郭夏蕾,張 健,楊貞耐

(北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心,食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室,北京工商大學(xué),北京 100048)

植物乳桿菌耐受口腔不良環(huán)境及其抑菌特性研究

郭夏蕾,張 健,楊貞耐*

(北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心,食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室,北京工商大學(xué),北京 100048)

擬利用前期已經(jīng)篩選出的可以抑制變異鏈球菌的植物乳桿菌,研究了能抑制變異鏈球菌的植物乳桿菌在口腔應(yīng)用方面的特性的研究。本研究測(cè)定了植物乳桿菌對(duì)溶菌酶、抗生素、鹽和酸的耐受性,測(cè)定了五株植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum,L.plantarum)K25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1的自聚集能力以及分別與變異鏈球菌的共聚集能力,以及研究了添加植物乳桿菌對(duì)變異鏈球菌自聚集能力和產(chǎn)胞外多糖的影響。結(jié)果表明,五株植物乳桿菌對(duì)溶菌酶都有一定耐受性,遠(yuǎn)高于人體口腔唾液的溶菌酶濃度(157 μg/mL)。五株植物乳桿菌對(duì)酸和鹽也有一定的耐受性。L.plantarumYW5-1對(duì)抗生素的耐受性較強(qiáng)。添加L.plantarumK25、YW5-1和YW1-1上清液后可以降低變異鏈球菌合成胞外多糖的能力。5株植物乳桿菌中K25和YW5-1的自聚和共聚能力較強(qiáng),并且添加了植物乳桿菌后,可以降低變異鏈球菌的自聚集能力。

植物乳桿菌,變異鏈球菌,口腔應(yīng)用,抑菌活性

人體的口腔環(huán)境是一個(gè)由多種微生物共存形成的復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)[1],其中一些對(duì)口腔健康不利的細(xì)菌過度生長(zhǎng)繁殖就會(huì)導(dǎo)致口腔疾病的發(fā)生[2]。齲齒是由細(xì)菌感染造成的,是一種常見的口腔疾病[3-4]。目前變異鏈球菌是公認(rèn)的導(dǎo)致齲齒的主要原因,變異鏈球菌利用口腔中的碳水化合物形成的有機(jī)酸會(huì)腐蝕牙齒表面,導(dǎo)致牙齒脫礦最終形成齲齒[5]。變異鏈球菌能夠作用于牙齒主要是因?yàn)樽儺愭溓蚓幸欢ǖ酿じ侥芰?除了氫鍵等物理作用的非依賴性的黏附,主要是由于變異鏈球菌利用蔗糖合成的胞外多糖來進(jìn)行依賴性的黏附,這種依賴性黏附是變異鏈球菌能夠黏附到牙齒表面最主要的過程[6-8]。益生菌自第一次提出以來,已經(jīng)越來越多的被應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域,口腔領(lǐng)域也開始關(guān)注益生菌的應(yīng)用[9-10]。大量研究表明,益生菌在保護(hù)口腔健康、維持口腔微生態(tài)平衡方面有重要的意義[11]。日本東海大學(xué)教授Ishikawa[12]發(fā)現(xiàn),益生菌(LactobacillussalivariusTI2711,LS1)對(duì)造成牙周病的致病菌具有殺菌作用,具有預(yù)防牙周病和口臭等效果。Caglar[13]等發(fā)現(xiàn)食用含有雙歧桿菌的冰激凌能明顯減少口腔中變異鏈球菌的數(shù)量,而不改變?nèi)樗峋臄?shù)量。有文獻(xiàn)表明益生菌的作用是可以抑制變異鏈球菌的活性和減少變異鏈球菌的數(shù)量,從而降低了齲齒的發(fā)病率[14]。

前期本課題組已經(jīng)篩選出了能抑制變異鏈球菌的幾株植物乳桿菌[15],接下來將對(duì)這幾株能抑制變異鏈球菌的植物乳桿菌對(duì)口腔各種不良環(huán)境的耐受性以及在口腔應(yīng)用方面的抑菌特性進(jìn)行研究,包括植物乳桿菌對(duì)溶菌酶、抗生素、鹽和酸的耐受性和植物乳桿菌的自聚集能力和共聚集能力,并且研究了添加植物乳桿菌上清液對(duì)變異鏈球菌自聚集能力的影響,以及植物乳桿菌對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)胞外多糖的影響。由此來評(píng)價(jià)植物乳桿菌在口腔應(yīng)用中的能力。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

Lactobacillusplantarum(L.plantarum)K25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1 均由作者所在實(shí)驗(yàn)室保藏,其中植物乳桿菌K25由吉林省農(nóng)科院提供;1.3771Streptococcusmutans、1.2500Streptococcusmutans、1.2499Streptococcusmutans中國(guó)普通微生物菌種保藏所;濃硫酸、無(wú)水乙醇 北京化工廠;三氯乙酸 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;溶菌酶、蒽酮、氨芐青霉素、萬(wàn)古霉素、鏈霉素、氯霉素、紅霉素 北京博奧拓科技有限公司;MRS液體培養(yǎng)基 葡萄糖20 g,蛋白胨10 g,牛肉膏10 g,酵母浸粉5 g,無(wú)水乙酸鈉5 g,檸檬酸鈉5 g,磷酸氫二鈉2 g,吐溫-80 1 mL,七水硫酸鎂0.5 g,硫酸錳0.05 g,加水至1000 mL,1 mol/L乙酸調(diào)pH=6.6;BHI液體培養(yǎng)基 心提取物 5.0 g,腦提取物12.5 g,蛋白胨10.0 g,葡萄糖2.0 g,NaCl 5.0 g,Na2HPO42.5 g,瓊脂15.0 g,蒸餾水1.0 L,pH=7.4。

MLS-3750型高壓蒸汽滅菌器 日本三洋公司;CR21GⅢ型立式高速冷凍離心機(jī)、U-3900型紫外可見分光光度計(jì) 日本日立公司;數(shù)顯pH計(jì) 上海梅特利公司;ELx800型酶標(biāo)儀 美國(guó)BIO-RAD儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 植物乳桿菌對(duì)溶菌酶耐受性 采用牛津杯法考察植物乳桿菌L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1對(duì)溶菌酶的耐受情況。下層培養(yǎng)基為1.5%(w/v)的瓊脂固體培養(yǎng)基,分別將0.3%(w/v)的MRS培養(yǎng)基與植物乳桿菌的混合物(107CFU/mL)均勻涂布于瓊脂培養(yǎng)基上。輕輕插入牛津杯,將牛津杯放平,然后在每個(gè)牛津杯中加入100 μL的不同濃度的溶菌酶溶液(0.2～5.0 mg/mL),每組設(shè)置三個(gè)平行。將上述平板在37 ℃培養(yǎng)12 h,根據(jù)抑溶菌酶對(duì)植物乳桿菌的抑菌圈的情況分析植物乳桿菌對(duì)溶菌酶的耐受性[16]。

1.2.2 植物乳桿菌對(duì)抗生素的耐受性 在96孔板中加入 200 μL MRS 培養(yǎng)基,再分別添加1、2、4、8、16、32和64 μg/mL不同濃度的氨芐青霉素、萬(wàn)古霉素、鏈霉素、氯霉素和紅霉素。然后將活化好的植物乳桿菌L.plantarumYW5-1培養(yǎng)液以10%(v/v)的接種量分別接種到 96孔培養(yǎng)板中,于37 ℃培養(yǎng) 24 h,設(shè)置三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。根據(jù)植物乳桿菌的生長(zhǎng)情況來測(cè)定植物乳桿菌對(duì)不同的抗生素的耐受性[17]。

1.2.3 植物乳桿菌對(duì)鹽的耐受性 將活化好的植物乳桿菌菌液按3%的接種量分別接種于NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%、1.0%、2.0%、4.0%、8.0%的MRS培養(yǎng)基中,以未添加NaCl的MRS培養(yǎng)基為對(duì)照組。于37 ℃培養(yǎng)12 h,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的無(wú)菌的生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋,然后在MRS瓊脂平板上涂布,每個(gè)稀釋梯度做3個(gè)平行樣,37 ℃培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。

式中:Nt為含NaCl的MRS培養(yǎng)基的植物乳桿菌的活菌數(shù);N0為不含NaCl的MRS培養(yǎng)基的植物乳桿菌的活菌數(shù)。

1.2.4 植物乳桿菌對(duì)酸的耐受性 將活化好的植物乳桿菌菌液按3%的接種量分別接種于pH為3、4、5、6的MRS培養(yǎng)基中,以pH為7的MRS培養(yǎng)基為對(duì)照組。耐受性檢測(cè)方法同1.2.3。

1.2.5 植物乳桿菌對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)胞外多糖的影響 取活化好的Streptococcusmutans1.2499菌懸液,將含1%(w/v)蔗糖的 BHI 液體培養(yǎng)基分別與L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1植物乳桿菌的上清液(0.22 μm濾膜)等體積混合,再將Streptococcusmutans1.2499菌液以2%的接種量接種于混合好的培養(yǎng)基中,37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)12 h,對(duì)照組是不含上清液的培養(yǎng)基。變異鏈球菌胞外多糖的收集方法參考周學(xué)東[18]的方法。胞外多糖含量的測(cè)定用蒽酮-硫酸法,先用葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)而從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得到胞外多糖的含量。

1.2.6 植物乳桿菌和變異鏈球菌的自聚集能力 將植物乳桿菌L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1和Streptococcusmutans1.2499、Streptococcusmutans1.3771和Streptococcusmutans10438分別在相應(yīng)的培養(yǎng)基中接種培養(yǎng),于37℃ 活化16 h,6000 r/min離心15 min后收集菌體,用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)清洗兩次,再將沉淀重懸到OD600值為0.6±0.02,準(zhǔn)確記錄此時(shí)吸光值(A0)。在24孔板中每孔添加1 mL菌懸液,37 ℃(5% CO2)的條件下培養(yǎng),每間隔1 h測(cè)定上清液在600 nm處的吸光值(At),共測(cè)定3 h,設(shè)置三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。計(jì)算菌體自聚集能力公式如下[19-20]:

表1 L. plantarum K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1對(duì)溶菌酶耐受性(mm)Table 1 Lysozyme tolerance of L. plantarum K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1(mm)

自聚集能力(%)=(A0-At)/A0×100。

將五株植物乳桿菌L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1的上清液(0.22 μm濾膜)分別與Streptococcusmutans1.2499等體積混合,37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)12 h,測(cè)定其自聚集能力,對(duì)照組是不加上清液的培養(yǎng)基。

1.2.7 植物乳桿菌的共聚集能力 考察五株植物乳桿菌L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1分別和三株口腔變異鏈球菌Streptococcusmutans1.2499、Streptococcusmutans1.3771和Streptococcusmutans10438的共聚集能力。將上述五株植物乳桿菌和三株變異鏈球菌分別接種到對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基中,37 ℃過夜培養(yǎng),將經(jīng)活化后的液體培養(yǎng)基于6000 r/min 離心15 min后收集菌體,用磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)清洗兩次,然后將其沉淀重懸到OD600值為 0.6±0.02,準(zhǔn)確記錄五株植物乳桿菌和三株變異鏈球菌的菌懸液的吸光值(分別記為Ax和 Ay)。取經(jīng)調(diào)節(jié)的植物乳桿菌和變異鏈球菌的菌懸液各500 μL,混合添加到24 孔板中,37 ℃環(huán)境下培養(yǎng),每隔1 h 測(cè)定混合菌液的上清液在 600 nm 處的吸光值,記為A(x+y),共計(jì)3 h,每組設(shè)置三個(gè)平行。

利用下列公式計(jì)算植物乳桿菌和口腔變異鏈球菌的共聚集能力[19-20]:

共聚集能力=[(Ax+Ay)- 2×A(x+y)]/(Ax+Ay)×100

1.2.8 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理,Turkey檢驗(yàn)方法用于實(shí)驗(yàn)中比較各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異的顯著性。p>0.05 表示差異不著性,p<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物乳桿菌對(duì)溶菌酶耐受性

基于口腔環(huán)境的復(fù)雜性,人體的口腔中會(huì)含有一定量的溶菌酶,溶菌酶對(duì)有益菌也會(huì)造成一定的危害。所以作為口腔益生菌要求植物乳桿菌對(duì)溶菌酶有一定的耐受性[21]。五株植物乳桿菌L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1對(duì)溶菌酶的耐受性結(jié)果如表1所示。對(duì)溶菌酶的耐受性由抑菌圈大小來表示,沒有抑菌圈的代表可以耐受該濃度的溶菌酶。由表1可得,五株植物乳桿菌對(duì)溶菌酶都有一定的耐受性,基本可以耐受0.8 mg/mL的溶菌酶。其中L.plantarumYW5-1對(duì)溶菌酶的耐受性最好,可以耐受2.0 mg/mL的溶菌酶,正常人體口腔中的溶菌酶含量為(1～57 μg/mL)[22],所以L.plantarumYW5-1更容易在口腔中存活,作為口腔益生菌更有優(yōu)勢(shì)。

2.2 植物乳桿菌對(duì)抗生素的耐受性

人體口腔中會(huì)因?yàn)槿丝诜股氐榷鴼埩粢欢舛鹊目股?抗生素會(huì)對(duì)口腔中的益生菌產(chǎn)生一定的殺滅作用,所以對(duì)抗生素的耐受性也是衡量乳酸菌是否可以作為口腔益生菌的一大重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)研究了L.plantarumYW5-1對(duì)不同濃度的氨芐青霉素、萬(wàn)古霉素、鏈霉素、氯霉素和紅霉素五種抗生素的耐受性。結(jié)果如表2所示,對(duì)照參考文獻(xiàn)方法可知,L.plantarumYW5-1對(duì)萬(wàn)古霉素表現(xiàn)出敏感性,對(duì)紅霉素中度敏感，也可以耐受2 μg/mL的青霉素，對(duì)氯霉素和鏈霉素表現(xiàn)出較強(qiáng)的耐受性。所以L.plantarumYW5-1對(duì)抗生素有一定的耐受性,作為口腔益生菌有一定的在惡劣的口腔環(huán)境中存活的能力。

表2 L. plantarum YW5-1對(duì)抗生素耐受性Table 2 Antibiotic tolerance of L. plantarum YW5-1

注:“+”代表耐受,“-”代表抑制。

2.3 植物乳桿菌對(duì)鹽的耐受性

人們經(jīng)常會(huì)食用含鹽量較高的食物,從而使口腔環(huán)境在一定時(shí)間內(nèi)處于鹽濃度較高的條件。乳酸菌要在口腔中定植與生存需要對(duì)鹽也有一定的耐受性,才能正常發(fā)揮其在口腔中的益生作用。本實(shí)驗(yàn)研究了五株植物乳桿菌分別在NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%、1.0%、2.0%、4.0%、8.0%的MRS培養(yǎng)基中的存活率,結(jié)果如圖1所示。由圖1可知,隨著鹽濃度的增加,五株植物乳桿菌的存活率都呈現(xiàn)不斷降低的趨勢(shì)。其中植物乳桿菌K25、YW3-2、YW5-1和YW1-1的菌株存活率差異不大,鹽濃度在0.5%的存活率都達(dá)到了60%以上,鹽濃度在8%的時(shí)候菌株存活率也在20%以上。而SKT109的菌株存活率稍微弱點(diǎn)。所以五株植物乳桿菌對(duì)鹽都有一定的耐受性。

圖1 L. plantarum K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1對(duì)鹽的耐受性Fig.1 Salts tolerance of L. plantarum K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1

2.4 植物乳桿菌對(duì)酸的耐受性

在酸性條件下變異鏈球菌才能對(duì)牙齒產(chǎn)生作用形成齲齒[23],人們食用的很多食物可以使口腔環(huán)境在一定時(shí)間內(nèi)呈酸性,如大部分水果自身的pH是酸性的,有些腌制或者罐裝等食物的pH可以達(dá)到3左右。所以本實(shí)驗(yàn)研究了五株植物乳桿菌L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1分別在pH為3、4、5、6的培養(yǎng)基中的存活率,結(jié)果如圖2所示。由圖2可知,五株植物乳桿菌在pH為3時(shí)的存活率最低,在40%左右,隨著培養(yǎng)基pH升高,菌株的存活率也在不斷增加,可以達(dá)到70%左右。五株植物乳桿菌對(duì)酸的耐受性差異不明顯,植物乳桿菌SKT109在酸性條件下的菌株存活率略低。

圖2 L. plantarum K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1對(duì)酸的耐受性Fig.2 Acid tolerance of L. plantarum K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1

2.5 植物乳桿菌對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)胞外多糖的影響

變異鏈球菌利用蔗糖產(chǎn)生胞外多糖是黏附到牙齒表面的關(guān)鍵一步,也是導(dǎo)致齲齒的重要的一個(gè)部分,所以乳酸菌如果可以抑制變異鏈球菌產(chǎn)生胞外多糖,就可以在一定程度上減少變異鏈球菌在牙齒表面的定植與黏附,對(duì)齲齒也有一定的防治作用。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果如圖3所示,線性回歸公式為y=0.0039x+0.0841(R2=0.9901)。根據(jù)公式可知五株植物乳桿菌分別添加了上清液的實(shí)驗(yàn)組和未添加上清液的對(duì)照組變異鏈球菌產(chǎn)生的胞外多糖含量,結(jié)果如表3所示。由表3可知,L.plantarumK25、YW5-1和YW1-1的實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生的胞外多糖的濃度與對(duì)照組有顯著性差異(p<0.05),而L.plantarumSKT109和YW3-2兩株植物乳桿菌的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(p>0.05)。由此可知,添加了L.plantarumK25、YW5-1和YW1-1的上清液后對(duì)Streptococcusmutans1.2499產(chǎn)胞外多糖的能力產(chǎn)生了明顯的抑制作用,從而可以減少變異鏈球菌在口腔與牙齒表面的定植,對(duì)防治齲齒有一定的作用。

圖3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard curve of glucose

表3 植物乳桿菌對(duì)Streptococcus mutans1.3771產(chǎn)胞外多糖的影響(μg/mL)Table 3 Infuence of L. plantarum on exopolysaccharidesynthesis of Streptococcus mutans 1.3771(μg/mL)

2.6 植物乳桿菌和變異鏈球菌的自聚集能力

菌株通過表面分子的特異性識(shí)別在同種細(xì)菌之間的相互凝集的現(xiàn)象稱為自聚集。自聚集能力越高的菌株,更容易在口腔中定植與繁殖。所以,對(duì)口腔健康有利的益生菌自聚集能力越高越好,而對(duì)一些口腔致病菌,則是自聚集能力越低越有利于口腔健康。五株L.plantarumK25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1的自聚集能力結(jié)果如圖4(A)所示。由圖4(A)可知,五株植物乳桿菌的自聚集能力有所差異,其中YW5-1和K25的自聚集能力較強(qiáng),而SKT109和YW3-2的自聚集能力相對(duì)弱一些。所以,L.plantarumYW5-1與L.plantarumK25更容易在口腔中存活與繁殖,這兩株菌更適合作為口腔應(yīng)用的益生菌。三株變異鏈球菌的自聚集能力如圖4(B)所示,由圖4(B)可知三株菌的自聚集能力也有一定的差異,但隨著時(shí)間的增加,三株變異鏈球菌的自聚集能力都呈上升趨勢(shì)。添加植物乳桿菌上清液對(duì)變異鏈球菌自聚集能力的影響結(jié)果如圖4(C),由圖4(C)可知,添加了植物乳桿菌上清液之后,與未添加上清液的對(duì)照組比較,Streptococcusmutans1.2499的自聚集能力有著不同程度的減少,其中添加K25上清液組與對(duì)照組有著顯著性差異(p<0.05),說明K25對(duì)變異鏈球菌的自聚集能力減小作用更強(qiáng),更能減少變異鏈球菌在口腔中的定植,所以K25有較好的抑菌特性。

圖5 Streptococcus mutans 1.2499、Streptococcus mutans 1.3771、Streptococcus mutans 10438與植物乳桿菌K25(A)、SKT109(B)、YW32(C)、YW51(D)、YW11(E)的共聚集能力Fig.5 Co-aggregations of Streptococcus mutans 1.2499,Streptococcus mutans 1.3771,Streptococcus mutans 10438with Lactobacillus plantarum K25(A),SKT109(B),YW32(C),YW51(D),YW11(E)

2.7 植物乳桿菌的共聚集能力

除了自聚集,乳酸還可以與口腔中的其他微生物發(fā)生共聚集,進(jìn)而在口腔中定植與繁殖。共聚集能力越強(qiáng)的乳酸菌更容易在口腔中生存。五株植物乳桿菌與三株變異鏈球菌的共聚集能力和三株變異鏈球菌的自聚集能力如圖5所示。由圖5可知,五株植物乳桿菌都可以與變異鏈球菌發(fā)生共聚集,五株植物乳桿菌中L.plantarumYW5-1的共聚集能力相對(duì)較強(qiáng),所以相比其他植物乳桿菌更有優(yōu)勢(shì)在口腔中定植與存活,有較好的抑菌特性。同一株植物乳桿菌與不同的變異鏈球菌的共聚集能力也有所差異。三株變異鏈球菌Streptococcusmutans1.2499、Streptococcusmutans1.3771和Streptococcusmutans10438的自聚集能力見圖4。植物乳桿菌與變異鏈球菌發(fā)生共聚集后,相比較變異鏈球菌的自聚集能力植物乳桿菌在一定程度上減少了變異鏈球菌的自聚集。而對(duì)于植物乳桿菌,與變異鏈球菌發(fā)生共聚集后,其聚集能力相對(duì)于自聚集能力有所提高。

3 結(jié)論

在篩選出了能抑制變異鏈球菌的植物乳桿菌菌株基礎(chǔ)之上,本文研究了這幾株植物乳桿菌在口腔應(yīng)用方面的特性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,這幾株植物乳桿菌在口腔應(yīng)用方面具有比較好的特性,其中L.plantarumYW5-1尤為突出,可以耐受2.0 mg/mL的溶菌酶,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于人體口腔唾液中的溶菌酶濃度。對(duì)鹽和酸也有一定的耐受性。此外L.plantarumYW5-1對(duì)抗生素也具有一定的耐受性。L.plantarumYW5-1 可以減少變異鏈球菌產(chǎn)生胞外多糖。L.plantarumYW5-1的自聚集能力和共聚集能力都比較高,添加植物乳桿菌之后可以在一定程度上減少變異鏈球菌的自聚集能力,減少變異鏈球菌在口腔中的定植。所以L.plantarumYW5-1對(duì)口腔不良環(huán)境有較好的耐受能力和較好的抑菌特性,具有作為口腔益生菌的潛力。益生菌防治齲齒可以避免抗生素治療齲齒帶來的破壞口腔菌群平衡的弊端,為進(jìn)一步利用乳酸菌的益生特性來防治齲齒等口腔疾病提供技術(shù)基礎(chǔ)。

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Study on oral application characteristics of lactic acid bacteria that inhibitingStreptococcusmutans

GUO Xia-lei,ZHANG Jian,YANG Zhen-nai*

(Beijing Advanced Innovation Center for Food Nutrition and Human Health,Beijing Laboratory of Food Quality and Safety,Beijing Technology and Business University,Beijing 100048,China)

Intends to use the pre-screened lactic acid bacterias that can inhibitStreptococcusmutans,oral application characteristics of lactic acid bacteria that inhibitingStreptococcusmutanswere studied.The study measured lysozyme,antibiotic,salts and acid tolerance ofL.plantarums,measured the auto-aggregation ability and co-aggregation ability of five lactic acid bacteria(Lactobacillusplantarum,L.plantarum)K25,SKT109,YW3-2,YW5-1 and YW1-1 withS.mutans. And the infuence ofL.plantarumon auto-aggregation and exopolysaccharide synthesis ofStreptococcusmutanswas determined. The results showed that five lactic acid bacteria have a certain tolerance for lysozyme,much higher than the concentration of lysozyme in human saliva(1～57 μg/mL). Five lactic acid bacteria also had a certain tolerance for salts and acid.L.plantarumYW5-1 showed the best tolerance to antibiotics. Adding supernatant ofL.plantarumK25,YW5-1 and YW1-1 could reduce the ability ofS.mutansto synthesizing exopolysaccharide. The auto-aggregation ability and co-aggregation of YW5-1 and K25 were best of the fiveLactobacillusplantarum(L.plantarum),and after adding lactic acid bacteria,auto-aggregation ability ofS.mutanscould be reduced.

Streptococcusmutans;Lactobacillusplantarum;oral application;inhibitory activity

2016-09-19

郭夏蕾(1991-)，女，碩士研究生，研究方向:乳品生物技術(shù),E-mail:610850207@qq.com。

*通訊作者:楊貞耐(1965-)，男，博士，教授，研究方向:乳品科學(xué)及加工技術(shù),E-mail:yangzhennai@th.btbu.edu.cn。

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31571857)。

TS201.3

A

1002-0306(2017)02-0215-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.02.033