強(qiáng)會(huì)萍 童江濱 江蘇省揚(yáng)州市江都區(qū)仙女鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 225200

雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

強(qiáng)會(huì)萍 童江濱 江蘇省揚(yáng)州市江都區(qū)仙女鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 225200

為了了解江蘇省揚(yáng)州地區(qū)雞沙門氏菌的感染和耐藥情況，采取對(duì)該地區(qū)5個(gè)雞場(chǎng)98份病雞組織進(jìn)行細(xì)菌分離，并進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)和致病性試驗(yàn)。經(jīng)過分離，得到24株沙門氏菌，血凝鑒定表明，有18株呈陽性，其中5株均能使雛雞致死。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，這5株沙門氏菌對(duì)甲硝唑、青霉素、替米考星和氨芐西林有高耐藥性；對(duì)慶大霉素比較敏感。沙門氏菌不僅耐藥性特別嚴(yán)重，而且是危害該地禽類養(yǎng)殖場(chǎng)的主要病原菌。

沙門氏菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

沙門氏菌病是一種由沙門氏菌屬細(xì)菌引起的一種人畜共患病。而沙門氏菌對(duì)于食品安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅，我國規(guī)模化養(yǎng)雞產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展，在帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，也產(chǎn)生了難以避免的危害?？股氐氖褂?，使得部分細(xì)菌產(chǎn)生極強(qiáng)的耐藥性，如沙門氏菌。針對(duì)這一要點(diǎn)，有關(guān)部門對(duì)江蘇省揚(yáng)州地區(qū)雞沙門氏菌病原進(jìn)行了分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，希望對(duì)今后防治該病提供扎實(shí)的理論依據(jù)。

1 材料

（1）病料來源。收集的98份來自江蘇省揚(yáng)州地區(qū)5個(gè)雞場(chǎng)，從2016年3月至2016年5月疑患沙門氏菌病的病料組織。

（2）培養(yǎng)基。三糖鐵瓊脂（TSI）、SS 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和HE營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，南京某技術(shù)有限公司。

（3）沙門氏菌屬診斷血清。沙門氏菌A～F群“O”多價(jià)診斷血清,中國生物技術(shù)集團(tuán)公司江蘇生物制品研究所。

（4）試驗(yàn)藥物。痢菌凈、替米考星、青霉素、甲硝唑、氨芐西林，江蘇南京動(dòng)物藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20150114；慶大霉素、頭孢拉定、頭孢唑啉，蘇州微生物試劑有限公司，批號(hào)：20151335[2]。

（5）試驗(yàn)動(dòng)物。1日齡健康雛雞,揚(yáng)州某雞場(chǎng)。

2 方法

（1）病料采集。于發(fā)病地區(qū)采集病雞，臨床癥狀表現(xiàn)為怕冷，減食或廢食，排乳白色稀薄黏膩糞便，肛門周圍污穢，閉目呆立。致死，剖檢取其心、肝、脾、肺和腸于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）沙門氏菌的分離鑒定。實(shí)驗(yàn)室無菌，將病料組織劃線接種于HE營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h后觀察，挑取直徑約0.5mm的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，將革蘭氏陰性短桿菌接種于TSI中。

（3）血清型鑒定。挑取TSI中呈陽性的菌落進(jìn)行沙門氏菌A～F群“O”多價(jià)診斷血清玻片凝集試驗(yàn)，設(shè)生理鹽水為對(duì)照組。在平板上將瓊脂培養(yǎng)的細(xì)菌與少量生理鹽水混勻，再加入1滴沙門氏菌多價(jià)“O”抗血清，搖晃，觀察是否凝集。

（4）致病性試驗(yàn)。取5株沙門氏菌接種于培養(yǎng)液中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，取0.5mL菌液滴口于10只雛雞；設(shè)對(duì)照雞10只，滴口營養(yǎng)培養(yǎng)液。將雛雞隔離飼養(yǎng)，觀察發(fā)病和死亡情況。對(duì)死亡雞進(jìn)行剖檢，觀察其病理變化。

（5）藥敏試驗(yàn)。用Kirby-Bauer紙片法挑取單個(gè)菌落，分別接種在營養(yǎng)培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24h。用無菌生理鹽水制成0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)的菌懸液，吸取適量菌液在營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，表面均勻涂抹，蓋上平板，室溫放置幾分鐘，用小鑷子夾取藥敏紙片，貼于瓊脂表面，倒置，37℃培養(yǎng)16～18h。最后，觀察藥敏紙片周圍有無抑菌圈，并測(cè)量直徑（d）大小。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)d＞15mm為高度敏感；10.1＜d≤15mm為中度敏感；d≤10mm為耐藥。

3 結(jié)果

（1）病理變化。剖檢病雞的病理變化主要表現(xiàn)為肝臟土黃色、腎臟腫大、纖維素性心包炎和肝周炎。

（2）分離結(jié)果。在SS瓊脂平板上有透明或有黑色中心的菌落，HE瓊脂平板上有灰綠色、圓形、黑色中心的菌落；取單個(gè)菌落涂片，革蘭氏染色，在油鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)大量單個(gè)存在小短、兩端鈍圓的革蘭陰性桿菌；接種于TSI表現(xiàn)為斜面變紅，底層反應(yīng)呈陽性，產(chǎn)硫化氫和產(chǎn)酸，結(jié)果表明此分離菌疑似為沙門氏菌。玻片凝集試驗(yàn)結(jié)果：共有18個(gè)菌株呈陽性，其中5株呈強(qiáng)陽性，命名為 SH-1、SH-2、SL-3、SL-4 和 SI-5。

（3）致病性試驗(yàn)結(jié)果。雛雞接種強(qiáng)陽性的5株沙門氏菌，雛雞接種5h后開始死亡。病雞臨床表現(xiàn)為精神萎頓、呆立不動(dòng)、怕冷、食欲廢絕，最后死亡。剖檢結(jié)果顯示，病雞腸出血，腎腫大，肝呈土黃色。

（4）藥敏試驗(yàn)結(jié)果。5株沙門氏菌敏試驗(yàn)的結(jié)果，沙門氏菌菌株對(duì)慶大霉素比較敏感；對(duì)甲硝唑、青霉素、替米考星和氨芐西林等有較高的耐藥性；而對(duì)痢菌凈、頭孢唑啉、頭孢拉定等有不同程度的耐藥性。

4 小結(jié)與討論

（1）此次試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過分離鑒定得到的5株沙門氏菌，對(duì)大部分抗生素都具有不同程度的耐藥性。而且當(dāng)?shù)仉u沙門氏菌的耐藥性比較嚴(yán)重[3]。

（2）產(chǎn)生耐藥性的原因是長期盲目用藥和喂以抗生素含量高的飼料。鑒于病原菌容易產(chǎn)生耐藥性的這一特點(diǎn)，建議各地養(yǎng)殖場(chǎng)在治療該病時(shí)，盡量先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。臨床治療沙門氏菌病時(shí)應(yīng)根據(jù)本地區(qū)藥敏結(jié)果合理選用抗生素。為了防止盲目用藥造成的損失，應(yīng)當(dāng)先選出敏感藥物再進(jìn)行適當(dāng)、有效的治療措施。此外，在使用抗菌藥物來預(yù)防治療的基礎(chǔ)上，也要考慮用一些合適的生物制劑。

（3）檢疫并淘汰帶菌雞，建立好無菌雞群，從源頭上阻斷傳染源，斷開其傳播途徑，這些場(chǎng)是徹底凈化該病的科學(xué)選擇。

[1]楊曉輝，楊增岐．陜西關(guān)中地區(qū)雞白痢現(xiàn)狀調(diào)查［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008,29（9）：103-108．

[2]趙興緒，王雯慧，伏小平等．畜禽疾病診斷指南［M］．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010．

[3]中國獸藥典委員會(huì).中華人民共和國獸藥典二部(M).農(nóng)業(yè)出版社，2000：256.