牛俊樂+黃斌+黃秋月

摘 要：該試驗以胭脂紅石榴果皮為原料，采用乙醇提取法，借助于正交試驗結(jié)果分析對其果皮黃酮類化合物提取工藝進行優(yōu)化方案分析，并用最優(yōu)提取工藝測定其黃酮類化合物的含量。結(jié)果表明：黃酮類化合物最適提取工藝條件為乙醇體積分數(shù)70%，提取時間40min，料液比1∶40，此時提取的石榴皮黃酮類化合物的含量為148.09mg/g。

關(guān)鍵詞：石榴皮；黃酮類化合物；提取工藝；優(yōu)化

中圖分類號 TS201 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）04-0074-02

石榴（Punica granatum L.），又稱為安甘石榴、安石榴[1]等，石榴果肉中具有很高的營養(yǎng)價值和醫(yī)用保健價值，含有大量的糖類物質(zhì)、氨基酸、必需微量元素及各種維生素等[1]；石榴皮含有蘋果酸、枸椽酸以及大量的黃酮類化合物[2]。而黃酮類化合物既有保健功能，又有藥理價值，無論是在清除自由基方面，還是在抗癌、防癌方面都有著到不容小覷的作用。

隨著科研技術(shù)的發(fā)展，黃酮類化合物的提取測定方法也多種多樣，其中可以單獨使用的方法有超聲提取法、微波法、有機溶劑浸提法及超臨界提取等[3-6]。目前，紫外分光光度法、高效液相色譜法及顏色判別法是黃酮分離及鑒定的重要途徑[7]。經(jīng)過科學研究證明，超聲波乙醇法提取黃酮的得率最佳[8-9]，本試驗即采用超聲波乙醇法并結(jié)合分光光度來測定黃酮含量。本試驗對石榴皮的黃酮類化合物進行提取測定和工藝優(yōu)化，為今后石榴皮中黃酮類化合物的提取提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 試驗材料為新鮮采摘的普通胭脂紅石榴。挑選無病蟲害的洗干凈進行人工去皮，去隔瓤后切成小片，置于烘箱中70～80℃下3～5h烘干、碾碎，再用過濾網(wǎng)過濾，最后密封保存于干燥避光處待用。試驗儀器：FAI204B電子分析天平、KQ-200KDB型高功率數(shù)控超聲波清洗器、電熱恒溫鼓風干燥箱、16s紫外可見分光光度計、石英比色皿、具塞比色管、容量瓶、研缽、漏斗、具塞三角瓶等。

1.2 試驗方法

1.2.1 黃酮類化合物的提取 采用超聲波乙醇提取法。蘆丁標準曲線的制備：精密吸取0.032mg/mL的蘆丁標準溶液0、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別放至6個10mL的具塞刻度試管中（帶標簽），用60%乙醇定容至10mL，輕輕震蕩使其均勻。用標準管在紫外分光光度計進行吸收光譜掃描（掃描波長范圍為190～400nm），測出蘆丁的最大吸收波長為258nm，因此本實驗在258nm下直接測定吸光值。數(shù)據(jù)記錄見圖1。

1.2.2 石榴果皮黃酮類化合物的測定方法

1.2.2.1 石榴皮中黃酮類化合物提取的單因素試驗 精確稱取1.000 0g石榴皮粉末，對乙醇體積分數(shù)、提取時間、料液比3個因素設(shè)計不同水平進行單因素試驗，在258nm下測定吸光值，考察各因素對總黃酮含量影響。各因素水平如表1所示。

1.2.2.2 石榴皮中黃酮類化合物提取的正交試驗 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選擇合適的乙醇體積分數(shù)、料液比、提取時間，設(shè)計3因素3水平，進行L9（33）正交試驗并進行方差分析；選取最優(yōu)方案進行驗證試驗，通過計算則可得出石榴皮在最佳條件下的黃酮類化合物含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS進行試驗數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗結(jié)果分析 由表2可知：以測得其吸光值為參考指標時，影響石榴皮中黃酮類化合物提取因素的主次順序為：乙醇體積分數(shù)>提取時間>料液比。而在提取時間40min、料液比1∶40、乙醇體積分數(shù)70%時，提取的石榴皮的黃酮類化合物含量最高。由表3方差分析結(jié)果可以看出，在山胭脂紅石榴黃酮類化合物提取過程中，A提取時間對黃酮類化合物提取影響顯著；C乙醇體積分數(shù)對黃酮類化合物提取有極顯著影響；而B料液比則無顯著影響。這與表2極差分析結(jié)果一致。

2.2 驗證試驗 以最適工藝A3B3C2，即提取時間40min、料液比1∶40、乙醇體積分數(shù)70%，進行石榴皮中黃酮類化合物提取優(yōu)化工藝驗證試驗。由表4可知：石榴皮中黃酮類化合物的提取在最優(yōu)工藝下均高于正交試驗中任何一組試驗，說明通過正交試驗優(yōu)化的提取工藝參數(shù)比較穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，適用于石榴皮中黃酮類化合物的提取。用紫外分光光度計測定得出其平均吸光值為0.601，黃酮類化合物的含量為148.09mg/g。

3 結(jié)論與討論

本試驗以胭脂紅石榴果皮為原料，采用乙醇超聲提取法，借助于正交試驗對其黃酮類化合物提取工藝進行優(yōu)化，并用最優(yōu)提取工藝測定其黃酮類化合物含量。研究結(jié)果表明：最優(yōu)提取工藝條件為：乙醇體積分數(shù)70%，提取時間40min，料液比1∶40，測得黃酮類化合物的含量為148.09mg/g。

關(guān)于黃酮類化合物的測定方法有多種，本試驗采用的是乙醇超聲提取法。許宗運[10]等研究發(fā)現(xiàn)石榴皮中平均總黃酮含量為66.5mg/g；劉素果[11]等采用了優(yōu)化條件提取石榴皮中的黃酮類物質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)石榴皮黃酮含量為131.74mg/g。與許宗運等的研究相比，本試驗石榴皮黃酮類化合物含量偏高，可能是由于石榴品種、產(chǎn)地、成熟期、試驗條件、儀器及人為因素誤差等不同的影響所導致的。本試驗測得的數(shù)據(jù)則對今后石榴皮黃酮的提取研究測定提供了一定的理論依據(jù)。

參考文獻

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[11]劉素果.石榴果皮總黃酮的提取工藝[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學，2010.