劉慧+鄒玲+溫建新

摘 要：益生菌有益于機體健康，但在生產(chǎn)、保存過程中其活性常會降低；而包衣材料可以提高益生菌的穩(wěn)定性，從而更好地使其發(fā)揮益生作用。試驗通過平板計數(shù)法來評價3種包衣材料對5種不同益生菌（糞腸球菌、雙歧桿菌、酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌）的保護作用。結(jié)果表明，3種包衣材料對糞腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、酵母菌和芽孢桿菌均有一定保護作用，其中，20 d內(nèi)，包衣材料2對5種益生菌的保護作用較強；60 d內(nèi)，則是包衣材料1對5種益生菌的保護作用較強。

關(guān)鍵詞：包衣材料；益生菌；保護作用

中圖分類號：TS201.1 文獻標識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2017.02.019

Abstract： Probiotics can promote the health of the body， but they will reduce the activity in the process of production and preservation. The coating material can improve the stability of the probiotics， and thus better play its prebiotic effect. In this study， the protective effect of three coating materials on five probiotics （Enterococcus faecalis， Bifidobacterium， yeasts， Bacillus， Lactobacillus） was evaluated by plate counting method. The results showed that three kinds of coating materials had some protective effects on Enterococcus faecalis， Lactobacillus， Bifidobacterium， Saccharomyces and Bacillus. In 20 days， the protective effect of coating 2 on five probiotics was stronger； within 60 days， the protective effect of coating 1 on five probiotics was stronger.

Key words： coating materials； probiotics； protection

益生菌具有促進機體健康的作用，同時還有抗癌作用，對腸炎類疾病也有抑制作用[1]。益生菌制劑沒有殘留，沒有副作用、不會產(chǎn)生抗藥性，其開發(fā)前景以及發(fā)展前景非常廣闊[2]。在加工、運輸、貯存過程中，益生菌的活菌制劑容易失活，或者生物活性降低，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定[3]。在此方面包衣材料有著明顯的優(yōu)勢。

包衣技術(shù)是當今世界發(fā)展最為迅速的新型細胞技術(shù)之一，且用途廣泛。包衣材料應(yīng)用于益生菌的生產(chǎn)中很好地解決了益生菌不易大量生產(chǎn)和儲存期短等問題。益生菌在防治疾病和抗生素替代等方面展現(xiàn)出非凡的潛力，國際營養(yǎng)學(xué)界公認，益生菌是一種可定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)[4]，并可起到改善宿主健康和體內(nèi)微生態(tài)平衡的作用[4]。

1 材料和方法

1.1 材料及試劑

3種包衣材料（包衣液1，2，3）；5種益生菌（糞腸球菌、雙歧桿菌、酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌），由山東省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點實驗室保藏；5種培養(yǎng)基（甘露醇卵黃多黏菌素瓊脂基礎(chǔ)；糞腸球菌瓊脂；TPY瓊脂培養(yǎng)基；KF鏈球菌肉湯；MRS肉湯），購于青島海博生物科技有限公司。

1.2 方 法

F，R，S，J，Y這5種益生菌，各取0.5 mL，加入生理鹽水4.5 mL，進行倍比稀釋，稀釋至107。對照組，5種菌均取5，6，7這3個梯度，每梯度各取900 μL，加入生理鹽水100 μL，混勻，備用；試驗組，5種菌均取5，6，7這3個梯度，每梯度各取900 μL，分別加入包衣液100 μL，混勻，溫箱中作用6 h，備用。分別從第105，106 ，107 梯度中取出50 μL涂板，觀察各種菌的生長情況。以F菌為例。分別從對照組、試驗組取出50 μL涂板，觀察各種菌的生長情況。將剩余菌液置于4 ℃冰箱中待用。放置0，20，60 d分別涂板，觀察對比各種菌的生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 包衣材料對益生菌存活率第1次（0 d）試驗結(jié)果

根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，選取106，107稀釋度各50 μL進行涂板計數(shù)，其結(jié)果如表2所示。

如表2可知，這5種菌在3種包衣液中作用0 d，其數(shù)量級均可達到109。

2.2 包衣材料對益生菌存活率第2次（20 d）試驗結(jié)果

放置4 ℃冰箱中20 d，取106梯度50 μL進行涂板計數(shù)，其結(jié)果如表3所示。

由表3可知，這5種菌在3種包衣液中作用20 d，數(shù)量略有下降，但數(shù)量級仍可達到109；3種包衣液對各菌均有保護作用，包衣液3相對保護能力較弱。

2.3 包衣材料對益生菌存活率第3次（60 d）試驗結(jié)果

放置4 ℃冰箱中60 d，取106梯度50 μL進行涂板計數(shù)，鑒定結(jié)果如圖3～7所示。

由圖3～7所示，5種菌在3種包衣液中作用60 d，數(shù)量均有下降，約下降了2個數(shù)量級；但包衣液3保護能力較弱，其中包衣液3對乳酸菌的保護能力尤弱。

2.4 3種包衣材料對5種益生菌存活量結(jié)果

從圖8～14可以看出，3種包衣液對各菌均具有保護作用，其中，包衣1和包衣2保護作用相當；包衣液3保護能力呈現(xiàn)較弱，包衣液3對R菌的保護能力尤弱。

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，3種包衣材料對糞腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、酵母菌和芽孢桿菌均有保護作用，其中，包衣材料3的保護作用最弱，且對糞腸球菌和酵母的保護作用最低。20 d內(nèi)，包衣2對5種益生菌的保護作用較強；60 d內(nèi)，包衣1 對5種益生菌的保護作用較強。糞腸球菌在20～60 d內(nèi)包衣1 的保護作用較強；乳酸桿菌在20～60 d內(nèi)3種包衣保護作用相當；雙歧桿菌在20～60 d內(nèi)包衣3的保護作用較強；酵母菌在20 d內(nèi)包衣3的保護作用較強，在60 d內(nèi)則包衣1的保護作用較強；芽孢桿菌在20～60 d內(nèi)包衣1 的保護作用較強。

隨著益生菌的廣泛使用，有效保護益生菌的生理活性成為當前益生菌研究的重點[6]。益生菌在加工過程中，其活性還有可能受到溫度、濕度和壓力等外界環(huán)鏡的影響，其活性便會大幅度損失[7]。對于一個益生菌產(chǎn)品而言，在使用及保存期間保持強效的活力，是評價產(chǎn)品好壞最有效的準則[8]。就目前來說，多數(shù)益生菌產(chǎn)品在規(guī)定期限內(nèi)活菌的活力降低，致使大多數(shù)情況下益生菌往往達不到我國保健食品中對益生菌活菌數(shù)的要求[9]。如何提高益生菌的活力，提高益生作用，一直是人們關(guān)注和研究的熱點[10]。本試驗結(jié)果表明，3種包衣材料對5種益生菌具有不同的保護作用，為今后對這5種益生菌的保護和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。益生菌的發(fā)展和應(yīng)用將會越來越多地得到人們的關(guān)注，隨之包衣液的發(fā)展也會越來越成熟。

參考文獻：

[1]MANICHANH C，REEDER J，GIBERT P，et al.Reshaping the gut microbiome with bacterial transplantation and antibiotic intake[J].Genome research，2010，20（10）：1411-1419.

[2]操銀紅. 益生菌的作用機理及功能的研究進展[J]. 生物技術(shù)世界， 2015（5）： 39.

[3]舒娜，芮漢明.益生菌的作用機理、存在的問題及其對策[J].廣州食品工業(yè)科技，2003，19（S1）：67-70.

[4]張琳，贠婷婷，綦文濤，等.乳化凝膠化法微囊化益生菌抗脅迫作用研究[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2015，27（11）：3636-3642.

[5]周劍忠，董明盛，江漢湖.乳酸菌細胞的液芯包囊固定化技術(shù)及應(yīng)用[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2004，30（2）：82-84.

[6]房曉，段榮帥，王鳳山.腸道菌群調(diào)節(jié)制劑的研究進展[J].中國生化藥物雜志，2014 （1）：142-144， 146.

[7]黃序， 李奇庚， 焦穎， 等. 腸溶性雙歧桿菌微膠囊的初步研究[C]//中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會.中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會第四屆年會論文摘要集. 北京：中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會，2005.

[8]秦翠麗，趙磊，李松彪，等. 益生菌微膠囊化技術(shù)研究概述[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2009（11）：1047-1049.

[9]曹永梅，許時嬰，張灝.c腸溶性雙歧桿菌微膠囊的制備[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2000，25（2）：71-77.

[10]徐致遠， 郭本恒， 陳衛(wèi). c乳酸菌微膠囊技術(shù)的研究進展[J]. 乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)， 2005（5）： 198-201.