仇昌智，陸永光，黃軍章，陳麗媛，何東明, 陳林(欽州市第二人民醫(yī)院，廣西欽州535099)

采用丹參多酚酸鹽輔助治療的不穩(wěn)定型心絞痛患者血清炎性因子、內(nèi)皮細(xì)胞微粒水平變化及其意義

仇昌智，陸永光，黃軍章，陳麗媛，何東明, 陳林
(欽州市第二人民醫(yī)院，廣西欽州535099)

目的 觀察采用丹參多酚酸鹽輔助治療的不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)患者血清炎性因子高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞介素1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、內(nèi)皮細(xì)胞微粒(EMPs)水平變化，并探討其意義。方法 80例UAP患者隨機(jī)分為觀察組和對照組各40例。兩組均予常規(guī)治療，觀察組加用丹參多酚酸鹽輔助治療。分別于治療前、治療后抽取兩組外周靜脈血 3 mL，采用ELISA法檢測兩組血清hs-CRP、IL-1、TNF-α。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組血清EMPs，并分析hs-CRP、IL-1、TNF-α和EMPs的相關(guān)性。結(jié)果 兩組治療前hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs間比較，P均>0.05；與治療前比較，兩組治療后hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs均下降，且觀察組更低于對照組，P<0.05。UAP患者血清hs-CRP、IL-1 、TNF-α與EMPs均呈正相關(guān) (r分別為0.638 , 0.587 , 0.695；P均<0. 01)。結(jié)論 采用丹參多酚酸鹽輔助治療的UAP患者血清hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs的水平均降低。丹參多酚酸鹽輔助治療能明顯抑制UAP患者的炎癥反應(yīng)，保護(hù)患者內(nèi)皮功能。

不穩(wěn)定型心絞痛；丹參多酚酸鹽；高敏C反應(yīng)蛋白；白細(xì)胞介素1；腫瘤壞死因子；內(nèi)皮細(xì)胞微粒；

不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)是急性冠狀動脈綜合征(ACS)的一種常見臨床類型。冠狀動脈壁的炎性反應(yīng)直接參與了斑塊破裂和血栓形成，是發(fā)生ACS的主要原因[1]。相關(guān)研究[2]表明，循環(huán)血中的炎性細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子在動脈粥樣硬化斑塊中起重要作用。高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞介素1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)是臨床常用的炎癥因子指標(biāo)，常用于反映炎癥反應(yīng)程度。而內(nèi)皮細(xì)胞微粒(EMPs)是內(nèi)皮細(xì)胞在各種病理因素刺激下激活或凋亡所釋放出的微小囊泡，可反映冠脈內(nèi)皮炎癥反應(yīng)和損傷的程度，是評估冠脈內(nèi)皮功能障礙的有效指標(biāo)[3]。丹參多酚酸鹽是從中藥丹參中提取的以丹參乙酸鎂為主要成分的丹參多酚酸鹽類化合物，具有活血化瘀作用，臨床已開始應(yīng)用于冠心病的抗心絞痛治療[4]，但對EMPs的影響及其機(jī)制尚未闡清。我們觀察了采用丹參多酚酸鹽輔助治療的UAP患者血清炎性因子hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs水平變化，并探討其意義。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年1月～2014年12月間我院住院治療的UAP患者80例，其中男42例、女38例，年齡35～79(61.6±11.3)歲。均符合中華醫(yī)學(xué)會心血管學(xué)分會提出的UAP診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，其中合并高血壓病36例、糖尿病22例、血脂異常21例；存在心臟病家族史9例，吸煙史20例。排除標(biāo)準(zhǔn)：治療期間依從性差、中途退出的患者；資料不全影響療效判斷的患者；重度心、肺、腦、肝、腎功能不全、感染性疾病、免疫性疾病、腫瘤、過敏體質(zhì)及2個月內(nèi)使用過激素等免疫抑制劑者。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者隨機(jī)分為觀察組和對照組，每組各40例，觀察組和對照組均給予常規(guī)治療，包括阿司匹林、氯吡格雷、低分子肝素、他汀類藥物、ACEI/ARB、硝酸酯類和β-受體阻滯劑等，保持兩組間用藥的均衡性。觀察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予丹參多酚酸鹽200 mg加入生理鹽水或葡萄糖液250 mL中，靜脈滴注，1次/d，兩組均治療14 d。兩組年齡、性別比例、存在吸煙史、家族史、合并癥(高血壓、糖尿病、血脂異常)發(fā)生情況等基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 兩組血清hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs檢測 別于治療前、治療后抽取兩組清晨空腹外周靜脈血 3 mL，分離血清后置-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用ELISA法檢測兩組外周血hs-CRP、IL-1、TNF-α，所有操作均嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組外周血EMPs，置于真空檸檬酸鹽抗凝管中，以160 g離心10 min獲取含血小板豐富的血漿，1 500 g離心6 min獲取血小板貧瘠的血漿。將分別用異氰酸熒光素(FITC)和藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的單克隆抗體(如anti-CD42、anti-CD31)或等量的對照抗體9mice IgG 0.5 μg加入50 μL血小板貧瘠血漿中，室溫震蕩孵育20 min，加入PBS，采用流式細(xì)胞儀(美國Beckman Coulter公司)檢測。EMP定義為直徑<1.0 μm且CD31+/CD42-陽性的微粒[5]。

2 結(jié)果

兩組治療前hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs間比較，P>0.05；與治療前比較，兩組治療后hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs均下降，且觀察組更低于對照組，P均<0.05。詳見表1。

表1 治療前、后兩組血清hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs水平±s)

注：與同組治療前比較，*P<0.05；與對照組治療后比較，△P<0.05。

Pearson相關(guān)分析顯示，UAP患者外周血hs-CRP、IL-1 、TNF-α與EMPs均呈正相關(guān) (r分別為 0.638、0.587、0.695,P均<0. 01)。

3 討論

EMPs是內(nèi)皮細(xì)胞在各種病理因素(缺氧、炎癥、氧自由基、機(jī)械損傷等)刺激下激活或凋亡所釋放出的微小囊泡。它可攜帶多種脂類或蛋白類生物活性物質(zhì)，如磷脂酰絲氨酸、內(nèi)皮蛋白C受體、血栓調(diào)節(jié)蛋白、組織因子、細(xì)胞間黏附分子-1、血管細(xì)胞黏附分子-1、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1、E選擇素等，酶類如金屬蛋白酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，以及尿激酶型纖溶酶原激活物及其受體、生長因子受體等，參與血栓形成、血管生成、免疫和炎癥、血管功能調(diào)控等過程[6，7]。EMPs近年已被看作反映內(nèi)皮細(xì)胞功能的新標(biāo)記物[8]，亦可以反映其來源細(xì)胞的功能狀態(tài)[9]。它在炎癥反應(yīng)血栓形成以及調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能方面都有極其重要的作用，冠狀動脈內(nèi)皮損傷和炎癥反應(yīng)參與了冠心病的發(fā)生和發(fā)展，在這個過程中伴隨有EMPs的產(chǎn)生。UAP導(dǎo)致缺血缺氧和炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步使EMPs增加。因此，EMPs和冠脈病變嚴(yán)重程度、缺血缺氧和炎癥反應(yīng)程度明顯相關(guān)，是反映冠心病內(nèi)皮炎癥、損傷和功能狀態(tài)的有效指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，EMPs在兩組治療后均有明顯降低，表明常規(guī)治療可降低EMPs水平，其原因可能與他汀類等藥物具有的穩(wěn)定斑塊，抑制炎癥，保護(hù)內(nèi)皮功能的作用有關(guān)。

hs-CRP是目前最敏感的炎癥標(biāo)記物，它不僅與冠狀動脈的病變有關(guān)[10]，同時也是心血管病變重要、獨(dú)特的危險因子[11]。hs-CRP在人正常冠狀動脈中無沉積，但常在增厚的內(nèi)膜及AS斑塊中被發(fā)現(xiàn)，它可通過激活血管樹突狀細(xì)胞啟動和放大AS的炎癥免疫反應(yīng)，抑制內(nèi)皮細(xì)胞型 NO合酶從而使NO合成減少；還能促進(jìn)內(nèi)皮素1 和 IL-6的分泌，誘導(dǎo)黏附分子的表達(dá)，致敏 CD4+T細(xì)胞，從而使內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生損傷。大量研究[12]表明，UAP的發(fā)病主要與動脈壁的免疫病理性炎癥、 AS斑塊破裂及血栓形成有關(guān)。促炎性因子IL-1、TNF-α是 AS斑塊中重要因子之一，它在ACS、動脈斑塊不穩(wěn)定性中起重要作用[13]。IL-1可上調(diào)血管壁細(xì)胞因子及黏附分子的基因表達(dá)水平，直接抑制內(nèi)皮細(xì)胞釋放舒血管物質(zhì)，促進(jìn)內(nèi)膜增殖及AS的形成[14]。而TNF-α是一具有多種生物學(xué)活性的小分子蛋白, 具有抗病毒、 抗腫瘤、 增加自然殺傷細(xì)胞的活性, 促進(jìn)心肌重構(gòu)以及促進(jìn)炎癥級聯(lián)反應(yīng)的作用已被公認(rèn)。TNF-α可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，增強(qiáng)白細(xì)胞的黏附作用以及內(nèi)皮細(xì)胞的促凝血活性，促進(jìn)一系列炎性因子：如血小板源性生長因子(PDGF)、IL-8 及 IL-6等的產(chǎn)生[15]。本研究結(jié)果顯示，UAP患者血清hs-CRP 、IL-1和TNF-α明顯高于正常健康者，再次證實(shí)hs-CRP 、IL-1和TNF-α在UAP的發(fā)病過程中起重要作用。同樣，hs-CRP 、IL-1和TNF-α在對照組經(jīng)治療后明顯下降也可能與他汀類藥物治療有關(guān)。

丹參多酚酸鹽是臨床常用藥物，主要用于缺血性心腦血管疾病，它是中藥丹參的主要活性成分，有文獻(xiàn)[16]報(bào)道其具有抗血小板聚集、改善微循環(huán)、抗氧化損傷、抑制低密度脂蛋白的氧化、促進(jìn)血管生成、增加冠狀動脈流量等作用，并且通過促進(jìn)鉀通道開放，抑制內(nèi)皮細(xì)胞參與的炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、減輕鈣超載等對缺血再灌注損傷組織發(fā)揮保護(hù)作用[17]。本研究結(jié)果顯示，丹參多酚酸鹽治療后，可在對照組常規(guī)治療的基礎(chǔ)上進(jìn)一步顯著降低血清中EMPs和炎性因子水平，充分提示丹參多酚酸鹽可以減輕UAP患者炎癥反應(yīng)，其可能通過下調(diào)EMPs和上述炎性因子的表達(dá)，影響動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程，從而達(dá)到穩(wěn)定斑塊，調(diào)節(jié)冠心病患者，特別是UAP患者的內(nèi)皮細(xì)胞功能，降低心血管事件風(fēng)險的作用。

相關(guān)性分析顯示，EMPs與hs-CRP、IL-1、TNF-α均呈顯著正相關(guān)，表明EMPs與炎性因子間存在因果關(guān)系。近年來研究表明，EMPs不但是內(nèi)皮功能障礙和損傷的產(chǎn)物，其本身可攜帶大量的生物活性物質(zhì)，具有明顯的生物活性，可作為信息傳遞的載體和效應(yīng)物。因此，炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的內(nèi)皮功能障礙是EMPs產(chǎn)生的原因，同時EMPs可能作為效應(yīng)物，進(jìn)一步加重內(nèi)皮功能的障礙。丹參多酚酸鹽降低EMPs的原因，除了與抑制內(nèi)皮炎癥，改善內(nèi)皮功能障礙有關(guān)外，是否能抑制EMPs的功能，阻斷其對內(nèi)皮的反作用以及其具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述， 在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用丹參多酚酸鹽可降低UAP患者血清hs-CRP、IL-1、TNF-α、EMPs水平，抑制UAP患者的炎癥反應(yīng)，保護(hù)患者內(nèi)皮功能。

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廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2012GXNSFBA053113)；廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)計(jì)委自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2011103)；廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)計(jì)委自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2012679)。

陸永光(E-mail： evershine_lu@hotmail.com )

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.07.016

R544.1

B

1002-266X(2017)07-0052-03

2016-07-22)