分分離分析的反相高效液相色譜法。以乙腈-15 mmol﹒L-1磷酸二氫鈉(pH 7.0)為流動相,采用梯度洗脫對奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B進行了分離分析,奧美拉唑、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B在10 min內(nèi)達到基線分離。該方法具有操作簡便、快速等優(yōu)點,可用于奧美拉唑的質(zhì)量控制。
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Separation and Analysis of Omeprazole and Its Related Components by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography
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(Shenyang University of Chemical Technology, Liaoning Shenyang 110142, China)
A method for separation and analysis of omeprazole and its two related components by high performance liquid chromatography was established. The effect of buffer salt type and concentration,pH and other chromatographic conditions on the separation and analysis was investigated.Acetonitrile-15 mmol·mL-1phosphate(pH 7) was used as mobile phase,the omeprazole and two related components was separated and analyzed on the C18 column by gradient elution. Under optimized chromatographic conditions,omeprazole and two related components achieved baseline separation within 10 min;In the range of a certain mass concentration,omeprazole, 2-mercapto-5-methoxy-1H-benzimidazole(impurity A)and omeprazole thioether(impurity B) showed good linearity with their peak area respectively(2≥0.9960),their detection limits (signal-to-noise ratio was 3) were15 ng·mL-1, 15 ng·mL-1and 30 ng·mL-1,respectively;the recovery of the sample was 98.4%~102.0%,and the relative standard deviation was 0.62%~0.82%. The method is simple,fast,accurate and reliable, so it can be applied to analyze real samplesand satisfactory results can be obtained.
omeprazole; reversed-phase high performance liquid chromatography; separation and analysis
2017-10-11
劉靜(1991-),女,碩士研究生,內(nèi)蒙古赤峰人,2018年畢業(yè)于沈陽化工大學化學專業(yè),研究方向:應用分析。
關瑾(1967-),女,錫伯族,副教授,博士,研究方向:應用化學。
遼寧省自然科學基金,項目號:2015020701。
R917
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1004-0935(2017)12-1222-03