張柯媛，劉喜華，覃藝群，熊灝，劉安韜，周小雅(廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，南寧530023)

寬筋藤提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及對(duì)大鼠痛風(fēng)性炎癥的預(yù)防作用

張柯媛，劉喜華，覃藝群，熊灝，劉安韜，周小雅
(廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，南寧530023)

目的 觀察寬筋藤提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響，并觀察其對(duì)大鼠痛風(fēng)性炎癥的預(yù)防作用。方法 雄性小鼠100只分為A、B兩組各50只，其中50只制作高尿酸血癥模型(A組)，分為5組，其中3組分別采用寬筋藤提取物高(10.0 g/kg)、中(5.0 g/kg)、低(2.5 g/kg)劑量灌胃，另兩組采用20 mg/kg別嘌醇片、等體積蒸餾水灌胃。 另取50只小鼠(B組)為對(duì)照，分為5組，其中3組分別采用寬筋藤提取物高、中、低劑量灌胃，另兩組采用20 mg/kg別嘌醇片、等體積蒸餾水灌胃，兩組均1次/d，連續(xù)10 d,第10天灌胃60 min時(shí)采用磷鎢酸比色法檢測(cè)兩組血清尿酸。另取雄性大鼠40只隨機(jī)分為1、2、3、4組，1、2組分別采用寬筋藤提取物高、低劑量灌胃，3、4組予等體積蒸餾水灌胃，各組均1次/d，連續(xù)12 d，第12 天灌胃1 h取1、2、3組大鼠，于右后足跖皮下注射0.15 mL 100 g/L MSU，制作痛風(fēng)性炎癥大鼠模型，分別于注射前后的第1、2、3、4、5、6 h觀察各組大鼠右后足跖腫脹情況，計(jì)算其腫脹度。結(jié)果 A組寬筋藤提取物高劑量、中劑量干預(yù)者小鼠血清尿酸水平均低于A組等體積蒸餾水灌胃者(P均<0.05)。 3組大鼠右后足足跖腫脹度明顯高于4組(P均<0.05)。注射1、3 h時(shí)，1、2組大鼠右后足足跖腫脹度低于3組(P均<0.05)；注射2 、5 h時(shí)，1、2組大鼠右后足足跖腫脹度高于3組(P均<0.05)；注射4 h時(shí)，1組大鼠右后足足跖腫脹度低于3組，2組大鼠右后足足跖腫脹度高于3組(P均<0.05)；注射6 h時(shí)，1組大鼠右后足足跖腫脹度低于3組(P<0.05)。結(jié)論 寬筋藤提取物可降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平。寬筋藤提取物可預(yù)防大鼠痛風(fēng)性炎癥。

寬筋藤提取物;痛風(fēng)；尿酸；高尿酸血癥；痛風(fēng)性炎癥

近年由于飲食中嘌呤攝入量增加，痛風(fēng)發(fā)病率逐年升高[1]。目前，臨床治療高尿酸血癥通過減少尿酸生成和增加尿酸排泄兩方面。別嘌呤醇是目前臨床常用的減少尿酸生成藥物，但其可導(dǎo)致過敏性皮疹、肝腎功能損害、骨髓抑制及造血器官損害等[2]。臨床常用的促尿酸排泄藥主要有羧苯磺胺、磺吡酮、苯溴馬隆等，均可通過抑制腎近曲小管尿酸的重吸收。但苯溴馬隆可導(dǎo)致患者發(fā)生暴發(fā)性肝炎[3]。研究不良反應(yīng)少且能明顯降尿酸的藥物是目前的研究熱點(diǎn)。寬筋藤是防己科青牛膽屬植物的藤莖，多見于華南地區(qū)。廣西民間常用其治療風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、肩周炎、坐骨神經(jīng)痛、腰肌勞損等[1，2]。目前關(guān)于寬筋藤提取物在痛風(fēng)治療方面的研究報(bào)道較少。我們觀察了寬筋藤提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響，并觀察其對(duì)大鼠痛風(fēng)性炎癥的預(yù)防作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑及儀器 清潔級(jí)昆明種雄性小鼠100只，體質(zhì)量18～22 g；Wistar雄性大鼠90只，體質(zhì)量180～220 g ；均來源于廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(動(dòng)物合格證號(hào)SCXK桂2009-0003)。寬筋藤提取物，由廣西中醫(yī)藥研究院何開家教授鑒定。sc微晶型尿酸鈉結(jié)晶(MSU)制備方法：參照文獻(xiàn)[3]。次黃嘌呤和尿酸均為美國(guó)Sigma 公司產(chǎn)品；別嘌醇片購(gòu)自重慶科瑞制藥有限責(zé)任公司(批號(hào):319002)。

1.2 寬筋藤提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響觀察 雄性小鼠100只分為A、B兩組各50只，其中50只采用文獻(xiàn)方法[3]制作高尿酸血癥模型(A組)，分為5組，其中3組分別采用寬筋藤提取物高(10.0 g/kg)、中(5.0 g/kg)、低(2.5 g/kg)劑量灌胃，另兩組采用20 mg/kg別嘌醇片、等體積蒸餾水灌胃。另取50只小鼠(B組)為對(duì)照，分為5組，其中3組分別采用寬筋藤提取物高、中、低劑量灌胃，另兩組采用20 mg/kg別嘌醇片、等體積蒸餾水灌胃，兩組均1次/d，連續(xù)10 d,第10天灌胃60 min后取兩組小鼠，固定后取眼球血 5 mL，3 000 r/min離心10 min，取其上清液,采用磷鎢酸比色法檢測(cè)兩組小鼠血清尿酸。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.3 寬筋藤提取物對(duì)痛風(fēng)性炎癥大鼠足跖腫脹的預(yù)防作用觀察 取雄性大鼠40只，隨機(jī)分為1、2、3、4組，每組各10只。1、2組分別采用寬筋藤提取物高、低劑量灌胃，3、4組予等體積蒸餾水灌胃，各組均1次/d，連續(xù)12 d。第12 天灌胃1 h時(shí)取1、2、3組大鼠，于大鼠右后足跖皮下注射0.15 mL 100 g/L MSU，制作痛風(fēng)性炎癥大鼠模型，分別于注射前后的第1、2、3、4、5、6 h觀察大鼠右后足跖腫脹情況，測(cè)定其右后足跖周徑，計(jì)算其腫脹度。足跖腫脹度=(致炎后足跖周徑-致炎前足跖周徑)/致炎前足跖周徑×100%。

1.4 寬筋藤提取物對(duì)痛風(fēng)性炎癥大鼠耳廓腫脹的預(yù)防作用觀察 取大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，其中3組分別采用寬筋藤提取物高、中、低劑量灌胃，另兩組采用20 mg/kg別嘌醇片、等體積蒸餾水灌胃，連續(xù)10 d。第10 d給藥1 h，分別在5組大鼠左耳前后兩面均勻涂抹二甲苯0.02 mL致炎，右耳不涂作為對(duì)照。30 min后脫頸處死大鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，分析天平稱重，計(jì)算左耳腫脹度，計(jì)算左耳腫脹抑制率。腫脹度=左耳片重量-右耳片重量，腫脹抑制率=(左耳重量-右耳重量)/右耳重量×100%。

2 結(jié)果

2.1 兩組小鼠血清尿酸水平比較 兩組小鼠血清尿酸水平比較見表1。

2.2 不同時(shí)間各組大鼠右后足足跖腫脹度比較 不同時(shí)間各組大鼠右后足足跖腫脹度比較見表2。

3 討論

尿酸(2,6,8-三氧化嘌呤)是嘌呤代謝的終產(chǎn)物。尿酸是一種天然抗氧化劑，可清除人體血液中60%的自由基[4，5]。由于血中尿酸升高，單鈉尿酸鹽結(jié)晶或尿酸在細(xì)胞外液形成超飽和狀態(tài)，尿酸鹽結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)滑膜、滑囊、軟骨及其他組織中,引起的反復(fù)發(fā)作性炎性疾病。血清尿酸動(dòng)態(tài)平衡的失調(diào)是痛風(fēng)的病理學(xué)基礎(chǔ)，在基因、蛋白水平，Glut9等因子[6],基因包括ABCG2 、SLC17A1 、GCKR 、LRRC16A 、PDZK1等[7～10]，均與尿酸代謝失調(diào)有關(guān)，是痛風(fēng)的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因子。近年來，從中藥中尋找高效低毒的抗痛風(fēng)藥物成為抗痛風(fēng)藥物研究的熱點(diǎn)。寬筋藤作為廣西民間常用藥材，含有氨基酸、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、多糖、香豆素、醌類、強(qiáng)心苷、生物堿、甾體類等化學(xué)成分，其中多種成分具有廣泛的藥理活性，特別是在抗高尿酸及抗痛風(fēng)方面。

表1 寬筋藤提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響±s)

注：與A組等體積蒸餾水灌胃者比較，*P<0.05；與B組等體積蒸餾水灌胃者比較，#P<0.05。

表2 注射寬筋藤提取物不同時(shí)間各組大鼠右后足足跖腫脹度比較(n=10，±s)

注：與4組比較，#P<0.05；與3組比較：*P<0.05。

痛風(fēng)是一種終身性疾病，無(wú)腎功能損害或關(guān)節(jié)畸形者經(jīng)有效治療后均可正常生活和工作，也不會(huì)影響患者壽命。但如果治療不當(dāng)，急性關(guān)節(jié)炎的反復(fù)發(fā)作可引起較大痛苦。有關(guān)節(jié)畸形和腎石病者則生活質(zhì)量會(huì)受到一定的影響。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，寬筋藤提取物可降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，但對(duì)正常小鼠血清尿酸水平無(wú)顯著影響。這說明，寬筋藤對(duì)高尿酸血癥的調(diào)節(jié)作用明確，具體機(jī)制可能與尿酸的形成和排泄有關(guān)，可能涉及相關(guān)因子及其基因的表達(dá)。嘌呤在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化成尿酸是一個(gè)復(fù)雜的過程。磷酸核糖焦磷酸酰胺轉(zhuǎn)移酶(PRPPAT)和次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)換酶(HGPRT)是關(guān)鍵酶，寬筋藤抗高尿酸的藥理活性可能與他們有關(guān)，影響其活性，調(diào)節(jié)尿酸的生成[11]。腎單位對(duì)尿酸的排泄是高尿酸血癥的另一個(gè)重要因素，腎小管對(duì)尿酸的濾過率下降，也會(huì)引起高尿酸，其中轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白起著關(guān)鍵作用，寬筋藤的活性物質(zhì)可能通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性而改善尿酸的排泄。寬筋藤提取物可抑制MSU致大鼠足跖腫脹，這說明寬筋藤提取物可緩解痛風(fēng)的炎癥，提示寬筋藤提取物對(duì)痛風(fēng)的治療具有標(biāo)本兼治的特點(diǎn)。但寬筋藤提取物抗痛風(fēng)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制,還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，寬筋藤提取物可降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，寬筋藤提取物可預(yù)防大鼠痛風(fēng)性炎癥。

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Effect of extract from tinospora cordifolia on serum uric acid level of hyperuricemia in mice and its preventive effect on gouty inflammation in rats

ZHANGKeyuan1,LIUXihua,QINYiqun,XIONGHao,LIUAntao,ZHOUXiaoya

(1GuangxiMedicalCollege,Nanning530023,China)

Objective To observe the effect of the extract from tinospora cordifolia on serum uric acid level of hyperuricemia in mice and its preventive effect on gouty inflammation in rats.Methods One hundred male mice were divided into two groups: groups A and B, 50 in each. Fifty mice in the group A were used to make the hyperuricemia models, and then they were divided into 5 secondary groups. Mice in 3 of the 5 groups were given 10.0, 5.0 and 2.5 g/kg tinospora cordifolia extract by gavage. Mice in the other two secondary groups were given allopurinol tablets and equal volume of distilled water by gavage, respectively. The rest of 50 mice in the group B were taken as the control group and then were divided into 5 secondary groups. Mice in 3 of the 5 groups were given high-does, medium-dose and low-dose tinospora cordifolia extract by gavage. The other two groups were given 20 mg/kg allopurinol tablets and the same volume of distilled water by gavage respectively for ten days (1 time per day). The serum uric acid level was tested on the 10th day. Anther 40 male rats were randomly divided into 4 groups: groups 1, 2, 3 and 4. Rats in the groups 1 and 2 were given high-dose and low-dose allopurinol tablets by gavage for 12 days (1 time per day). Rats in the groups 3 and 4 were given equal volume of distilled water for 12 days (1 time per day). Rats in the groups 1, 2, 3 were given 0.15 mL 100 g/L MSU by subcutaneous injection on right hind plant for the gout models. At 1, 2, 3, 4, 5, 6 h before and after the injection, the swelling of the right hind paw was observed and the degree of swelling was calculated.Results The serum uric acid level of the three secondary groups of group A which were given high-dose and medium-dose tinospora cordifolia extract were lower than that of the secondary group given distilled water (allP<0.05). The swelling degree of the group 3 was higher than that of the group 4 (allP<0.05). After 1 and 3 hours of the subcutaneous injection, the swelling degree of groups 1 and 2 was lower than that of group 3 (allP<0.05). After 2 and 5 hours of the subcutaneous injection, the swelling degree of groups 1and 2 was higher than that of the group 3 (allP<0.05). After 4 hours of the subcutaneous injection, the swelling degree of group 1 was lower than that of group 3 (allP<0.05), while the swelling degree of the group 2 was higher than that of the group 3 (allP<0.05). After 6 hours of the subcutaneous injection, the swelling degree of group 1 was lower than that of group 3 (allP<0.05).Conclusion The extract of tinospora cordifolia can decrease the serum uric acid level of hyperuricemia in mice and prevent the gouty inflammation in rats.

tinospora cordifolia extracts; gout; uric acid; hyperuricemia; gouty inflammation

廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2014GXNSFBA118202；2015GXNSFBA139150)。

張柯媛(1981-)，女，碩士講師，主要研究方向?yàn)槲⑸铩⑺幬锓治?。E-mail: 89244005@qq.com

周小雅(1963-)，女，學(xué)士，副教授，主要研究方向?yàn)橘|(zhì)量管理。E-mail: 603832282@qq.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.07.004

R589.7

A

1002-266X(2017)07-0013-03

2016-05-13)