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        高效液相色譜-熒光檢測(cè)法同時(shí)分析沼液中4種喹諾酮類(lèi)抗生素

        2017-03-18 01:24:54林曉旭何世妍葉永盛陳偉雪
        化工管理 2017年2期
        關(guān)鍵詞:諾氟沙星類(lèi)抗生素喹諾酮

        林曉旭何世妍葉永盛陳偉雪

        (1廣東省測(cè)試分析研究所(中國(guó)廣州分析測(cè)試中心),廣東 廣州 510070)

        (2廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司,廣東 廣州 510130)

        高效液相色譜-熒光檢測(cè)法同時(shí)分析沼液中4種喹諾酮類(lèi)抗生素

        林曉旭1何世妍2葉永盛1陳偉雪1

        (1廣東省測(cè)試分析研究所(中國(guó)廣州分析測(cè)試中心),廣東 廣州 510070)

        (2廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司,廣東 廣州 510130)

        檢測(cè)沼液中的喹諾酮抗生素,可以避免抗生物污染問(wèn)題。本文主要采用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法分析沼液中4種喹諾酮抗生素藥物的含量。檢測(cè)發(fā)現(xiàn),沼液中喹諾酮含量最高可達(dá)478μg/L,說(shuō)明沼液抗生素污染已經(jīng)成為重點(diǎn)問(wèn)題,需要加強(qiáng)關(guān)注和治理。

        沼液;喹諾酮類(lèi)抗生素;高效液相色譜;熒光檢測(cè)法

        動(dòng)物由于難以吸收大部分抗生素,導(dǎo)致藥物以代謝的形式流入到環(huán)境中,對(duì)環(huán)境及生物的成長(zhǎng)造成了巨大的影響。喹諾酮類(lèi)抗生素具有抗菌、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單以及低毒性等特點(diǎn),目前已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于禽畜的飼養(yǎng)中[1]。但是在目前的研究中,動(dòng)物糞便中的喹諾酮抗生素殘留研究較多,而對(duì)沼液中的藥物鮮有研究,因此,探究沼液中的喹諾酮抗生素具有重要的價(jià)值。

        1 實(shí)驗(yàn)材料與方法探究

        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

        高效液相色譜儀;色譜柱(250*4.6mm,Shim-Pack,VPODS);真空泵;十二孔固相萃取裝置;超聲波清洗儀;固相萃取柱;抽濾裝置;玻璃纖維微膜(0.7μm)[2]

        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

        環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星以及恩諾沙星;四丁基溴化銨;氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸、檸檬酸、鹽酸等。

        1.3 配置實(shí)驗(yàn)溶液

        緩沖液:配置0.1、0.2和0.4mol/L濃度的Na2EDTA、檸檬酸以及Na2HPO4混合溶液。之后配置McIIvaine緩沖液,采用0.1mol/L濃度的檸檬酸以及Na2HPO4混合。將兩種緩沖液混合,制作成Na2EDTA-McIIvaine緩沖液,PH為4.0.

        1.4 樣本收集

        取3個(gè)地區(qū)的沼液,在室溫下保存,運(yùn)用濾紙過(guò)濾懸浮物,之后通過(guò)玻璃纖維過(guò)濾,取50ml,加入鹽酸調(diào)節(jié)PH到4.0,以1ml/min速率通過(guò)固相萃取柱,之后用甲醇洗脫至離心管,40℃下蒸發(fā)后用2ml超純水復(fù)溶,再過(guò)濾后存儲(chǔ)待測(cè)。

        1.5 色譜條件及標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

        色譜柱溫度為30℃,流動(dòng)相為10.1mol/L,熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm,發(fā)射波長(zhǎng)設(shè)置為450nm。

        標(biāo)準(zhǔn)溶液分別配制成0.002、0.005、0.1、0.2、1、2和5mg/L溶液。

        回收率(%)=(抗生素濃度-對(duì)照濃度)/加標(biāo)劑量*100%。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 選擇提取劑

        經(jīng)過(guò)綜合分析,發(fā)現(xiàn)使用Na2EDTA可以降低雜質(zhì),且成本較低。

        2.2 色譜分離條件

        實(shí)驗(yàn)波長(zhǎng)為280nm,發(fā)射波長(zhǎng)為450nm,探究PH為2.0-4.0的分離效果。研究發(fā)現(xiàn),PH=2.5-3.0時(shí),可以較好的確定基線(xiàn)分離,出峰時(shí)間為25min左右。

        在流速的確定方面,本次研究選擇了0.6、0.8以及1.0ml/ min三個(gè)流速,經(jīng)研究,發(fā)現(xiàn)1.0ml/min為最佳流速。

        2.3 回收率

        在樣品中分別添加0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0mg/L溶液,每個(gè)樣本取三份樣品進(jìn)行試驗(yàn),探究樣品回收率及偏差水平,發(fā)現(xiàn)4種喹諾酮抗生素的回收率在81.2%-104.6%之間,標(biāo)準(zhǔn)差<10%,說(shuō)明試驗(yàn)成功。

        2.4 實(shí)際檢測(cè)成果

        利用上述試驗(yàn)對(duì)收集的樣本進(jìn)行喹諾酮抗生素檢測(cè),檢驗(yàn)成果說(shuō)明豬糞發(fā)酵的沼液中,喹諾酮抗生素含量約為478μg/L;牛糞發(fā)酵的沼液中,喹諾酮抗生素含量約為182.6μg/L;雞糞發(fā)酵的沼液中,喹諾酮抗生素含量約為201.2μg/L;其可能是與獸藥以及動(dòng)物的消化系統(tǒng)相關(guān),導(dǎo)致研究結(jié)果存在差異。另外,環(huán)丙沙星的濃度為7-18μg/L,恩諾沙星為62-161μg/L;諾氟沙星為59-201μg/L;標(biāo)準(zhǔn)差<10%。其可能是由于諾氟沙星的水溶性較好,容易排出,因此在沼液中的含量相對(duì)較高。具體檢測(cè)數(shù)值如表1所示。

        表1 沼液中4種喹諾酮抗生素含量表

        3 結(jié)語(yǔ)

        采用固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測(cè)方式,可以較好的探究沼液中喹諾酮抗生素藥物的類(lèi)型,檢測(cè)范圍可以達(dá)到0.004-0.01μg/ml,準(zhǔn)確性較高,采用該方式對(duì)以雞糞、牛糞和豬糞發(fā)酵的沼液中發(fā)現(xiàn),諾氟沙星在豬糞發(fā)酵中最高,恩諾沙星在牛糞發(fā)酵沼液中最高,氧氟沙星在雞糞發(fā)酵沼液中最高。

        [1]王橋軍,亦如瀚,莫測(cè)輝.固相萃取-高效液相色譜-熒光法測(cè)定水中喹諾酮類(lèi)抗生素[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,12:7272-7274.

        [2]戴曉虎,薛勇剛,劉華杰,等.基于固相萃取及高效液相色譜-熒光檢測(cè)分析的污泥中氟喹諾酮類(lèi)抗生素研究方法的開(kāi)發(fā)[J].環(huán)境科學(xué),2016,04:1553-1561.

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