張繼才，和占星，李天平，金顯棟，楊凱，亐開興，詹靖璽，付美芬，王安奎，黃必志

(云南省草地動物科學研究院，云南 昆明 650212)

[目的]為提高CIDR+PG法對云嶺牛的誘導發(fā)情效果。[方法]采用CIDR+PG法和CIDR+FSH+PG法分別對產(chǎn)后40～60 d帶犢云嶺牛母牛進行了誘導發(fā)情的效果比較。[結果]CIDR+PG法的發(fā)情率和妊娠率分別為76.5%和58.8%，CIDR+FSH+PG法的發(fā)情率和妊娠率分別為90.0%和80.0%；且發(fā)情時間更集中，比CIDR+PG法提前19 h，F(xiàn)SH誘導發(fā)情效果極好，差異顯著(P<0.01)。[結論]利用FSH刺激靜止卵巢恢復正常機能，促進卵泡發(fā)育的作用，能有效提高CIDR+PG法的誘導發(fā)情效果。

云嶺牛；誘導發(fā)情；CIDR+PG法；FSH

*通訊作者：黃必志(1964-)，云南騰沖人,研究員,主要從事草地畜牧業(yè)研究。

隨著人民生活水平的日益提高，牛肉、牛乳需求量逐漸增加，集約化、規(guī)模化的肉牛、奶牛場發(fā)展迅速。在肉牛、奶牛養(yǎng)殖生產(chǎn)中，為追求高產(chǎn)、高效目標，在一定程度上犧牲或限制了母牛繁殖性能的發(fā)揮，各種原因引起的不孕不育母牛數(shù)量增加，牛群的受胎率降低，養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益受到了一定的影響，因此，提高規(guī)?；B(yǎng)殖場母牛繁殖力就顯得尤為重要。

誘導發(fā)情通常指使用外源激素或采取物理措施，使處于休情期或生理乏情階段的母畜出現(xiàn)正常發(fā)情排卵的方法。誘導發(fā)情不僅可以延長母畜的繁殖年限，還可以通過縮短產(chǎn)犢間隔和增加產(chǎn)仔(犢)數(shù)來提高母畜的繁殖力。所以，采用激素或藥物以促進母牛發(fā)情的各種措施和方法，在規(guī)模養(yǎng)殖場中越來越得到重視。

上世紀70年代，科學家通過對母牛發(fā)情周期中內(nèi)源生殖激素和卵巢活動的變化規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)，黃體產(chǎn)生的孕酮借助負反饋機制的抑制作用來控制母牛的發(fā)情和排卵，同期發(fā)情技術得到了快速發(fā)展和應用，極大的提高了誘導發(fā)情的效果和效率，并由此產(chǎn)生了縮短黃體壽命和延長黃體壽命兩種同期發(fā)情方法。盡管兩種方法所用的激素和作用不同，但處理結果完全相同，均能達到讓處理牛只在短期內(nèi)出現(xiàn)集中發(fā)情的目的。目前，以CIDR+PG法在同期發(fā)情中應用最為廣泛，能夠獲得較高的發(fā)情率，但是受胎率偏低。為此，本試驗在哺乳母牛的誘導發(fā)情過程中利用FSH刺激靜止卵巢恢復正常機能，促進卵泡發(fā)育，以期提高牛群的受胎率。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組

根據(jù)母牛的檔案和產(chǎn)犢記錄，在云南省草地動物科學研究院舍飼母牛群中共選出37頭泌乳(帶犢)母牛進行試驗，牛只及分組情況見表1。

1.2 藥物和器械

CUE-MATE孕酮陰道栓(CIDR)：由Bioniche Animal Health Pty. Ltd.生產(chǎn)，每支含1.56 g P4。

氯前列烯醉注射液：丹東綠丹和華動物有限公司生產(chǎn)，規(guī)格2 mL，每支含PG 0.2 mg。

FSH：中國科學院動物研究所生產(chǎn)，規(guī)格：10 mg/瓶。使用時用20 mL生理鹽水稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用，剩余藥物置于冰箱在0～4℃保鮮區(qū)保存，在下次優(yōu)先使用。

便攜式B超儀：日本本田電子產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)，型號：HS-101V。

1.3 試驗方法

誘導發(fā)情方法：對照組試驗牛的誘導發(fā)情采用CIDR+生理鹽水+PG法，試驗組試驗牛采用CIDR+FSH+PG法。具體操作方法：發(fā)情當天除外，在母牛發(fā)情周期的任一天進行CIDR陰道栓埋置，以埋置當天按0 d計，于第5、6、7 d對試驗牛每頭按3.5 mg劑量的FSH用遞減法，一天兩次肌肉注射給藥，對照組用與試驗組等體積的生理鹽水一天兩次肌肉注射。所有牛只在第7 d的最后一針FSH或生理鹽水完成后，進行撤栓和肌肉注射0.4 mg PG。在對牛只進行肌肉注射給藥時盡量用小號長針頭，在拔出針頭的同時用干燥無菌棉對針眼處緊按5 sec以上，防止藥物從針眼溢出。

發(fā)情觀察和人工輸精：撤栓12 h后對所有試驗牛進行發(fā)情觀察，每4 h進行1次，每次不少于1 h，認真記錄牛只發(fā)情表現(xiàn)。以牛只出現(xiàn)穩(wěn)定站立接受爬胯或在陰道內(nèi)流出大量清亮透明粘液(俗稱“吊線”)的時間為發(fā)情時間。對于在撤栓后72 h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情的牛只，分別在發(fā)情后12 h和24 h，進行2次人工輸精。對于未見到發(fā)情的牛只在撤栓后72 h和84 h，進行2次人工輸精。

妊娠檢查：人工輸精后40 d左右，用直腸檢查結合B超儀對試驗牛進行妊娠檢查，判定牛群的妊娠情況。

體況評分方法：按照英國5分制的評分標準[1]執(zhí)行。

1.4 數(shù)據(jù)及處理

誘導發(fā)情效果主要根據(jù)有效同期發(fā)情率和妊娠率兩個指標進行判定，數(shù)據(jù)運用SPSS 13.0軟件對差異顯著性進行分析。有效同期發(fā)情率是在撤栓后72h內(nèi)的發(fā)情牛數(shù)占試驗牛數(shù)的百分比，妊娠率為妊娠母牛數(shù)占試驗牛數(shù)的百分比。

2 結果與分析

2.1 試驗牛選擇及分組結果

影響母牛誘導發(fā)情效果的因素較為復雜。在本試驗中，為盡量減少母畜年齡、體況和產(chǎn)后時間對本試驗結果的影響，在云南省草地動物科學研究院舍飼母牛群內(nèi)，根據(jù)母牛的檔案和產(chǎn)犢記錄，共選出37頭帶犢母牛進行試驗，對試驗牛的條件進行了一定的限制，要求供試牛只年齡在5～6歲，產(chǎn)后時間40～60 d，體況在2.5～4.0分。為此，選擇了帶犢母牛試驗組20頭，對照組17頭。試驗牛選擇的具體情況見表1。

表1 試驗牛情況

2.2 誘導發(fā)情的處理效果

對照組17頭牛中，13頭觀察到靜止站立接受爬跨，3頭觀察到爬跨發(fā)情牛但不接受其它牛的爬跨，在牛只靜臥休息時見陰門流出少量粘液，1頭沒有觀察到任何發(fā)情表現(xiàn)。試驗組20頭牛中，18頭出現(xiàn)靜止站立接受爬胯，1頭未見到發(fā)情表現(xiàn)，1頭見有粘液。由此可見，試驗組的發(fā)情率和妊娠率均明顯優(yōu)于對照組(表2)。

表2 FSH對云嶺牛的誘導發(fā)情效果

注：同列上肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，未標字母表示差異不顯著(P>0.05)；以下同。

通過妊娠檢查，對照組和試驗組中未見明顯發(fā)情表現(xiàn)的各有1頭牛妊娠，這一結果說明，在誘導發(fā)情過程中牛群中會存在發(fā)情表現(xiàn)不明顯，但仍會出現(xiàn)排卵情況的牛只。所以，對未見發(fā)情表現(xiàn)牛只進行輸精(配種)，在一定程度上能幫助提高誘導發(fā)情的妊娠率。在實際生產(chǎn)上也是值得的，畢竟與犢牛價值相比，多浪費點凍精是可以忽略不計的，同時還能降低犢牛生產(chǎn)成本，提高母牛繁殖力。

2.3 兩種處理方法的同期發(fā)情效果比較

對照組的13頭發(fā)情牛中，6頭是在撤栓后的24～48 h內(nèi)發(fā)情，7頭在48～72 h發(fā)情，有效同期率為76.5%。FSH處理組發(fā)情的18頭牛中，1頭在撤栓后的12～24 h內(nèi)發(fā)情，12頭在24～48 h內(nèi)發(fā)情，5頭是在48～72 h發(fā)情。試驗表明，試驗組的同期發(fā)情效果明顯優(yōu)于對照組，試驗組牛群發(fā)情時間更集中，且較對照組提前19 h(P<0.05)。

表3 不同時間段云嶺牛的發(fā)情情況

2.4 誘導發(fā)情牛只排卵效果

在結束人工輸精后的40 d左右，通過直腸觸摸卵巢、結合B超儀檢查方法對妊娠母牛卵巢上的黃體分布情況進行檢查，根據(jù)功能性黃體存在位置判斷每頭母牛左右卵巢的排卵情況，結果表明，對照組10頭妊娠母牛中，4頭在左側卵巢排卵，6頭在右側排卵，無兩側排雙卵的情況。試驗組妊娠母牛中，11頭出現(xiàn)排1個卵，其中5頭是左側卵巢排卵，6頭是右側卵巢排卵，有4頭出現(xiàn)排雙卵和1頭出現(xiàn)排3卵的情況。僅從排單卵情況看，右側卵巢排卵的機率要高于左側卵巢，但兩側并沒有顯著差異(P>0.05)。

3 討論

3.1 帶犢母牛乏情的原因

母牛產(chǎn)后乏情期的長短直接影響母牛的繁殖率及養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟效益[2]。引起產(chǎn)后母牛乏情的原因復雜，其中哺乳是一個最重要因素。在產(chǎn)后早期，由于垂體前葉的LH貯存耗竭，導致LH脈沖性釋放的降低，雖與哺乳無關[3]，但隨LH貯存量的恢復，哺乳對LH的脈沖性釋放可產(chǎn)生抑制作用。哺乳行為對乳頭的刺激使乳頭的感受器興奮，沖動信號通過傳入神經(jīng)傳遞到下丘腦，傳入神經(jīng)元末梢分泌神經(jīng)遞質，使下丘腦神經(jīng)元對雌激素的負反饋作用的敏感性增加，從而降低脈沖發(fā)生器的功能，GnRH分泌受抑制，使FSH、LH處于低水平，卵泡發(fā)育受阻，造成母牛乏情[4]。

3.2 FSH功能

卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)是由動物垂體前葉嗜堿性細胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，它能促進顆粒細胞增生，刺激類固醇生成，調(diào)節(jié)配子細胞的發(fā)育和成熟，是下丘腦-垂體-性腺軸中的主要激素之一[12]。FSH在雌性動物可促進子宮內(nèi)膜生長、排卵、刺激多卵泡發(fā)育。FSH還可直接作用于卵巢，刺激卵巢生長，增加卵巢重量。FSH對雄性動物可刺激精子的發(fā)生，能刺激曲細精管上皮和次級精母細胞的發(fā)育，在LH和雄激素的協(xié)同下使精子發(fā)育成熟。同時，F(xiàn)SH還能促進其它糖蛋白激素的合成，并可反饋調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸，調(diào)節(jié)性腺激素的合成和分泌，維持動物正常的繁殖性能；成為在動物繁殖，特別是在胚胎移植和超數(shù)排卵中應用較為廣泛的外源生殖激素之一，有效提高動物繁殖效率。在采用活體采卵進行體外胚胎生產(chǎn)中，用外源生殖激素FSH對供體牛處理，可獲得較高的卵泡數(shù)和胚胎數(shù)，效果優(yōu)于PMSG[12]。在超數(shù)排卵中，郭志勤用FSH對553頭供體牛進行處理生產(chǎn)體內(nèi)胚胎，獲得頭均生產(chǎn)可用胚胎6.15枚的滿意效果[13]。

3.3 CIDR+PG誘導發(fā)情的效果

CIDR+PG法的原理是利用埋置CIDR內(nèi)持續(xù)性釋放黃體酮(P4)，有效促進母牛卵巢上的小卵泡快速發(fā)育，同時抑制大卵泡成熟，使處理牛的卵巢保持在相對一致的生理期。撤出CIDR后使血液中的外源P4水平迅速降低，同時肌注的外源PG使功能性黃體快速溶解，進一步降低血液中內(nèi)源P4的釋放，卵泡成熟的抑制因子作用減弱，卵泡快速進入成熟排卵期，從而實現(xiàn)處理牛在短時間內(nèi)集中發(fā)情。CIDR和律胎素(PGF2α類似物)聯(lián)合應用對患有卵巢靜止和卵巢囊腫的奶牛有較好的療效，能獲得50%和60%受孕率[4]。王昆等利用該方法對胚胎移植的受體黃牛進行誘導發(fā)情，發(fā)情時間集中在CIDR取出后的40～50 h，與2次PG法[5]相比較，發(fā)情時間更集中，同期發(fā)情率為76.7%，黃體合格率為76.1%，受體移植的妊娠率為45.7%[6]。該方法對不同地區(qū)、不同品種的母牛誘導發(fā)情效果確實[7-11]。不同品種、不同季節(jié)、不同藥品、不同處理時間和母牛體況的差異是造成上述誘導發(fā)情效果差異的主要原因[12]。

3.4 FSH對泌乳母牛誘導發(fā)情的效果

在本試驗對供試動物的品種、年齡、體況等方面進行了嚴格篩選，均采用同一批次的材料，由專人負責操作，基本保持試驗條件的一致性，減少因材料、方法、應激等因素對試驗結果造成的影響。雖然對試驗牛的條件進行了嚴格限制，牛只數(shù)量偏少，但試驗結果足以反映出FSH對帶犢母牛進行誘導發(fā)情中的作用和影響。對照組的同期發(fā)情率和妊娠率分別為76.5%和58.8%，略低于其它科研工作者的試驗結果，但無明顯差異[7-11]。在試驗中所選用的牛只是產(chǎn)后40～60 d內(nèi)帶犢的云嶺母牛，受帶犢哺乳的影響，多數(shù)母牛的卵巢處于靜止狀態(tài)，是造成誘導發(fā)情效果差的主要原因[12,13]；而試驗組對母牛處理過程中使用的外源激素FSH激活了試驗牛卵巢的正常機能，使誘導發(fā)情效果顯著高于對照組，也還增加了母牛懷雙胎(多胎)的幾率，在很大程度上能提高母牛繁殖力[14]。采用PVP包埋FSH能有效減少因多次驅趕牛群和多次注射引起的應激，提高超排和誘導發(fā)情效果[15]，有待今后試驗進行驗證。

4 結論

利用FSH刺激靜止卵巢恢復正常機能，促進卵泡發(fā)育的作用，能有效提高CIDR+PG法的誘導發(fā)情效果。

[1] 周貴,李淑琴,張紹清. 應用肉牛體況評分方法研究繁殖母牛的生產(chǎn)性能[J].中國草食動物, 1999, 1(4): 45-47.

[2] 汪明生,梁光偉,梁媛媛,等. 外源生殖激素處理供體奶?；铙w采卵生產(chǎn)胚胎的影響.廣西農(nóng)業(yè)生物科學, 2005, 24(4): 295-298.

[3] 郭志勤,王安江,高康軍. 利用CIDR處理供體牛的超數(shù)排卵效果[J].草食家畜, 2001(增刊): 105-106.

[4] 呂俊,傅小平,范萬平. CIDR和律胎素在奶牛繁殖中的聯(lián)合應用試驗[J].乳業(yè)科學與技術, 2005, 27(5): 235-236.

[5] 韓春梅,文智舉,曹振華,等. 氯前列烯醇對黃牛同期發(fā)情控制試驗[J].塔里木大學學報, 2007, 19(1): 10-12.

[6] 王昆,王建鋒,李魁英,等. 不同處理方法對受體牛同期發(fā)情效果的比較研究[J].河北農(nóng)業(yè)科學, 2008, 12(5): 77-78.

[7] 丑武江,郭雄全,席繼峰. 應用CIDR+PG誘導黃牛同期發(fā)情的試驗研究[J].草食家畜, 2009,(2): 31-33.

[8] 魯立剛,賈銀海,金深遜,等. 不同同期發(fā)情處理方法對威寧黃牛胚胎移植效果的影響研究[J].中國牛業(yè)科學, 2011, 37(6): 32-34.

[9] 李靜,納進程,道爾吉,等. 不同激素處理新疆褐牛同期發(fā)情的試驗[J].草食家畜, 2009,(4): 41-42.

[10] 陳龍,王元生,畢江華,等. CUE-MATE誘導西門塔爾雜交牛同期發(fā)情效果[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學, 2014, 42(7): 213-215.

[11] 郝家宏,張克勤,張谷,等. 母牛同期發(fā)情試驗及受胎產(chǎn)犢效果觀察[J].中國牛業(yè)科學, 2011, 37(1): 38-39.

[12] 張繼才,和占星,詹靖璽,等. 產(chǎn)后時間間隔對云嶺母牛誘導發(fā)情效果的影響[J].中國牛業(yè)科學, 2016, 42(1): 14-17.

[13] 李靜,王海軍,哈克木·扎克爾. CUE-MATE誘導新疆褐牛同期發(fā)情試驗[J].中國牛業(yè)科學, 2009, 35(6): 25-27.

[14] 王正臣,辛以良,姜寧,等. 低劑量促性腺激素處理誘導黃牛一胎雙犢的研究[J].吉林畜牧獸醫(yī), 2004,(11): 5-6, 9.

[15] 汪明生,韋英明,梁興偉,等. 聚乙烯吡咯酮與促卵泡素對奶?；铙w采卵效率的影響[J].中國獸醫(yī)學報, 2007, 27(1): 134-136,141.