王金成，井明博，石國璽，王國鋒，李東波，毛 寧，賈海燕，卜 婷

(1.甘肅省高校隴東生物資源保護(hù)與利用省級重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅慶陽745000；2.隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，甘肅慶陽745000；3.中國科學(xué)院西北高原生物研究所，青海西寧810008；4.陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西西安710062)

隴東黃土高原地區(qū)石油污染土壤對不同生物修復(fù)方式的響應(yīng)

王金成1,2，井明博1,2，石國璽3，王國鋒4，李東波1,2，毛 寧1,2，賈海燕1,2，卜 婷1,2

(1.甘肅省高校隴東生物資源保護(hù)與利用省級重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅慶陽745000；2.隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，甘肅慶陽745000；3.中國科學(xué)院西北高原生物研究所，青海西寧810008；4.陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西西安710062)

目的：為了分析比較不同生物修復(fù)方式對隴東黃土高原地區(qū)石油污染土壤的修復(fù)效果。方法：分別采用土著微生物降解功能菌群修復(fù)(MR)、隴東適生植物“金盞菊”修復(fù)(PR)及兩者的聯(lián)合修復(fù)(M-PR)3種修復(fù)方式開展為期121天的原位修復(fù)實(shí)驗(yàn)，測定了土壤總石油烴含量(TPHs)、土壤脫氫酶活性及其土壤細(xì)菌群落遺傳多樣性等環(huán)境指標(biāo)。結(jié)果：經(jīng)121天原位修復(fù)實(shí)驗(yàn)M-PR組TPHs降解率(67.29±3.67%)及脫氫酶活性(40.33±1.24μg·g-1·24h-1)均為最高。PCR-DGGE分析結(jié)果顯示：M-PR組多樣性和豐富度指數(shù)均高于其他處理。NMDS排序結(jié)果顯示，土壤TPHs含量高低是決定樣地分異最大的環(huán)境因子，其次為修復(fù)方式、土壤脫氫酶活性和豐富度指數(shù)。結(jié)論：上述結(jié)果說明如何有效降低土壤TPHs含量以及有效增加聯(lián)合修復(fù)土壤根際微生物數(shù)量及多樣性這是隴東黃土高原地區(qū)開展石油污染土壤修復(fù)的決定性環(huán)境因素。

石油污染土壤；生物修復(fù)方式；石油烴降解率；脫氫酶；微生物多樣性

石油污染土壤的微生物修復(fù)技術(shù)已成為當(dāng)今環(huán)保領(lǐng)域一種經(jīng)濟(jì)有效的污染治理技術(shù)，具有環(huán)境影響小，無二次污染，最大限度降低污染物濃度等優(yōu)點(diǎn)[1]280；通過提供營養(yǎng)元素或改善微生物生長環(huán)境條件來刺激土著微生物的生長從而加速石油烴的降解[2]。而植物修復(fù)則利用植物富集持久性有機(jī)污染物，進(jìn)而通過植物代謝對其轉(zhuǎn)化和礦化，同時植物根際與土壤微生的共代謝可加速土壤中有機(jī)污染物降解速率[3]。

雖然生物修復(fù)相比物理化學(xué)修復(fù)具有成本低、不破壞土壤結(jié)構(gòu)、無二次污染，可原位修復(fù)等優(yōu)點(diǎn)[4]，但微生物、植物發(fā)揮活性的條件相對苛刻[5,6]，易受土壤理化性質(zhì)等環(huán)境因子的影響[7,8]。隴東黃土高原地區(qū)屬生態(tài)脆弱區(qū)，氣候干旱少雨，寒暑溫差大，土壤瘠薄，植被分布獨(dú)特[3]2971。因此選擇修復(fù)植物應(yīng)堅(jiān)持“適生”的原則，即利用鄉(xiāng)土物種應(yīng)用于退化生態(tài)系統(tǒng)的修復(fù)，并輔以當(dāng)?shù)赝林徒到夤δ芫簛硐魅跬寥郎鷳B(tài)毒性。

為此，本研究以甘肅省慶陽市馬嶺鎮(zhèn)隴東油區(qū)污泥處理站油污土壤為研究對象，分別采用土著微生物降解功能菌群修復(fù)(MR)、當(dāng)?shù)剡m生植物“金盞菊”修復(fù)(PR)及兩者的聯(lián)合修復(fù)(M-P R)，進(jìn)行為期121天的原位修復(fù)實(shí)驗(yàn)，監(jiān)測了3種修復(fù)方式下土壤總石油烴含量(TPHs)、土壤脫氫酶活性及3種土壤細(xì)菌群落遺傳多樣性等環(huán)境指標(biāo)；基于Bray-Curtis相異指數(shù)將所測定的5項(xiàng)土壤環(huán)境因子及3種不同處理方式擬合到12個油污樣地的非度量多維尺度(NMDS)排序圖上，旨在揭示隴東黃土高原地區(qū)石油污染土壤對不同生物修復(fù)方式的響應(yīng)，對石油污染土壤的綜合治理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和背景資料，亦為隴東黃土高原特定區(qū)域下開展石油污染土壤生物修復(fù)提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試土壤為甘肅省慶陽市馬嶺鎮(zhèn)隴東油區(qū)污泥處理站油污土壤，經(jīng)實(shí)驗(yàn)測得供試石油污染土壤的初始含油量為3.19%(即31947.86±383.37mg·kg-1)，遠(yuǎn)高于國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)臨界值500mg·kg-1，風(fēng)干后過10目篩，土壤理化性質(zhì)背景值見表1。

表1 供試土壤理化性質(zhì)背景值

供試植物為金盞菊，品種為德國邦邦，源自隴東學(xué)院生農(nóng)科技園。供試菌劑源自甘肅省高校隴東生物資源保護(hù)與利用省級重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室通過選擇性培養(yǎng)基和富集培養(yǎng)基[1]282自主篩選的石油降解菌。初步鑒定為:假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽胞桿菌屬(Bacillus)、微球菌屬(Micrococcus)、線菌屬(Actinomayces)、紅球菌屬(Rhodococcus)和鹽單胞菌屬(Natronococcus)。

1.2 實(shí)驗(yàn)場地設(shè)置及生物修復(fù)實(shí)驗(yàn)

原位修復(fù)實(shí)驗(yàn)位于甘肅省慶陽市慶城縣馬嶺鎮(zhèn)隴東油區(qū)污泥處理場內(nèi)，實(shí)驗(yàn)場地分1組空白區(qū)和3組試驗(yàn)區(qū)，每區(qū)成正方形(1m×1m)，空白區(qū)未做任何處理，實(shí)驗(yàn)區(qū)為3種不同生物修復(fù)方式實(shí)驗(yàn)區(qū)(見表2)。

表2 生物修復(fù)實(shí)驗(yàn)不同處理方式

根據(jù)王金成等(2015)的方法[1]283，通過計(jì)算將擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液按3%(3%的計(jì)算方法：2個實(shí)驗(yàn)區(qū)×100cm×100cm×15cm×1.768g·cm-3=530400g=530.4kg，530.4kg×3%=15.91kg)，約16L菌液(每組設(shè)3個平行實(shí)驗(yàn)，共計(jì)48L菌液)分為6份噴撒接入已翻耕均勻的2號及4號試驗(yàn)處理區(qū)。3號試驗(yàn)區(qū)為金盞菊單獨(dú)修復(fù)組，束沿內(nèi)種植金盞菊幼苗100株，自然降雨提供水分。實(shí)驗(yàn)開始于2014年5月14日，結(jié)束于2014年9月11日，實(shí)驗(yàn)周期為121天，原位修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用四分法取樣，除利用鮮土提取土壤微生物細(xì)菌基因組總DNA外，其余土樣在室溫背陰處風(fēng)干，過2mm篩備用。

1.3 土壤脫氫酶活性及石油烴降解率測定

脫氫酶采用唐景春的分析方法[9]；石油烴降解率的測定采用重量法，其中土壤石油烴含量采用超聲-索氏萃取-重量法測定[10]

1.4 土壤樣品總DNA提取、PCR擴(kuò)增和變性凝膠梯度電泳(DGGE)分析

采用土壤細(xì)菌基因組試劑盒(E.Z.N.A.TMSoil DNA kit,OMEGA Company)，提取土樣細(xì)菌基因組總DNA，于-20℃保存。將提取的土樣基因組總DNA作為PCR的模板，PCR擴(kuò)增過程中所用的引物見表3。

表3 細(xì)菌16S rDNA及其V3區(qū)擴(kuò)增的引物

注：1.結(jié)合位點(diǎn)是相對于大腸桿菌；2.在DGGE分析中，引物5′ 端加入一個富含GC序列的GC夾子:CGC CCG CCG CGC GCG GCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG G

采用巢式PCR擴(kuò)增目的片段。第一輪擴(kuò)增反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性4min，94℃變性45s，61℃退火45s，72℃延伸1min，30個循環(huán)；72℃終延伸10min。反應(yīng)體系為20μL：2μL 10×PCR Buffer；1μL MgCl2(25mmol·L-1)；0.8μL dNTP(2.5mmol·L-1)；0.4μL PrimerⅠ(BS-for，10μmol·L-1)；0.4μL PrimerⅡ(BS-rev，10μmol·L-1)；1μL Taq酶(5u·μL-1)；1μL模板；補(bǔ)足滅菌雙蒸水至20μL。第二輪擴(kuò)增以第一輪PCR擴(kuò)增產(chǎn)物16SrDNA為模板，采用Touchdown PCR策略擴(kuò)增16S rDNA V3區(qū)，反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性4min，94℃變性45s，62℃退火45s，72℃延伸1min，之后每一循環(huán)降0.5℃，20個循環(huán)；94℃，45s，56℃，45s，72℃，1min，10個循環(huán)；72℃終延伸10min。反應(yīng)體系與第一輪PCR相同。

采用DcodeTM基因突變檢測系統(tǒng)(Bio-Rad)對16S rDNA V3區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DGGE分析。電泳所用聚丙烯酰胺凝膠濃度為10%，變性梯度為40%～60%。電泳條件為60℃恒溫下，70V電泳15h，銀染后凝膠成像分析結(jié)果。

1.5 數(shù)據(jù)處理與計(jì)算

利用SPSS 16.0和R2.15.2(http://www.r-project.org/)對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，用Origin8.1和R2.15.2作圖。為了闡述石油污染樣地與土壤環(huán)境因子間的關(guān)系，基于Bray-Curtis相異指數(shù)，使用R語言“vegan”程序包中“envfit”程序，將所測定的5項(xiàng)土壤環(huán)境因子及3種不同處理方式擬合到12個油污樣地的非度量多維尺度(NMDS)排序圖上，為防止樣點(diǎn)在各象限的分布上發(fā)生移位，在擬合時對NMDS的排序軸進(jìn)行了旋轉(zhuǎn)，以確保NMDS第一軸能夠最大程度地代表群落相異性的變異。12個石油污染樣地矩陣及各影響因子數(shù)據(jù)集分別用Bray-Curtis與Euclidean距離表示[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 原位修復(fù)過程中不同處理方式污油土樣石油烴降解率變化

圖1 原位修復(fù)過程中不同處理方式污油土樣石油烴降解率(a)及脫氫酶活性(b)變化(*代表各處理間顯著水平(Duncan，α=0.05)，**表示P<0.01，*表示P<0.05，下同)

圖1(a)為原位修復(fù)過程中不同生物修復(fù)處理方式下污油土樣石油烴降解率變化情況。各處理組油污土樣石油烴降解率差異達(dá)極顯著水平(F=184.081>F0.01，P<0.01)。在121天修復(fù)周期中3種處理組累計(jì)降解率分別達(dá)39.37±2.37%、43.16±2.94%和67.29±3.67%；多重比較結(jié)果顯示(Duncan，α=0.05)，相較于對照組，3種處理方式均明顯提高了石油烴降解率(P<0.05)，M-P R處理組石油烴降解率明顯高于其他各組(P<0.05)，且MR和PR處理組間差異亦達(dá)顯著水平(P<0.05)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1(b)所示，修復(fù)前油污土樣中脫氫酶活性僅為17.38±0.61μg·g-1·24h-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于修復(fù)后土樣。自然降解情況下，土壤中脫氫酶活性為18.41±0.76μg·g-1·24h-1，而采用微生物菌劑修復(fù)組(MR)的土壤中酶活性明顯提高，達(dá)26.19±1.06μg·g-1·24h-1，金盞菊植物修復(fù)組(PR)的土壤中酶活性達(dá)34.31±1.47μg·g-1·24h-1。F檢驗(yàn)結(jié)果顯示，各處理組油污土樣脫氫酶活性差異達(dá)極顯著水平(F=419.295>F0.01，P<0.01)。多重比較結(jié)果顯示(Duncan，α=0.05)，經(jīng)121天原位修復(fù)，聯(lián)合修復(fù)組(M-P R)土壤中酶活性達(dá)40.33±1.24μg·g-1·24h-1，明顯高于其他各組(P<0.05)，且MR和PR處理組間差異亦達(dá)顯著水平(P<0.05)。土壤脫氫酶為石油烴降解過程中重要的參與酶，它能使被氧化有機(jī)物的氫原子活化并傳遞其特定的受氫體，促使石油污染物徹底氧化[3]2974。前人研究表明微生物總數(shù)與土壤脫氫酶活性成正相關(guān)關(guān)系，土壤脫氫酶的活性可以反映處理體系內(nèi)活性微生物量及其對有機(jī)物的降解效果和營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化速率[12]。本研究中，2號及4號實(shí)驗(yàn)區(qū)由于降解菌劑的投加使得區(qū)域微環(huán)境微生物總數(shù)有所增加，有效改變了土壤微生物群落結(jié)構(gòu)及組成。而3號試驗(yàn)區(qū)種植金盞菊可有效改善土著石油降解菌與植物根系分泌物的共代謝[3]2974，擴(kuò)大了土壤微環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化速率，進(jìn)而引起了土壤脫氫酶活性增加。上述結(jié)果說明在隴東地區(qū)將鄉(xiāng)土物種應(yīng)用于退化生態(tài)系統(tǒng)修復(fù)，即選擇當(dāng)?shù)剡m生植物及土著石油降解功能菌群來削弱石油烴污染土壤為可行之舉。

2.2 原位修復(fù)過程中不同處理方式污油土樣細(xì)菌群落遺傳的多樣性變化

本研究采用變性凝膠梯度電泳(PCR-DGGE)技術(shù)分析土壤細(xì)菌群落遺傳的多樣性，利用3種多樣性指標(biāo)進(jìn)行土壤細(xì)菌群落遺傳多樣性分析，即Patrick豐富度指數(shù)(S)：S=物種數(shù)，即條帶數(shù)；Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)：H=-ΣPilnPi，Pi代表土壤樣品中第i個條帶的吸光度占所有條帶吸光度總和的比例；Pielou均勻度指數(shù)(J)：J=H/Hmax，Hmax代表最大多樣性值(Hmax=lnS)。圖2為原位修復(fù)過程中不同生物修復(fù)處理方式污油土樣細(xì)菌群落遺傳多樣性PCR-DGGE指紋圖譜及其圖譜聚類結(jié)果。圖譜上條帶信息反映了土壤細(xì)菌群落多樣性變化情況，其中電泳條帶的多少反映出土壤中細(xì)菌群落多樣性；條帶的粗細(xì)則反映了種群密度的差異[3]2975。

圖2 不同處理方式油污土壤微生物群落遺傳多樣性PCR-DGGE指紋圖譜及其圖譜聚類

由圖2可見隨著原位修復(fù)的進(jìn)行，兩組處理與CK相比，DGGE圖譜在條帶數(shù)目與亮度上均存在差異。圖2中CK1～3為隴東地區(qū)油污土壤中固有的微生物類群，而這些微生物類群可能就是一些該區(qū)土著石油烴降解菌。隨著各處理修復(fù)時間延長，土壤樣品出現(xiàn)了一些起初沒有的條帶，如條帶a～l，可能為菌劑的加入和金盞菊根際富集效應(yīng)對固有土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和組成的影響所致。其中修復(fù)后期出現(xiàn)了條帶1、2和3，為之前其他處理均未出現(xiàn)的微生物類型。如圖2所示，隨著原位修復(fù)時間的增長，DGGE條帶數(shù)相應(yīng)增加，條帶亮度有不同程度的提高，說明3種處理均不同程度改善了土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)和組成，土壤中微生物多樣性變得更加豐富，分布愈加均勻。

圖3反映了原位修復(fù)過程中不同生物修復(fù)處理方式下污油土樣細(xì)菌群落遺傳多樣性指數(shù)變化情況。F檢驗(yàn)結(jié)果顯示，3種多樣性指數(shù)在各處理間差異均達(dá)極顯著水平(FH=23.968>F0.01，F(xiàn)J=13.811>F0.01，F(xiàn)S=29.632>F0.01，P<0.01)，上述結(jié)果體現(xiàn)了不同生物修復(fù)處理方式對油污土壤細(xì)菌群落多樣性的影響。多重比較(Duncan，α=0.05)結(jié)果顯示，相較于對照組，不同生物修復(fù)處理方式均明顯提高了油污土樣Shannon-Wiener多樣性指數(shù)、Pielou均勻度指數(shù)和Patrick豐富度指數(shù)(S)(P<0.05)，且M-P R處理組Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)明顯高于其他各組(HM-PR=3.61±0.07)(P<0.05)，且MR(HMR=3.23±0.72)和PR(HPR=3.41±0.49)處理組間差異亦達(dá)顯著水平(P<0.05)。就Pielou均勻度指數(shù)(J)而言，除MR(JMR=0.98±0.02)處理組外(P<0.05)，其余處理組(JPR=0.99±0.02，JM-PR=0.99±0.01，P<0.01)均極顯著提升Pielou均勻度指數(shù)。Patrick豐富度指數(shù)(S)方面呈現(xiàn)出與Shannon-Wiener多樣性指數(shù)相似的變化規(guī)律。上述結(jié)果說明3種生物修復(fù)方式可明顯增加油污土壤區(qū)域微環(huán)境的土壤細(xì)菌數(shù)量和多樣性，隨原位修復(fù)時間的延長各處理土壤細(xì)菌分布愈加均勻，而微生物植物聯(lián)合修復(fù)優(yōu)勢明顯，因此在隴東黃土高原地區(qū)開展石油污染土壤的生態(tài)修復(fù)應(yīng)采用聯(lián)合修復(fù)方式。

圖3 原位修復(fù)過程中不同處理方式油污土樣微生物群落遺傳多樣性指數(shù)變化

2.3 原位修復(fù)過程中不同處理方式及環(huán)境因子的非度量多維尺度(NMDS)排序

為了闡述不同處理方式下油污樣地與土壤環(huán)境因子間的關(guān)系，以及環(huán)境因子在驅(qū)動不同樣地分異過程中的相對重要性，基于Bray-Curtis相異指數(shù)，將所測定的5項(xiàng)土壤環(huán)境因子及3種不同處理方式擬合到12個油污樣地的非度量多維尺度(NMDS)排序圖上，脅強(qiáng)系數(shù)Stress=0.1154，說明該二維NMDS分析具有一定的擬合效果，可解釋樣地環(huán)境因子信息量的88.46%。

圖4 不同污染樣地的非度量多維尺度(NMDS)排序及其環(huán)境因子與各處理方式間關(guān)系(排序圖上顯示了與各樣地分異有關(guān)的土壤環(huán)境因子，橢圓代表平行樣品間的標(biāo)準(zhǔn)差；*代表與各樣地分異相關(guān)的土壤環(huán)境因子顯著水平：***表示P<0.001，**表示P<0.01)

3 結(jié)論

(1)F檢驗(yàn)結(jié)果顯示，相較于對照組CK，經(jīng)121天原位修復(fù)3種處理方式均明顯提高了石油烴降解率，分別達(dá)39.37±2.37%、43.16±2.94%和67.29±3.67%；M-P R處理組石油烴降解率明顯高于其他各組(P<0.05)，且MR和PR處理組間的差異亦達(dá)顯著水平(P<0.05)。自然降解情況下土壤中脫氫酶活性為18.41±0.76μg·g-1·24h-1，而MR和PR修復(fù)組的土壤中酶活性分別為26.19±1.06和34.31±1.47μg·g-1·24h-1，M-PR修復(fù)組土壤中酶活性達(dá)40.33±1.24μg·g-1·24h-1。上述結(jié)果說明在隴東地區(qū)利用鄉(xiāng)土物種應(yīng)用于退化生態(tài)系統(tǒng)修復(fù)，即選擇當(dāng)?shù)剡m生植物及土著石油降解功能菌群進(jìn)行原位生物修復(fù)可明顯降低土壤TPHs含量，增加土壤脫氫酶活性。

(2)基于PCR-DGGE技術(shù)分析結(jié)果顯示，相較于對照組不同生物修復(fù)處理方式均明顯提高了油污土樣Shannon-Wiener多樣性指數(shù)、Pielou均勻度指數(shù)和Patrick豐富度指數(shù)(S)(P<0.05)，且Patrick豐富度指數(shù)(S)方面呈現(xiàn)出與Shannon-Wiener多樣性指數(shù)相似的變化規(guī)律，即M-PR處理組Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)明顯高于其他各組(HM-PR=3.61±0.07，SM-PR=38.34±1.04)(P<0.05)。就Pielou均勻度指數(shù)(J)而言，除MR(JMR=0.98±0.02)處理組外，其余處理組(JPR=0.99±0.02，JM-PR=0.99±0.01，P<0.01)均極顯著提升了Pielou均勻度指數(shù)。上述結(jié)果說明3種生物修復(fù)方式可明顯增加油污土壤區(qū)域微環(huán)境的土壤細(xì)菌數(shù)量和多樣性，隨原位修復(fù)時間的延長各處理土壤細(xì)菌分布愈加均勻，而微生物植物聯(lián)合修復(fù)優(yōu)勢明顯。

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【責(zé)任編輯 趙建萍】

Responses of Different Bioremediation Patterns on Crude-oil Contaminated Soil in Eastern Gansu Province

WANG Jin-cheng1,2, JING Ming-bo1,2, SHI Guo-xi3, WANG Guo-feng4, LI Dong-bo1,2, MAO ning1,2, JIA Hai-yan1,2, BU Ting1,2

(1.UniversityProvincialKeyLaboratoryforProtectionandUtilizationofLongdongBio-resourcesinGansuProvince,Qingyang, 745000,Gansu; 2.CollegeofLifeScienceandTechnology,LongdongUniversity,Qingyang, 745000,Gansu; 3.ChineseAcademyofSciences,NorthwestInstituteofPlateauBiology,Xining, 810008,Qinghai; 4.CollegeofLifeScience,ShaanxiNormalUniversity,Xi’an, 710062,Shaanxi)

Objective：To contrast the remediation effect of different bioremediation patterns on crude-oil polluted soil in eastern Gansu Province.Methods：Different bioremediation patterns including local microbial functional agents (MR), phytoremediation (PR) and combined remediation (M-PR) have been selected in situ bioremediation of on crude-oil contaminated soil for 4 months. Total petroleum hydrocarbons (TPHs) and soil dehydrogenase activity are investigated using conventional methods, and the genetic diversity of bacterial community is analyzed based on PCR-DGGE.Results：We found that a higher TPHs degradation rate (μM-P R=67.29±3.67%) and increased soil dehydrogenase activity (40.33 ± 1.24μg·g-1·24h-1) are detected in M-P R group. As for the genetic diversity of bacterial community, Patrick index and Shannon-Wiener index of M-PR group are significantly higher than that of other groups, and the increased Pielou index is only detected in group of PR and M-PR compared with the CK respectively. Moreover, Nonmetric nonmetric multidimensional scaling (NMDS) showed that crude-oil contaminated soil in Gansu province of the Loess Plateau are strongly affected by soil TPHs concentration (r2=0.9218), bioremediation pattern (r2=0.8607), and following-affected by Patrick index of soil bacterial communities (r2=0.7064).Conclusion：All of the results mentioned above are conducive to further understand the response of soil environmental factors on crude oil pollution, and offer background information for the remediation of crude oil-contaminated soil in eastern Gansu Province.

crude-oil contaminated soil; bioremediation pattern; TPHs degradation rate; soil dehydrogenase activity; the genetic diversity of bacterial community

1674-1730(2017)01-0067-06

2016-10-03

甘肅省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目《隴東黃土高原地區(qū)石油污染土壤原位修復(fù)技術(shù)研究與示范》(1204FKCM173)；甘肅省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目《隴東黃土高原石油污染土壤微生物群落動態(tài)分析及石油降解菌的篩選》(2014B-091)；甘肅省慶陽市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目《隴東黃土高原地區(qū)石油污染土壤原位修復(fù)研究》(GC2011-16)

王金成(1985—)，男，甘肅兩當(dāng)人，講師，碩士，主要從事環(huán)境微生物學(xué)及分子微生物生態(tài)學(xué)領(lǐng)域研究。

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