田紅紅+李朝嬋+韋唯

摘要：采用馬纓杜鵑純林下土壤、腐殖質(zhì)、枯落物這3種不同土層的浸提液澆灌馬纓杜鵑3年生幼苗，以清水處理為對(duì)照，測(cè)定馬纓杜鵑葉片酶活性、游離脯氨酸含量、丙二醛含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白質(zhì)含量、葉綠素含量等指標(biāo)，研究馬纓杜鵑幼苗對(duì)不同浸提液的生理響應(yīng)。結(jié)果表明，與清水澆灌相比，土壤浸提液澆灌處理的幼苗葉片SOD、CAT、POD活性有明顯升高；3種浸提液處理的植株，其葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量多低于清水處理，MDA含量多高于清水處理；枯落物層、土壤層浸提液澆灌的植株，其葉片可溶性蛋白質(zhì)含量呈先升高后降低再升高趨勢(shì)。

關(guān)鍵詞：馬纓杜鵑；土壤浸提液；生理指標(biāo)；林下土層

中圖分類(lèi)號(hào)： S685.210.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2017）01-0128-03

馬纓杜鵑（Rhododendron delavayi Franch.）為杜鵑花科杜鵑屬植物，是素有“杜鵑王國(guó)”美稱的國(guó)家級(jí)森林公園貴州百里杜鵑林區(qū)主要樹(shù)種之一。貴州分布的杜鵑花種類(lèi)有111種[1-2]，其中百里杜鵑林區(qū)有33種[1]。目前，百里杜鵑林區(qū)天然群落林下實(shí)生幼苗極少，高山杜鵑的天然更新成為林區(qū)可持續(xù)發(fā)展的障礙。周艷等研究凋落物對(duì)迷人杜鵑幼苗更新和種子萌發(fā)的影響發(fā)現(xiàn)，林下凋落物厚度和化感物質(zhì)對(duì)杜鵑幼苗更新產(chǎn)生影響[3]，而種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)往往受光照、營(yíng)養(yǎng)、水分、捕食等生態(tài)因子及同一群落物種間相互作用的影響。本試驗(yàn)在百里杜鵑實(shí)地調(diào)查的基礎(chǔ)上，對(duì)馬纓杜鵑樹(shù)種幼苗采用不同土層浸提液進(jìn)行處理，評(píng)價(jià)浸提液對(duì)馬纓杜鵑幼苗生長(zhǎng)的影響，以期為高山杜鵑群落的結(jié)構(gòu)和更新提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

生長(zhǎng)較為一致、粗壯的3年生馬纓杜鵑實(shí)生幼苗，葉革質(zhì)，長(zhǎng)圓狀披針形，長(zhǎng)5.0～7.0 cm，寬1.5～4.5 cm，邊緣反卷，葉表面深綠至淡綠色，背面有白色至灰色或淡褐色海綿狀毛被，中脈向背面凸出。分層采集百里杜鵑景區(qū)馬纓杜鵑純林下的土壤層、腐殖質(zhì)層、枯落物，用清水浸泡1周，所得液體即為處理液，以清水澆灌為對(duì)照。

1.2 處理方法

2015年6月，將馬纓杜鵑幼苗移植于長(zhǎng)方形塑料花盆內(nèi)，每盆5株；待生長(zhǎng)正常（7月1日），對(duì)幼苗進(jìn)行不同土層浸提液處理，每處理20株，重復(fù)3次；對(duì)浸提液處理過(guò)的植株進(jìn)行形態(tài)觀察，每隔15 d取1次不同處理的馬纓杜鵑葉片，測(cè)定其生理指標(biāo)。

1.3 測(cè)定方法

可溶性蛋白質(zhì)、游離脯氨酸含量分別采用考馬斯亮藍(lán)法、酸性茚三酮比色法[4]測(cè)定；葉綠素含量采用分光光度法[5-6]測(cè)定；過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性分別采用愈創(chuàng)木酚法、高錳酸鉀（KMnO4）滴定法、氮藍(lán)四唑法（NBT）測(cè)定；丙二醛（MDA）、可溶性糖含量分別采用硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)法、苯酚硫酸比色法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同浸提液持續(xù)澆灌對(duì)植株形態(tài)的影響

由表1可見(jiàn)，用不同浸提液持續(xù)30 d澆灌馬纓杜鵑幼苗，植株外部形態(tài)發(fā)生較大變化，其中對(duì)葉片的影響比較明顯；枯落物層水浸提液澆灌的植株葉片出現(xiàn)黃葉較多，植株生長(zhǎng)最不明顯；腐殖質(zhì)層、土壤層水浸提液澆灌的植株葉片形態(tài)沒(méi)有發(fā)生明顯的變化，只是在接近土壤處的部分植株出現(xiàn)不同程度的褐變；對(duì)照植株均生長(zhǎng)正常，葉色亮綠；持續(xù)澆灌 60 d，葉片出現(xiàn)不同程度的掉落，其中以枯落物層水浸提液澆灌的植株葉片掉落最為嚴(yán)重。

2.2 不同浸提液持續(xù)澆灌對(duì)植株葉綠素含量的影響

由圖1可見(jiàn)，不同處理液對(duì)馬纓杜鵑幼苗葉綠素含量的影響有不同，隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)，不同浸提液持續(xù)澆灌馬纓杜鵑幼苗其葉片的葉綠素含量呈先降低后升高再降低的趨勢(shì)；澆灌0～15 d時(shí)，枯落物、腐殖質(zhì)層處理的杜鵑幼苗葉綠素含量急劇下降，之后回升，二者葉綠素含量變化趨于穩(wěn)定，差異不大，幼苗有少數(shù)老葉輕度萎蔫，新葉較少，顏色為暗綠色；土壤浸提液澆灌30 d時(shí)，杜鵑幼苗葉綠素含量下降到最小值，為0.076 9 mg/g，葉片有明顯的變色癥狀，接近土壤處的葉片及莖褐變；對(duì)照處理的幼苗葉綠素含量整體高于其他浸提液處理。

2.3 不同浸提液持續(xù)澆灌對(duì)馬纓杜鵑葉片保護(hù)酶活性的影響

2.3.1 對(duì)SOD活性的影響 由圖2可見(jiàn)，不同溶液澆灌處理的馬纓杜鵑幼苗葉片，其SOD活性有明顯變化，呈不同趨勢(shì)的波浪形曲線，達(dá)到峰值的時(shí)間不同；土壤層浸提液澆灌持續(xù)30 d時(shí)，SOD含量達(dá)到最大值，為108.00 U/g；枯落物、腐殖質(zhì)層浸提液在澆灌持續(xù)45 d時(shí)，SOD含量各自達(dá)到最大值，分別為136.07、114.15 U/g；與對(duì)照組比較，不同浸提液處理幼苗時(shí)葉片中的活性氧不斷產(chǎn)生，SOD響應(yīng)迅速，枯落物層浸提液處理幼苗時(shí)SOD活性與對(duì)照有顯著差異，腐殖質(zhì)層、土壤層浸提液與對(duì)照差異不明顯。

2.3.2 對(duì)CAT活性的影響 由圖3可見(jiàn)，不同浸提液持續(xù)澆灌馬纓杜鵑幼苗，其葉片CAT活性有明顯變化，總體呈下降趨勢(shì)；與對(duì)照組相比，枯落物層浸提液處理的幼苗，其葉片CAT活性變化相對(duì)平緩；腐殖質(zhì)層浸提液處理的幼苗，其葉片CAT活性在澆灌15 d時(shí)達(dá)到最大值，為8.09 mg/（g·min），后一直呈下降趨勢(shì)；土壤層水浸提液處理的幼苗，其葉片CAT活性一直呈下降趨勢(shì)，0～15、30～45 d這2個(gè)階段出現(xiàn)急速下降，而15～30、45～60 d下降相對(duì)緩慢；與3種不同浸提液相比，對(duì)照組葉片CAT活性在澆灌45 d后出現(xiàn)緩慢上升，這說(shuō)明3種浸提液持續(xù)澆灌馬纓杜鵑幼苗可對(duì)其葉片CAT活性的產(chǎn)生起抑制作用。

2.3.3 對(duì)POD活性的影響 由圖4可見(jiàn)，對(duì)照和3種浸提液處理的馬纓杜鵑葉片，其POD活性總體呈先下降后緩慢升高的趨勢(shì)，其中對(duì)照的葉片POD活性始終同期高于其他處理；枯落物、土壤層浸提液持續(xù)澆灌30 d時(shí)，葉片POD活性達(dá)到最小值，分別為80.68、93.28 U/（g·min），45 d后趨于穩(wěn)定，此時(shí)大多數(shù)幼苗死亡，生長(zhǎng)緩慢；腐殖質(zhì)層浸提液處理的馬纓杜鵑幼苗，其葉片POD活性在澆灌45 d內(nèi)達(dá)到最小值，為87.02 U/（g·min）。

2.4 不同浸提液持續(xù)澆灌對(duì)馬纓杜鵑葉片可溶性糖和脯氨酸含量的影響

2.4.1 對(duì)可溶性糖含量的影響 可溶性糖是衡量植物體內(nèi)碳素營(yíng)養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)。由圖5可見(jiàn)，隨澆灌時(shí)間的延長(zhǎng)，馬纓杜鵑葉片可溶性糖含量呈波浪形變化；在澆灌45 d時(shí)，對(duì)照、枯落物層、腐殖質(zhì)層、土壤層的可溶性糖含量各自下降到最低點(diǎn)，分別為16.78%、11.85%、14.11%、17.24%；腐殖質(zhì)層浸提液處理的幼苗，對(duì)可溶性糖的響應(yīng)比其他2種浸提液更為迅速，這與腐殖質(zhì)層中含有大量的代謝物有關(guān)，植物凋落物處于腐爛時(shí)期，微生物頻繁活動(dòng)，有機(jī)物被分解成可以供給植物生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[7-8]；土壤層浸提液與對(duì)照處理的可溶性糖含量變化趨勢(shì)基本相近，這可能是由于土壤浸提液中抑制或促進(jìn)植物生長(zhǎng)的物質(zhì)相對(duì)較少，從而對(duì)植物產(chǎn)生的逆境脅迫也較小。

2.4.2 對(duì)脯氨酸含量的影響 由圖6可見(jiàn)，與對(duì)照相比，3種土層浸提液澆灌的馬纓杜鵑葉片脯氨酸含量有明顯變化，枯落物層浸提液處理的幼苗其脯氨酸含量變化趨于平緩，腐殖質(zhì)層浸提液澆灌的杜鵑幼苗其脯氨酸含量在0～15 d有緩慢上升，后一直呈下降趨勢(shì)；土壤層浸提液澆灌的幼苗其脯氨酸含量呈先上升后降低再上升趨勢(shì)。

2.5 不同浸提液澆灌對(duì)可溶性蛋白質(zhì)含量的影響

由圖7可見(jiàn)，枯落物、腐殖質(zhì)層浸提液持續(xù)澆灌幼苗，其可溶性蛋白質(zhì)變化趨勢(shì)基本相同，呈先下降后升高再下降趨勢(shì)，澆灌30 d時(shí)達(dá)到峰值，枯落物、腐殖質(zhì)層可溶性蛋白質(zhì)含量分別為13.03、11.81 mg/g，且含量高于對(duì)照；與土壤層浸提液處理相比，枯落物、腐殖質(zhì)層浸提液處理的可溶性蛋白質(zhì)含量變化更為明顯，這與自然狀態(tài)下枯落物與腐殖質(zhì)中含有的有機(jī)物量較多相符。

2.6 不同浸提液處理對(duì)丙二醛含量的影響

由圖8可知，3種浸提液澆灌的馬纓杜鵑，其葉片中MDA含量有明顯變化，且變化趨勢(shì)基本相同，呈單峰趨勢(shì)，對(duì)照、枯落物層、腐殖質(zhì)層、土壤均在澆灌45 d時(shí)達(dá)到峰值，MDA含量分別為0.059、0.055、0.076、0.054 μmol/g，腐殖質(zhì)層澆灌的幼苗MDA含量最大值遠(yuǎn)高于其他處理；枯落物、土壤層澆灌的幼苗葉片MDA含量多低于同期對(duì)照，這是由于馬纓杜鵑對(duì)不同浸提液澆灌有適應(yīng)過(guò)程，當(dāng)保護(hù)酶系統(tǒng)產(chǎn)生防御作用時(shí)，MDA含量下降。

3 結(jié)論與討論

植物體在整個(gè)生命過(guò)程中會(huì)不斷產(chǎn)生次生代謝物質(zhì)如活性氧等，而植物體內(nèi)清除活性氧的防衛(wèi)系統(tǒng)也會(huì)相應(yīng)產(chǎn)生，并維持動(dòng)態(tài)平衡。SOD、POD、CAT是生物體內(nèi)清除活性氧自由基的重要保護(hù)酶[9]。測(cè)得的CAT值越高，說(shuō)明其酶活性越強(qiáng)，其抗逆性也越強(qiáng)；超氧陰離子自由基（O-2· ）在生物遭到脅迫時(shí)會(huì)過(guò)量積累，從而氧化、破壞生物大分子，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡，而SOD普遍存在于動(dòng)植物體內(nèi)參與分解O-2· ，其值越高，植株適應(yīng)環(huán)境變化的能力越強(qiáng)，植物清除O-2· 的能力增強(qiáng)；保護(hù)酶的生成對(duì)葉綠素降解起到一定的作用[10]，植株葉片POD活性發(fā)生變化，往往會(huì)加重葉片細(xì)胞的質(zhì)膜過(guò)氧化程度，導(dǎo)致植物葉片葉綠素含量也發(fā)生變化。不同提取液澆灌方式下，馬纓杜鵑幼苗為滿足自身生長(zhǎng)，植物體內(nèi)生化反應(yīng)活躍，并對(duì)幼苗生長(zhǎng)產(chǎn)生刺激，導(dǎo)致葉片發(fā)黃掉落。

隨不同浸提液的持續(xù)澆灌，葉片中可溶性蛋白質(zhì)含量呈先降低后升高再下降又升高的變化趨勢(shì)，可能與不同土層代謝物被提取的種類(lèi)與數(shù)量有關(guān)[11-12]，這將是后續(xù)研究的重點(diǎn)。與清水處理相比，枯落物層、腐殖質(zhì)層、土壤層水浸提液澆灌的幼苗葉片，其可溶性蛋白質(zhì)含量變化不明顯，這是浸提液澆灌處理一段時(shí)間后幼苗適應(yīng)環(huán)境的表現(xiàn)。

脯氨酸和可溶性糖是重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。在持續(xù)澆灌后期，馬纓杜鵑幼苗葉片可溶性糖和脯氨酸含量呈上升趨勢(shì)，以維持植株正常的生長(zhǎng)狀態(tài)。MDA積累往往是植株受到環(huán)境傷害時(shí)產(chǎn)生的[13-14]，使植物蛋白質(zhì)和核酸變性，脂膜的流動(dòng)性下降。持續(xù)用3種不同浸提液澆灌馬纓杜鵑幼苗，隨時(shí)間的延長(zhǎng)，葉片MDA含量呈單峰變化趨勢(shì)，與植物適應(yīng)環(huán)境、保護(hù)酶防御系統(tǒng)的產(chǎn)生基本一致。

通過(guò)采用馬纓杜鵑純林林內(nèi)不同土層浸提液澆灌馬纓杜鵑3年生幼苗，對(duì)其葉片各生理指標(biāo)測(cè)定，結(jié)果表明，不同土層浸提液對(duì)生長(zhǎng)過(guò)程中的馬纓杜鵑幼苗其生理指標(biāo)有明顯影響，這對(duì)百里杜鵑林區(qū)杜鵑屬植物林下天然更新障礙研究提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

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