秦中朋

（河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院第一臨床醫(yī)學院，鄭州450046）

半夏厚樸湯對抑郁癥型大鼠的治療作用研究

秦中朋

（河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院第一臨床醫(yī)學院，鄭州450046）

目的建立抑郁癥大鼠模型，并研究半夏厚樸湯對大鼠抑郁癥的治療作用及作用機制，為臨床防治抑郁癥提供實驗和理論依據(jù)。方法將SD大鼠12只隨機分為四組：正常組(3只)，模型組(3只)，半夏厚樸湯組(3只)，西藥氟西汀組(3只)。后三組進行電擊足底、通宵照明、禁水或禁食、換籠飼養(yǎng)、晝夜顛倒等，各種刺激隨機選用，制造抑郁癥大鼠模型。分別用半夏厚樸湯、氟西汀和生理鹽水給對應抑郁癥大鼠模型灌胃。用水迷宮、敞箱實驗、糖水試驗等分別測試正常組、模型組與藥物組大鼠的反應。最后斷頭取血，取海馬，測試海馬中乙酰膽堿變化，并根據(jù)西醫(yī)發(fā)病機制篩選特異性較高的指標，進行多重比較研究。對比分析得出半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠的影響。結果半夏厚樸湯組一般狀況（皮色、精神、飲食等）優(yōu)于對照組大鼠；半夏厚樸湯組大鼠在糖水試驗中變現(xiàn)的認知狀況優(yōu)于對照組；半夏厚樸湯組海馬重量大于其他組大鼠。且血清乙酰膽堿和海馬乙酰膽堿含量分析高于模型組和氟西汀組。結論半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠具有治療作用，且效果優(yōu)于西藥氟西汀。

抑郁癥；半夏厚樸湯；疏肝解郁；動物實驗；痰氣郁結

據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)預計，到2020年，抑郁癥將位于各類疾病發(fā)病率的榜首[1]。同時在我國，抑郁癥的患病人數(shù)已經(jīng)超過1億，因此對于抑郁癥的預防與治療已成為亟待解決的問題。近年來中藥經(jīng)方治療抑郁癥以其獨特的優(yōu)勢得到了廣泛的研究，中藥經(jīng)方具有成分簡單、作用環(huán)節(jié)多、靶點多且副作用小的特點，基于個體化的綜合治療和整體調(diào)節(jié)模式，在治療抑郁癥方面得到了眾多患者——特別是許多不愿意接受西藥治療的輕中度抑郁癥患者的喜愛。半夏厚樸湯出自中醫(yī)四大經(jīng)典的《金匱要略》[3]，原方由清半夏130 g，厚樸45 g，茯苓60 g，生姜75 g，蘇葉30 g等中藥加減組成，是治療中醫(yī)辨證癥型——痰氣郁結型郁證（俗稱“梅核氣”）的經(jīng)典方劑。方中半夏厚樸生姜以辛苦之性苦以降逆，辛以散結；以紫蘇之性行其郁結，以茯苓之性滲濕化痰，合奏起效使氣順痰消，解郁降逆，并達到對抑郁癥癥病人整體調(diào)理的目的。本實驗采用西醫(yī)理論，使用中藥方法，以抑郁癥大鼠為模型探究半夏厚樸湯對抑郁癥的治療作用機制，目的為臨床醫(yī)務工作者提供更科學的數(shù)據(jù)分析和參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料12只雄性6月齡大鼠，重量（230～270）g，省動物中心出售，許可證號：SCXK（豫）2010—0002，河南省動物質(zhì)量監(jiān)督監(jiān)測站（質(zhì)量合格證：NO. 41003100001905），實驗單位許可證號：SYXK（豫）2010—0001。

1.2 藥物及試劑紫蘇葉30 g（批號1504087），清半夏48 g（批號1403713），姜厚樸36 g（批號1505034），茯苓50 g（1507026），生姜60 g（批號1506044）等均為中藥配方顆粒[4]；鹽酸氟西汀分散片20mg，小包裝注冊證號：H20110443，進口藥品大包裝注冊證號：H20110515，分包裝藥品批準文號：國藥準字J20120001，生產(chǎn)廠：PAYHEON FRANCE（法國）。分包裝廠：禮來蘇州制藥有限公司。

1.3 動物分組與給藥方法在實驗開始前，隨機將12只大鼠分成4組：正常對照組(3只)：實驗過程中不給予任何刺激，給藥過程中按10ml/kg給予0.9%生理鹽水，1次/日。模型組(3只)：對大鼠施以群養(yǎng)加慢性不可預見的中等強度刺激，然后在給藥過程中按10 m l/kg給以0.9%生理鹽水，1日給予1次。半夏厚樸湯組(3只)：先對大鼠用群養(yǎng)加慢性不可預見的中等強度刺激，然后給以0.4mg/ml半夏厚樸湯液灌胃(相當于生藥30 g/Kg)，1日給予1次。西藥氟西汀組(3只)：先對大鼠用群養(yǎng)加緩慢不可預見的中等強度刺激，然后給以濃度為4 g/ml的劑量灌胃(相當于1.8mg/Kg體重)，1日給予1次。

1.4 模型制備方法根據(jù)文獻（簡單易操作的大鼠CUMS抑郁癥模型的構建方法）[5]的方法進行改進。正常組共一籠飼養(yǎng)大鼠3只，不給以任何強度刺激。剩下的三組在進行實驗的1周內(nèi)，分別接受各種不同程度的應激性感應和慢性刺激，包括：禁食(24 h斷料)，禁水(24 h斷水)，通宵照明，冰水游泳(4℃，5 min)，電擊足底(36 v，每隔1 min刺激1次，每次持續(xù)10 s，共20次)，夾尾(距尾根1 cm處，1 min)。每天不確定性的安排四種刺激，分別給予不重復的一種，目的是使大鼠沒有預感反應。

1.5 行為學測試方法及檢測指標

1.5.1 認知記憶功能評估Morris水迷宮，敞箱實驗，糖水實驗等。認知功能檢測——Morris水宮檢測學習、記憶功能：采用最新型的Morris測試儀進行檢測。敞箱實驗：實驗裝置為容積為60×80×80 cm的無蓋方箱、箱子內(nèi)部除底板外全部涂黑、底板設計為純白色，并將底板均勻地用記號筆劃成25個方格，大小等為16 cm×16 cm。刺激操作開始前將大鼠輕放于方箱底板中心，注意周圍條件應在安靜下進行，單獨的對大鼠進行統(tǒng)一為3 min的測試，觀察者在行為實驗室內(nèi)采用攝像系統(tǒng)觀察記錄大鼠在曠場內(nèi)前的動作表現(xiàn)。同時注意大鼠與另一只大鼠測量之間應使用用11%的酒精清洗方箱周壁表面及箱子底板，以免實驗的其他誤差干擾接下來的數(shù)據(jù)記錄。上面計數(shù)完畢后，取兩項數(shù)目之和記為敞箱實驗總得分。

糖水消耗量實驗：造模前，先對大鼠進行1%蔗糖水攝水訓練運動，具體方法即在每籠同時放置2個水瓶，以24 h為周期，設置為第1個周期內(nèi)2瓶同時裝有1%等量的蔗糖水；接下來的第2個周期，1個瓶裝有1%蔗糖水，另1個瓶則裝等量的純凈水。在周期結束后，測量并計算：大鼠在24 h的禁食禁水后，1 h飲用1%蔗糖水和純水的量。

1.5.2 細胞因子及神經(jīng)遞質(zhì)含量測定ELISA法檢測血漿內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)：Ach含量。

1.6 研究的統(tǒng)計方法1）計量資料以均數(shù)±標準差表示。2）多組間均數(shù)比較采用方差分析。3）計數(shù)資料以百分率（%）表示。4）采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。5）P＜0.05為數(shù)據(jù)可用，差異有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結果

2.1 大鼠一般狀況的變化對大鼠進行刺激后，抑郁癥模型大鼠模擬出了類似抑郁癥患者的軀體運動障礙以及精神萎靡壓抑兩種癥狀，如食欲下降，體重減輕(增長減慢)等。因此記錄大鼠的一般狀況可以在一定程度上反映半夏厚樸湯的作用效果（見表1）。

表1 對抑郁癥大鼠施以半夏厚樸湯后的一般情況的變化結果

通過對大鼠一般情況的對比比較，可以看出各組大鼠在灌胃后精神條件、體態(tài)皮毛、飲食情況的顯著變化。實驗結果顯示半夏厚樸湯組一般情況優(yōu)于對照組大鼠，從而可得出半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠有一定的改善。

2.2 大鼠體重記錄及變化分析抑郁癥模型大鼠出現(xiàn)類似抑郁癥患者的運動能力明顯遲鈍，沉默寡歡以及體重減輕(增長減慢)的情況等。因此記錄大鼠的一般狀況可以在一定程度上反映半夏厚樸湯的作用效果（見表2，圖1）。

表2 半夏厚樸湯對大鼠體重影響結果（±s）

表2 半夏厚樸湯對大鼠體重影響結果（±s）

組別動物（只）造模刺激前體重（g）造模刺激后體重（g）正常組模型組氟西汀組半夏厚樸湯組210.33±4.51 211.00±21.66 188.00±24.64 200.67±12.34總數(shù)12 204.08±18.61 202.50±17.94 3 3 3 3 210.33±4.51 212.33±22.19 188.33±26.41 205.33±12.67

圖1 體重折線圖

2.3 敞箱實驗敞箱實驗現(xiàn)已成為抑郁癥模型實驗最有代表性的實驗檢測之一，對抑郁癥大鼠進行敞箱實驗結果觀察分析如下。（見表3，圖2，圖3，圖4，圖5）

表3 大鼠敞箱實驗行為學評分（±s）

表3 大鼠敞箱實驗行為學評分（±s）

組別動物（只）中心格停留時間（s）正常組模型組氟西汀組半夏厚樸湯組3.00±1.41 7.50±0.71 6.50±2.12 4.50±2.12總數(shù)8 5.36±2.26 2 2 2 2水平得分44.00±8.49 26.50±7.78 20.50±7.78 25.00±8.49 29.00±11.36垂直得分修飾次數(shù)13.00±1.41 8.50±0.71 10.00±1.41 5.00±2.83 19.00±0.00 37.50±4.95 37.50±12.02 27.50±30.41 9.12±3.36 30.38±14.99

圖2 中心格停留時間均值折線圖

圖3 水平得分均值折線圖

圖4 垂直得分均值折線圖

圖5 修飾次數(shù)得分均值折線圖

2.4 水迷宮實驗結果本次Morris實驗通過人為刺激讓大鼠置于水迷宮中，誘使其進行游泳，觀察結果分析如下（實驗結果見表4）。

表4 水迷宮實驗結果

2.5 對抑郁癥大鼠海馬乙酰膽堿含量的影響人的腦組織中有大量的乙酰膽堿，乙酰膽堿的含量與年齡的增長呈負相關關系。身體健康的老人乙酰膽堿的含量比年輕時會下降超過30%，而患有老年癡呆癥的病人乙酰膽堿減少更為嚴重，甚至會高于80%。因此研究檢測大腦海馬勻質(zhì)中乙酰膽堿的含量也是研究抑郁癥很重要的方法，使用半夏厚樸湯后對比結果如下。（見表5，圖6）

表5 Ach含量值數(shù)據(jù)表

圖6 大鼠大腦Ach濃度與OD值的標準曲線圖

3 討論

本實驗通過查找大量論文材料，對抑郁癥的現(xiàn)代研究治療情況進行了分析總結，同時探究了抑郁癥的中西醫(yī)機理，使實驗進行有了科學理論的基礎支撐和指導。實驗按照科學方法建立抑郁癥大鼠動物模型，設立空白、模型、西藥、中藥等四組對其體重及海馬勻漿乙酰膽堿等指標進行比較，來驗證其治療療效，同時實驗引用國際公認和通用的方法驗證了中藥經(jīng)方半夏厚樸湯對于抑郁癥的治療作用機制及作用效果。

我們從國內(nèi)外的文獻中篩選出應激抑郁癥模型（CUMS）為實驗的造模模型[6-8]。模型以大鼠在接受不同的應激后表現(xiàn)出一系列的情緒和動作異常改變，如軀體運動障礙、食欲下降、體重減輕(增長減慢)等，同時成功地模擬了人類抑郁癥患者出現(xiàn)的精神情感異常，如焦慮、冷默、壓抑等。造模前期大鼠表現(xiàn)狂躁不安，亂動多動、躁亂撕咬，造模成功不久，即出現(xiàn)了中醫(yī)所謂的郁證表現(xiàn)，大鼠不欲飲食或食量降低，趨于安靜，蜷縮不再好動，毛發(fā)逐漸失去光澤，自我清潔次數(shù)減少，灌藥的抵觸性降低。隨著喂藥的時間延長，西藥組、加味小柴胡湯中、大劑量組飲食、體重及活動度增進，逐步回升到造模初期水準，均比模型組有顯著差別。實驗結果顯示半夏厚樸湯組一般情況優(yōu)于對照組大鼠，從而可得出半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠的癥狀有一定的改善。敞箱實驗行為和水平運動測定進一步驗證了實驗的結論，9月8日的數(shù)據(jù)顯示大鼠造模成功，抑郁癥大鼠給藥后，9月10日的數(shù)據(jù)顯示給藥組抑郁癥有所減輕，尤其半夏厚樸湯組效果較明顯。水迷宮實驗由于實驗器材限制，沒有足夠的實驗給大鼠引導，故所得數(shù)據(jù)存誤差。差異顯示無統(tǒng)計學意義，同時實驗也存在問題在于抑郁大鼠模型的建立的成功與否，這些針對實驗結果產(chǎn)生了一定的影響。現(xiàn)在醫(yī)學對于人類抑郁癥的診斷只是從常見癥狀、精神表現(xiàn)等方面做出的推測診斷，并不能絕對的診斷抑郁癥，更難得對其辨證論治。而對于不會言語的大鼠，我們對其一般表現(xiàn)、精神狀態(tài)都不能作絕對的評估。因此，造模成功的檢測方法仍需改進和探討。同時暴露出了一個迫切的問題，現(xiàn)今臨床工作者們對抑郁癥的辨證分型標準至今仍然是眾說紛紜，因此盡快統(tǒng)一一個標準一致的抑郁癥癥狀分型非常重要。

同時因為實驗過程中由于條件限制并未進一步檢測大鼠的大腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)、神經(jīng)小分子遞質(zhì)、神經(jīng)營養(yǎng)因子等多種物質(zhì)的含量變化，并未從分子水平探究解釋抑郁癥的機制，不能從西醫(yī)理論充分驗證抑郁假說中某些指標的變化，所以接下來我們會進一步通過分子水平研究半夏厚樸湯對抑郁癥的作用機理。

綜上所述，通過半夏厚樸湯對抑郁癥型大鼠的治療作用研究結果顯示：中藥經(jīng)方半夏厚樸湯確實存在減輕和改善抑郁癥的功效，同時本次實驗也在一定程度上證明了半夏厚樸湯對抑郁癥的治療作用比西藥復方氟西汀分散片的作用更好。同時實驗也啟示我們應該不斷深入和加強對于抗抑郁中藥經(jīng)方及其中藥有效成分提取的實驗研究，以便可以盡快發(fā)現(xiàn)抗抑郁中藥的有效成分而研發(fā)成成分簡單的、可廣泛應用的、讓患者更易接受的藥物，也有利于中醫(yī)藥走向世界，以便造福更多的抑郁癥患者。

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Study on the Therapeutic Effect o f Banxia Houpu Decoction on Dep ression ModelRats

QINZhongpeng

(The FirstClinicalM edicalCollege,the Affiliated Hospitalof Henan University of TraditionalChineseMedicine,Zhengzhou 450046,China)

Ob jectiveTo establish the depression ratmodel,and to study the therapeutic effect and themechanism of Banxia Houpu decoction on rats of depression,to provide experimental and theoretical basis for clinical prevention and treatment of depression.Methods12 SD ratswere random ly divided into four groups：normal group(3 rats),model group(3 rats),banxia Houpu decoction group(3 rats)and fluoxetine group(3 rats).The three groups were electric shock foot,night lighting,water deprivation or fasting,for cage rearing,day and night,and so on,a variety of stimuli random ly selected,manufacturing depression ratmodel.Respectively with fluoxetine and saline banxiahoupu decoction,correspondingmodel rats with depression.The watermaze,open field test and sucrose consumption testwere tested in the normal group,model group and drug group rat reaction.Finally,the blood was taken,the hippocampus was taken to test the changes of acetylcholine in the hippocampus,and the specificity of the higher index was selected according to the pathogenesis ofWestern medicine.Comparative analysis of the effect of Banxia Houpu decoction on depression in rats was carried out.ResultsThe general condition of Banxia Houpu decoction group(skin color,spirit,diet,etc.)was better than that of the control group.Banxia Houpu decoction group rats were realized in sucrose test in cognitive status was better than the control group.Banxia Houpu decoction group was greater than the weight of other groups of rats'hippocampus.The levels of acetylcholine and acetylcholine in serum were higher than that in themodel group and the fluoxetine group.ConclusionBanxia Houpu decoction has a therapeutic effecton depression in rats,and the effect isbetter than Westernmedicine fluoxetine

depression;Banxia Houpu decoction;dispersing stagnated liver qi for relieving qi stagnation;animal experiment;stagnation of phlegm and qi

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.05.055

1672-2779（2017）-05-0130-04

：李海燕本文校對：劉增芳

2016-11-08）