李 姍 張 華 文芳杰 游紹雪 王先坤

1．黔南州中醫(yī)醫(yī)院，貴州 都勻 558000；2.黔南州食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 都勻 558000

HPLC法測(cè)定七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量

李 姍1張 華2*文芳杰1游紹雪1王先坤1

1．黔南州中醫(yī)醫(yī)院，貴州 都勻 558000；2.黔南州食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 都勻 558000

目的：建立七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量測(cè)定方法，以控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。方法：采用Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；以甲醇-0.1%磷酸(85∶15)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；柱溫為30℃；流速為1.0mL/min。結(jié)果：大黃素和大黃酚分別在0.013248～0.079488μg和0.021366～0.128016μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；平均回收率分別為97.25% (RSD=1.73%)和99.15%(RSD=1.55%)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為七味清腸膠囊的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法(HPLC)；七味清腸膠囊；大黃素；大黃酚

七味清腸膠囊為我院的院內(nèi)制劑，由無(wú)花果、大黃等7味中藥組成，具有滋陰增液，清熱除燥，潤(rùn)腸通便的功效；主要用于腸燥津虧所致的大便秘結(jié)，狀如羊屎，口干少津，腹脹不舒，食少無(wú)味，舌紅苔少，脈細(xì)稍數(shù)等。方中大黃為主要藥味，具有明顯瀉下作用。研究發(fā)現(xiàn)，以大黃素、大黃酚為代表的蒽醌類是大黃的主要有效成分[1]。為控制本品的質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法測(cè)定了大黃素和大黃酚的含量，作為內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

1 儀器與材料

1.1 儀器 日本島津LC-15C高效液相色譜儀(SPD-15C型紫外可見檢測(cè)器，LCsolution Lite工作站)；AUW120D型電子天平(日本島津)；FA-1004型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)。

1.2 材料 七味清腸膠囊(0.45g/粒，批號(hào)：20141110、20141118、20141126黔南州中醫(yī)醫(yī)院制劑室)；大黃素(批號(hào)：110756-200110，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；大黃酚(批號(hào)：20130111，天津士蘭科技有限公司)。水為娃哈哈純凈水；甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件[2]Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸(85:15)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 分別精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品適量，加入無(wú)水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶液制得每1mL含大黃素0.3312mg、含大黃酚0.1778mg的對(duì)照品溶液。分別精密量取上述對(duì)照品溶液1mL、3mL置50mL量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含大黃素6.624μg、大黃酚10.668μg)。

2.2.2 樣品溶液的制備[3-4]取本品10粒，傾出內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL甲醇，密塞，稱重，回流提取1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)重后，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5mL，蒸干，殘?jiān)群蠹尤?0mL鹽酸(1→10)，與10mL三氯甲烷，水浴水解1h后，取出，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次15mL，合并萃取液，蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解后轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容至刻度。搖勻，靜置，上清液過(guò)0.22μm微孔濾膜，作為樣品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例稱取除大黃外的其余各藥材，按制劑制備工藝制成陰性制劑，再按“2.2.2”方法制備成缺大黃的陰性對(duì)照溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取混合對(duì)照品溶液(大黃素6.624μg/mL、大黃酚10.668μg/mL) 2、4、6、8、10、12μL，按2.1色譜條件測(cè)定峰面積，分別重復(fù)進(jìn)樣3次，以峰面積值(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸。

2.4 精密度考察 精密量取同一濃度的混合對(duì)照品溶液(大黃素6.624μg/mL、大黃酚10.668μg/mL)10μL，測(cè)定各成分峰面積值，重復(fù)進(jìn)樣6次。

2.5 穩(wěn)定性考察 取同一樣品(批號(hào)：20130114)溶液，于0、1、2、4、6、8h進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積值。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取七味清腸膠囊(批號(hào)：20130114)6份，按“2.2.2”方法制備成樣品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)：20130114)6份，每份約0.25g，精密加入一定量的大黃素對(duì)照品溶液(0.3312mg/mL)和大黃酚對(duì)照品溶液(0.1778mg/mL)，按“2.2.2”方法制備成樣品溶液，分別測(cè)定各成分的含量并計(jì)算加樣回收率。

2.8 樣品含量測(cè)定 取不同批次七味清腸膠囊，按“2.2.2”方法制備成樣品溶液，照2.1色譜條件測(cè)定含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 專屬性試驗(yàn) 由圖1可知，色譜圖基線平穩(wěn)，混合對(duì)照品及樣品中大黃素和大黃酚與相鄰成分分離完全，分離度均大于1.5；拖尾因子均小于1.05；陰性樣品在同一保留時(shí)間處無(wú)相應(yīng)色譜峰出現(xiàn)。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 大黃素和大黃酚分別在0.013248～0.079488μg和0.021366～0.128016μg范圍內(nèi)，峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。其回歸方程與標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

3.3 精密度考察 由表1可知，大黃素和大黃酚的RSD值分別為0.76%、0.92%。表明儀器精密度好。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

3.4 穩(wěn)定性考察 由表2可知，大黃素和大黃酚的RSD值分別為1.76%和2.00%。表明樣品溶液在8h之內(nèi)基本穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 (n=3)

3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 由表3可知，大黃素和大黃酚的平均含量分別為0.7052mg/g(RSD=1.39%)和1.3967mg/g(RSD=1.74%)。說(shuō)明，本方法測(cè)定大黃素和大黃酚的重復(fù)性好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 (n=2)

3.6 加樣回收試驗(yàn) 由表4可知，大黃素和大黃酚的加樣回收率分別為97.25%和99.15%，RSD分別為1.73%和1.55%。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

3.7 樣品含量 通過(guò)測(cè)定，不同批次七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量和為0.9372～0.9785mg/粒。

表5 七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚含量測(cè)定結(jié)果 (n=2)

4 討論

大黃素和大黃酚的含量測(cè)定方法文獻(xiàn)報(bào)道極多，本文參照大黃藥材含量測(cè)定方法，采用測(cè)定波長(zhǎng)為254nm。

在提取溶劑的選擇上，應(yīng)盡可能提取本品中全部大黃素及大黃酚，除去其它雜質(zhì)。因此，試驗(yàn)前期進(jìn)行了酸不同水解時(shí)間的比較，以大黃素和大黃酚的提取量為指標(biāo)，結(jié)果，酸水解處理1h后，樣品中大黃素和大黃酚提取量變化不明顯，因此，采用酸水解1h。

通過(guò)測(cè)定三批中試樣品，可知大黃素和大黃酚的含量和為0.9372～0.9785mg/粒。但是，考慮到藥材產(chǎn)地、制劑生產(chǎn)以及貯藏等因素，因此，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中暫定本品每粒含大黃以大黃素(C15H10O5)和大黃酚(C15H10O4)的總量計(jì)，不得少于0.75mg(80%)。

[1]唐大軒,譚正懷,梁媛媛,等.大黃蒽醌致瀉作用及其機(jī)理的初步研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18(6) :1312-1314.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:23.

[3]寧穎,潘瓊,桂洪芹,等.高效液相色譜法測(cè)定婦炎消片中大黃酚和大黃素含量[J].中國(guó)藥業(yè),2012,21(9):21-22.

[4]劉麗娟,郭玉晶.高效液相色譜法測(cè)定乙肝解毒膠囊中大黃素和大黃酚含量[J].中國(guó)藥業(yè),2008,17(10):33.

Determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules by HPLC

LI Shan1ZHANG Hua2*WEN Fangjie1YOU Shaoxue1WANG Xiankun1

1.Qiannnan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Duyun 558000，China； 2. Qiannnan institute for Food and Drug Control，Duyun 558000，China

Objective To establish a method for determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules.Methods The HPLC separation was performed on Wondasil-C18(4.6mm×150mm,5μm) column with a mixture methanol-0.1% phosphoric acid(85∶15) as the mobile phase, at a flow rate of 1.0 mL/min. Detection wavelength was 254nm and column temperature was 30℃.Results The linear range of emodin and chrysophanol were 0.013248～0.079488μg(r=0.9999) and 0.021366～0.128016μg(r=0.9999).The average recoveries were 97.25% (RSD=1.73%) and 99.15%(RSD=1.55%).Conclusion It is a simple,reliable,accurate and reproducible method in determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules.

HPLC; Qiwei Qingchang Capsules; Emodin; Chrysophanol

李?yuàn)?1987-)，女，漢族，碩士，主營(yíng)中藥師，研究方向?yàn)橹兴幮聞┘靶聞┬?。E-mail:303630441@qq.com

張華(1987-)，男，漢族，碩士，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量評(píng)價(jià)。E-mail:495539629@qq.com

R914

A

1007-8517(2017)04-0013-04

2016-12-01 編輯：梁志慶)