朱 月,李?yuàn)^梅,王艷麗,朱 寧,張海平,安建輝,孫愛(ài)東

(北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,食品加工與安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100083)

黑果腺肋花楸原花青素的提取及抑菌性研究

朱 月,李?yuàn)^梅,王艷麗,朱 寧,張海平,安建輝,孫愛(ài)東*

(北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,食品加工與安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100083)

本文利用響應(yīng)面分析法對(duì)黑果腺肋花楸原花青素的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,并探究其抑菌性質(zhì)。結(jié)果表明:黑果腺肋花楸原花青素的最佳提取條件為：乙醇濃度62%,液料比25∶1 mL/g,提取溫度72 ℃,提取時(shí)間60 min。在此條件下提取的黑果腺肋花楸原花青素含量為3.32%;經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化,原花青素含量提高約4倍,為14.29%;抑菌性實(shí)驗(yàn)表明黑果腺肋花楸原花青素對(duì)供試菌種的抑菌效果依次為:枯草芽孢桿菌>金黃色葡萄球菌>大腸桿菌>釀酒酵母,抑菌作用隨原花青素濃度的增加而提高,且純化前的黑果腺肋花楸原花青素具有更強(qiáng)的抑菌性。

黑果腺肋花楸,原花青素,提取純化,抑菌性

黑果腺肋花楸(AorniamealnocarpaElliot),又名野櫻莓、不老莓,薔薇科,原產(chǎn)于美國(guó)東北部地區(qū)[1]。其果樹(shù)是以生產(chǎn)果實(shí)為主的經(jīng)濟(jì)林樹(shù)種,果實(shí)具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值,是集食用、藥用、園林綠化、生態(tài)保護(hù)等價(jià)值于一身的珍貴樹(shù)種。自20世紀(jì)90年代初,遼寧省干旱地區(qū)造林研究所最先開(kāi)始了我國(guó)腺肋花楸引種栽培和果實(shí)加工利用的實(shí)驗(yàn)研究工作。

黑果腺肋花楸果實(shí)中含有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如膳食纖維、糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、多酚類(lèi)化合物等,其中最重要的物質(zhì)是酚類(lèi)物質(zhì)[2]。酚類(lèi)物質(zhì)如酚酸、原花青素、花青素、黃酮醇等含量豐富,且與黑果腺肋花楸的生物活性密切相關(guān)[3]。黑果腺肋花楸果實(shí)中多酚類(lèi)物質(zhì)主要分為單體多酚和聚合多酚。單體多酚主要為酚酸、類(lèi)黃酮及其甙類(lèi)化合物、花青素及其糖苷類(lèi)化合物;聚合多酚為原花青素。黑果腺肋花楸果實(shí)中原花青素占總酚的41.9%～59.1%[4],可見(jiàn)黑果腺肋花楸酚類(lèi)物質(zhì)中原花青素含量最高,對(duì)黑果腺肋花楸的生物活性起著至關(guān)重要的作用。原花青素具有抗氧化活性、防治心血管疾病、抗癌、抗高血壓、降血糖等生物活性[5-8];其抗氧化能力是VE的50倍、VC的20倍,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最好天然抗氧化劑之一[9];原花青素的抗菌、抗病毒作用已研究近30年,研究表明一定濃度的原花青素溶液對(duì)立枯絲核菌、串珠鐮孢和大斑病長(zhǎng)蠕孢等菌均有抑制作用[10]。目前,原花青素已被廣泛應(yīng)用于藥品、保健品和食品等領(lǐng)域。原花青素的提取方法有超聲法、有機(jī)溶劑浸提法和微波法等。

本文以黑果腺肋花楸為原料,利用超聲輔助提取法,探究其原花青素的提取工藝,并利用響應(yīng)面分析法對(duì)提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,同時(shí)對(duì)黑果腺肋花楸原花青素的抑菌性進(jìn)行研究,為黑果腺肋花楸原花青素的深度開(kāi)發(fā)和綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料和儀器

黑果腺肋花楸 黑龍江省;無(wú)水乙醇、無(wú)水甲醇、鹽酸 分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;香草醛、表兒茶素 分析純,上海阿拉丁生化科技有限公司;AB-8大孔樹(shù)脂 上海阿拉丁生化科技有限公司;LB培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、LB肉湯培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基 分析純,北京奧博星生物技術(shù)有限公司;大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌 本實(shí)驗(yàn)室提供。

JYL-C010打漿機(jī) 九陽(yáng)股份有限公司;UV-6100紫外分光光度儀 上海元析儀器有限公司;超聲破碎儀 昆山市超聲儀器有限公司;L3660D低速離心機(jī) 上海知信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;FD-18冷凍干燥機(jī) 北京德天佑科技發(fā)展有限公司;LQ-A 30002電子天平 瑞安市樂(lè)祺貿(mào)易有限公司;HL-2S恒流泵 上海青浦滬西儀器廠;SW-CJ-2D超凈工作臺(tái) 北京天林恒泰科技有限公司;LDZX-30KBS立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠;DHP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 黑果腺肋花楸原花青素的提取工藝 黑果腺肋花楸鮮果→去梗、清洗、破碎→超聲輔助提取黑果腺肋花楸原花青素→原花青素粗提物分離→真空濃縮→冷凍干燥→原花青素純化物→抑菌實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 黑果腺肋花楸原花青素含量測(cè)定 采用鹽酸-香草醛法[11]測(cè)定黑果腺肋花楸中原花青素含量,方法略作修改。

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液,于25 mL試管中加入1 mL表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液、5 mL 5 g/100 mL香草醛-甲醇溶液和3 mL濃鹽酸,搖勻,常溫避光反應(yīng)1 h,以甲醇代替樣液作為空白對(duì)照,于500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)液吸光度A。得回歸方程為:Y=2.8183X+0.0176，R2=0.9991。

1.2.2.2 原花青素含量的測(cè)定 在一定條件下提取黑果腺肋花楸原花青素,提取完畢后,將提取液在4000 r/min下離心20 min;取1 mL提取液,1∶5稀釋;取1 mL稀釋液加入5 mL 5 g/100 mL香草醛-甲醇溶液和3 mL濃鹽酸,搖勻,常溫避光反應(yīng)1 h,以甲醇代替表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白對(duì)照,于500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)液吸光度A。原花青素含量計(jì)算公式如下:

原花青素含量(%)=[(A-0.0176)×N×V×2.8183]/M×100

其中,A:吸光度;N:稀釋倍數(shù);V:溶液體積;M:黑果腺肋花楸勻漿重量(g)。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.1 乙醇濃度對(duì)原花青素含量的影響 取3 g黑果腺肋花楸勻漿(預(yù)處理的花楸鮮果于打漿機(jī)中打漿1 min),在液料比25∶1 mL/g、提取時(shí)間60 min、提取溫度70 ℃條件下,以不同乙醇濃度(30%、40%、50%、60%、70%、80%)超聲輔助提取原花青素(超聲提取時(shí)間20 min,功率600 W[12]);提取完畢后采用1.2.2方法測(cè)定原花青素含量。

1.2.3.2 液料比對(duì)原花青素含量的影響 取3 g黑果腺肋花楸勻漿,在乙醇濃度60%、提取時(shí)間60 min、提取溫度70 ℃條件下,以不同液料比(20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1、45∶1 mL/g)超聲輔助提取原花青素(超聲提取時(shí)間20 min,功率600 W);提取完畢后采用1.2.2方法測(cè)定原花青素含量。

1.2.3.3 提取溫度對(duì)原花青素含量的影響 取3 g黑果腺肋花楸勻漿,在乙醇濃度60%、提取時(shí)間60 min、液料比25∶1 mL/g條件下,以不同溫度(40、50、60、70、80 ℃)超聲輔助提取原花青素(超聲提取時(shí)間20 min,功率600 W);提取完畢后采用1.2.2方法測(cè)定原花青素含量。

1.2.3.4 提取時(shí)間對(duì)原花青素含量的影響 取3 g黑果腺肋花楸勻漿,在乙醇濃度60%、提取溫度70 ℃、液料比25∶1 mL/g條件下,以不同時(shí)間(40、60、80、100、120、140 min)超聲輔助提取原花青素(超聲提取時(shí)間20 min,功率600 W);提取完畢后采用1.2.2方法測(cè)定原花青素含量。

1.2.4 黑果腺肋花楸原花青素提取工藝優(yōu)化 結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、提取溫度對(duì)原花青素含量影響顯著的3個(gè)因素,在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上采用三因素三水平的響應(yīng)面分析方法優(yōu)化原花青素提取工藝。

表1 黑果腺肋花楸原花青素響應(yīng)面分析因素與水平Table 1 Factors and levels of response surface methodologyanalysis of black chokeberry

采用Design Expert 8.0.6 trial軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,通過(guò)獲得影響因素的一次效應(yīng)、二次效應(yīng)及其交互效應(yīng)方程,對(duì)影響黑果腺肋花楸原花青素提取的因素進(jìn)行更深入的研究。

1.2.5 AB-8大孔樹(shù)脂純化

1.2.5.1 AB-8大孔樹(shù)脂預(yù)處理 AB-8大孔樹(shù)脂用無(wú)水乙醇浸泡24 h,充分溶脹,去離子水洗至無(wú)醇;加入5% HCl溶液浸泡12 h后,去離子水洗至中性;加入5% NaOH溶液浸泡12 h后,去離子水洗至中性;抽濾吸干樹(shù)脂表面水分,待用[13]。

1.2.5.2 AB-8大孔樹(shù)脂吸附和洗脫 取26 mm×60 cm層析柱,將3 mg/mL的原花青素粗提液以1 mL/min流速上柱吸附,吸附完畢后用5 BV去離子水洗去蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì);然后用50%乙醇溶液以1 mL/min流速洗脫,收集洗脫液,真空濃縮,冷凍干燥后測(cè)定原花青素純化物含量。

1.2.6 黑果腺肋花楸原花青素的抑菌性實(shí)驗(yàn) 采用牛津杯法[14]測(cè)定原花青素的抑菌性。具體實(shí)驗(yàn)步驟為:供試菌株的活化、菌懸液的制備、原花青素溶液配制、含菌平板制作及牛津杯法抑菌效果檢測(cè)。

1.2.6.1 供試菌種活化 將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母從4 ℃冰箱取出,轉(zhuǎn)接至新鮮營(yíng)養(yǎng)瓊脂表面,細(xì)菌于37 ℃培養(yǎng)24 h,酵母菌于30 ℃培養(yǎng)3 d。

1.2.6.2 菌懸液的制備 將活化的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌取一接種環(huán)放置于LB肉湯培養(yǎng)基中,搖床150 r/min振蕩8 h后,調(diào)整菌懸液濃度到108CFU/mL[15];將活化的釀酒酵母取一環(huán)放置于麥芽汁培養(yǎng)基中,搖床上150 r/min振蕩14 h。

1.2.6.3 原花青素溶液配制 將黑果腺肋花楸粗提物和純化物分別配制成6 mg/mL的原花青素水溶液,用水1∶2稀釋,測(cè)定兩個(gè)不同濃度對(duì)供試菌的抑制效果。

1.2.6.4 含菌平板的制作 新鮮配制的LB瓊脂培養(yǎng)基和孟加拉紅培養(yǎng)基于121 ℃下滅菌20 min,當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右在超凈臺(tái)上將培養(yǎng)基倒入滅菌的培養(yǎng)皿中,每個(gè)培養(yǎng)皿倒入約20 mL左右培養(yǎng)基;待培養(yǎng)基凝固,取0.1 mL菌懸液用三角涂布棒分別涂布于培養(yǎng)基上備用。

1.2.6.5 牛津杯法 將滅菌牛津杯用無(wú)菌鑷子夾出,垂直放置于培養(yǎng)基表面,輕輕按壓,使杯底與培養(yǎng)基之間無(wú)縫隙,每個(gè)平板放置4個(gè)牛津杯,每個(gè)牛津杯注入200 μL藥液,并用無(wú)菌生理鹽水作對(duì)照。細(xì)菌于37 ℃培養(yǎng)24 h,酵母菌于30 ℃培養(yǎng)2 d。

1.3 數(shù)據(jù)處理

本文采用Excel軟件進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)和抑菌性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理;采用Design Expert 8.0.6 trial進(jìn)行多元回歸擬合和方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素結(jié)果

2.1.1 乙醇濃度對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含量的影響 由圖1可知,隨著乙醇濃度的增加,黑果腺肋花楸提取物中原花青素含量升高,當(dāng)乙醇濃度為60%時(shí),黑果腺肋花楸原花青素含量達(dá)到最大值,此后隨著乙醇濃度增加原花青素含量下降,所以60%乙醇濃度為黑果腺肋花楸原花青素的最佳乙醇提取濃度。

圖1 不同乙醇濃度對(duì)黑果腺肋花楸原花青素提取含量的影響Fig.1 Effect of ethanol concentration on procyanidins content from black chokeberry

2.1.2 液料比對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含量的影響 由圖2可知,當(dāng)液料比為25∶1 mL/g時(shí)黑果腺肋花楸原花青素含量最高為3.82%,隨著液料比增加,花楸原花青素含量緩慢下降?？赡艿脑蚴请S著料液比的增大,脂溶性雜質(zhì)的成分溶出量增加,可與乙醇結(jié)合,為原花青素的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,導(dǎo)致原花青素含量下降。所以確定黑果腺肋花楸花楸原花青素最佳提取的液料比為25∶1 mL/g。

圖2 不同液料比對(duì)黑果腺肋花楸原花青素提取含量的影響Fig.2 Effect of liquid-to-solid ratio on procyanidins content from black chokeberry

2.1.3 溫度對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含量的影響 由圖3可知,隨著溫度的升高,原花青素含量增加,當(dāng)溫度為70 ℃時(shí)原花青素含量最高,溫度高于70 ℃時(shí)含量緩慢下降。如果溫度過(guò)高,一方面其中活性成分會(huì)受到破壞,雜質(zhì)溶出量增加,給后續(xù)操作帶來(lái)不便[16];另一方面因?yàn)樘崛≡ㄇ嗨厮糜袡C(jī)溶劑為乙醇,溫度過(guò)高也會(huì)造成溶劑損失。綜合以上因素,提取溫度應(yīng)在70 ℃較為合適。

圖3 不同溫度對(duì)黑果腺肋花楸原花青素提取含量的影響Fig.3 Effect of temperature on procyanidinscontent from black chokeberry

2.1.4 提取時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含量的影響 由圖4可知,提取時(shí)間40、60、80 min對(duì)原花青素含量影響不大;隨著時(shí)間增加,原花青素含量下降,推測(cè)其原因:其一,長(zhǎng)時(shí)間加熱會(huì)對(duì)原花青素結(jié)構(gòu)造成破壞,本實(shí)驗(yàn)在較高溫度下(70 ℃)提取原花青素,為保證原花青素活性,應(yīng)選取較短時(shí)間提取原花青素;其二,80 min后原花青素可能與細(xì)胞內(nèi)的其它物質(zhì)反應(yīng),從而使原花青素含量減少。

表3 方差分析結(jié)果Tbale 3 Results of variance analysis

注:*表示影響顯著(p<0.05);**表示影響極顯著(p<0.01)。

綜上所述,本實(shí)驗(yàn)選取60 min為黑果腺肋花楸原花青素最佳提取時(shí)間。根據(jù)相關(guān)性分析,時(shí)間是四個(gè)單因素中對(duì)原花青素含量的影響最小的因素,所以之后的響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中,綜合考慮乙醇濃度、液料比和提取溫度三個(gè)因素對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含量的影響。

圖4 不同提取時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含提取量的影響Fig.4 Effect of time on procyanidinscontent from black chokeberry

2.2 響應(yīng)面分析法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果及方差分析 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2所示,通過(guò)多元回歸擬合分析得出乙醇濃度、液料比、提取溫度對(duì)黑果腺肋花楸原花青素含量影響，可以用二次多項(xiàng)回歸方程表示:原花青素含量Y=3.33+0.11A+0.066B+0.066C-0.12AB+0.087AC+0.14BC-0.23A2-0.31B2-0.28C2。

表2 黑果腺肋花楸原花青素響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Design and results of response surfacemethodology experiment of black chokeberry

T檢驗(yàn)表明:方程中A、BC影響顯著(p<0.05),A2、B2、C2影響極顯著(p<0.001)。

2.2.2 雙因素交互作用分析 圖5～圖7表示各因素交互作用響應(yīng)面圖。從響應(yīng)面圖的陡峭程度可直觀反映出兩因素交互作用的強(qiáng)弱[17]。由圖5～圖7看出,料液比與提取溫度之間的交互作用最明顯,乙醇濃度與提取溫度交互作用次之,相比較而言乙醇濃度與料液比交互作用較弱。

表4 黑果腺肋花楸原花青素的抑菌效果Table 4 Antibacterial activity of procyanidins from black chokeberry

圖5 液料比與乙醇濃度響應(yīng)面圖Fig.5 Response surfaces of liquid-to-solid ratio and alcohol concentration

圖6 液料比與提取溫度響應(yīng)面圖Fig.6 Response surfaces of extraction temperture and liquid-to-solid ratio

圖7 提取溫度與乙醇濃度響應(yīng)面圖Fig.7 Response surfaces of extraction temperture and alcohol concentration

結(jié)合回歸數(shù)學(xué)分析模型,可預(yù)測(cè)提取的最優(yōu)條件參數(shù)為乙醇濃度62.48%、液料比25.49∶1 mL/g、提取溫度71.80 ℃,在此條件下原花青素含量為3.36%。結(jié)合實(shí)際情況,提取的最佳工藝參數(shù)為乙醇濃度62%,液料比25∶1 mL/g、提取溫度72 ℃,提取時(shí)間60 min。在此條件下對(duì)提取的黑果腺肋花楸原花青素進(jìn)行驗(yàn)證,實(shí)際測(cè)得原花青素含量為3.32%,與理論值預(yù)測(cè)值僅差0.04%,說(shuō)明采用響應(yīng)面法得到的優(yōu)化工藝可行性強(qiáng),優(yōu)化結(jié)果可靠。

2.3 AB-8大孔樹(shù)脂分離實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂分離后,測(cè)得純化物中原花青素含量為14.29%,與分離前原花青素含量(3.32%)相比,純度提高約4倍。說(shuō)明經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化后,原花青素含量顯著提高,結(jié)合文獻(xiàn)可知[18-19],AB-8大孔樹(shù)脂適合用于黑果腺肋花楸原花青素的分離純化。

2.4 黑果腺肋花楸原花青素抑菌性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表4可以看出,黑果腺肋花楸原花青素對(duì)幾種供試菌種的抑菌效果不同。黑果腺肋花楸粗提物和純化物對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用最強(qiáng),其次是金黃色葡萄球菌,再次是大腸桿菌,幾種樣品對(duì)釀酒酵母均無(wú)抑制作用。多酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)細(xì)菌的抑制作用較明顯,對(duì)某些真菌無(wú)明顯的抑制作用,本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相似[20-21]。不同的原花青素樣品濃度對(duì)供試菌種的抑制作用也不盡相同,隨濃度提高,抑菌效果增強(qiáng)。黑果腺肋花楸原花青素粗提物比原花青素純化物的抑菌效果更強(qiáng),表兒茶素相對(duì)于兩種提取物而言抑菌作用最弱?？赡艿脑蚴窃ㄇ嗨丶兓按蠓肿拥鞍踪|(zhì),有機(jī)酸類(lèi)物質(zhì)等對(duì)微生物也有一定的抑菌作用;另一原因是由于多酚類(lèi)物質(zhì)協(xié)同效應(yīng),多種酚類(lèi)物質(zhì)共存會(huì)增加某一種酚類(lèi)原有的活性,即總酚可能比單獨(dú)某種酚類(lèi)物質(zhì)的抑菌效果要好[20],從而純化前比純化后的原花青素樣品抑菌作用更強(qiáng)。

3 結(jié)論

經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化得出黑果腺肋花楸原花青素最佳提取工藝參數(shù)為乙醇濃度62%,液料比25∶1 mL/g、提取溫度72 ℃,提取時(shí)間60 min。在此條件下提取的黑果腺肋花楸原花青素含量為3.32%;經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化后,原花青素濃度由純化前的3.32%提高到14.29%,原花青素含量約提高4倍,說(shuō)明AB-8大孔樹(shù)脂可以很好地分離純化黑果腺肋花楸原花青素。

抑菌性實(shí)驗(yàn)表明黑果腺肋花楸原花青素對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有一定的抑制作用,抑菌作用大小依次為枯草芽孢桿菌>金黃色葡萄球菌>大腸桿菌>釀酒酵母;純化前的原花青素樣品具有更強(qiáng)的抑菌作用,且隨濃度提高抑菌作用增強(qiáng)。

目前,國(guó)外關(guān)于黑果腺肋花楸多酚類(lèi)物質(zhì)的研究已取得階段性進(jìn)展,而國(guó)內(nèi)對(duì)其研究仍處于起步階段,本文首次研究黑果腺肋花楸原花青素的提取純化工藝并探究其抑菌性質(zhì)。為我國(guó)黑果腺肋花楸產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供依據(jù)。

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Extraction and antibacterial activity of procyanidins fromAroniamelanocarpa

ZHU Yue,LI Fen-mei,WANG Yan-li,ZHU Ning,ZHANG Hai-ping,AN Jian-hui,SUN Ai-dong*

(Key Loboratory of Forestry Food Processing Security,College of Biological Sciences and Biotechnology,Beijing 100083,China)

Response surface methodology was employed to optimize the extraction conditions of procyanidins fromAroniamelanocarpaand antibacterial activity was researched by Oxford-cup tests. Results indicated that the optimum extractive conditions were determined as follows:ethanol concentration 62%,liquid to solid ratio 25∶1 mL/g,extraction temperature 72 ℃,extraction time 60 min,the content of procyanidins through this optimized procedure was 3.32%. The content of procyanidins were four times as much purification as crude extracts after the treatment by AB-8 macroporous resin,which content of procyanidins was 14.29%. Bacteriostatic experiment of procyanidins from black chokeberry on several strains tested showed antimicrobial effect as follows:Bacillussubtilis>Staphylococcusaureus>Escherichiacoli>Saccharomycescerevisiae. Antibacterial activity increased with increasing of procyanidins concentration and crude extracts ofAroniamelanocarpaprocyanidins had better antibacterial activity.

Aroniamelanocarpa;procyanidins;extraction and purification;antibacterial activity

2016-08-12

朱月(1993-),女,在讀碩士研究生,研究方向:天然產(chǎn)物與功能性食品,E-mail:zhuyue1109@163.com。

*通訊作者:孫愛(ài)東(1968-),女,教授,研究方向:天然產(chǎn)物生理活性物質(zhì)的開(kāi)發(fā)與利用,E-mail:adsun68@163.com。

國(guó)家自然基金項(xiàng)目(31471593)。

TS255.1

B

1002-0306(2017)02-0302-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.02.050