胡艷玲, 劉璐芬, 鄒 花

(湖北省京山縣人民醫(yī)院 病理科, 湖北 京山, 431899)

PLCE1和RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響

胡艷玲, 劉璐芬, 鄒 花

(湖北省京山縣人民醫(yī)院 病理科, 湖北 京山, 431899)

目的 分析PLCE1和RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響。 方法 選取90例食管癌患者，采用免疫組化SP法檢測(cè)食管鱗狀細(xì)胞癌組織中和癌旁正常食管組織中PLCE1和RFT2的表達(dá)，分析PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞組織及正常食管組織中的表達(dá)、PLCE1和RFT2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系以及PLCE1和RFT2的表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果 PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞組織及正常食管組織中的陽性率分別為86.67%、16.00%及80.00%、18.00%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); PLCE1和RFT2表達(dá)與食管癌臨床T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤最長(zhǎng)徑相關(guān)(P<0.05); 食管癌組織中的PLCE1與RFT2表達(dá)呈明顯正相關(guān)(rs=6.544 8,P<0.05)。結(jié)論 PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌中呈高表達(dá)，且與腫瘤最長(zhǎng)徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期關(guān)系密切。

PLCE1; RFT2; 食管腫瘤; 鱗狀細(xì)胞癌

磷脂酶Cε1(PLCE1)為磷脂酶C家族中的一員，其具有較為復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)和功能，其激活后可對(duì)細(xì)胞分化、生長(zhǎng)、繁殖起調(diào)節(jié)作用，同時(shí)對(duì)細(xì)胞骨架的變化、細(xì)胞的凋亡以及腫瘤的生長(zhǎng)發(fā)展等生物學(xué)行為產(chǎn)生影響[1]。核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(RFT2)是核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族中的重要一員，其作用主要是進(jìn)行核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)。核黃素參與了生物發(fā)生氧化的過程中氫的傳遞，其主要功能是促進(jìn)碳水化合物、脂肪、核酸以及蛋白質(zhì)的代謝，且有研究[2]證明核黃素的缺失與腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展具有密切的關(guān)聯(lián)。食道癌早期癥狀不顯著，就診時(shí)多為腫瘤中晚期，預(yù)后效果不佳，致死率較高[3-4]。本研究探討PLCE1和RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2016年4月在本院接受手術(shù)治療的90例食管癌患者。入選標(biāo)準(zhǔn)[5]: 所有患者在手術(shù)前都沒有接受過放療和化療等抗癌治療，患者病理和臨床資料完整。入選患者中男68例，女22例，年齡≤45歲的患者有9例，年齡>45歲的患者有81例，平均年齡為(60.09±7.83)歲; 所有患者依據(jù)WHO(1977年)食管腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)給予組織學(xué)分類，其中低分化17例，中分化58例，高分化15例; 患者浸潤(rùn)深度分期T1～T233例，T3～T457例; 腫瘤最長(zhǎng)徑<3 cm 29例，最長(zhǎng)徑>3 cm 61例。淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者有59例，未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者有31例。隨機(jī)選擇50例距離癌組織5 cm以上的正常食管黏膜組織進(jìn)行對(duì)照，男39例，女11例，平均年齡為(58.72±8.46)歲。整個(gè)研究均已得到患者知情同意，并通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

采取免疫組化SP對(duì)所有食管鱗狀細(xì)胞癌患者的PLCE1和RFT2的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè), PLCE1的工作液濃度是1∶100, RFT2的工作液的濃度是1∶200, PLCE1和RFT2表達(dá)檢測(cè)時(shí)，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。采用PBS代替I抗進(jìn)行步驟陰性對(duì)照，并采用已確定的染色陽性切片進(jìn)行陽性對(duì)照。主要試劑包括：羊抗人PLCE1多克隆，生產(chǎn)廠家為上海勁馬生物科技有限公司; 兔抗人RFT2多克隆抗體，該抗體的生產(chǎn)廠家是上海信裕生物科技有限公司; HRP標(biāo)記的Ⅱ抗及DAB顯色試劑盒，由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中和癌旁的正常食管組織中PLCE1和RFT2的表達(dá)，分析PLCE1和RFT2的表達(dá)與年齡、性別、分化程度、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤最長(zhǎng)徑等臨床病理特征的關(guān)系以及PLCE1和RFT2的表達(dá)的相關(guān)性。

1.4 結(jié)果判定

PLCE1的表達(dá)定位為細(xì)胞質(zhì), RFT2的表達(dá)定位為細(xì)胞膜或者細(xì)胞質(zhì)，二者均為棕黃色，呈顆粒狀分布; 通過雙盲法獨(dú)立閱片，隨機(jī)在無邊緣效應(yīng)和無組織折疊的典型部位選擇10個(gè)高倍視野, 1個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞100個(gè)：陽性細(xì)胞超過75%則記為4分，陽性細(xì)胞在51～75%則記為3分，陽性細(xì)胞在26～50%則記為2分，陽性細(xì)胞在0～25%則記為1分，沒有陽性細(xì)胞為則記為0分; 根據(jù)多數(shù)陽性細(xì)胞的染色來進(jìn)行著色強(qiáng)度計(jì)分：棕褐色則記為3分，棕黃色則記為2分，淡黃色則記為1分，無著色則記為0分。兩項(xiàng)得分相乘<3時(shí)，判斷為陰性; 兩項(xiàng)得分相乘≥3時(shí)，判斷為陽性; 采用Spearman相關(guān)性分析檢測(cè)PLCE1和RFT2的相關(guān)性[6-7]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0來統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)來比較計(jì)數(shù)資料和計(jì)量資料,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 比較PLCE1與RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁的正常食管組織中的表達(dá)

結(jié)果顯示, PLCE1在食管鱗狀細(xì)胞癌組織的陽性率為86.67%(78/90), 在癌旁的正常食管組織中的陽性率分別為16.00%(8/50); RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性率為80.00%(72/90), 在癌旁的正常食管組織中的陽性率為18.00(9/50); PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性率均高于癌旁正常食管組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 PLCE1表達(dá)和食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床特征之間的關(guān)系

PLCE1的表達(dá)與腫瘤最長(zhǎng)徑、食管癌臨床T分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05), 與腫瘤分化的程度、患者年齡及性別無相關(guān)性(P>0.05), 見表1。

2.3 RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病例特征的關(guān)系

RFT2的表達(dá)與臨床特征中的腫瘤最長(zhǎng)徑、食管癌臨床T分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05), 與腫瘤分化的程度、患者年齡及性別無相關(guān)性(P>0.05), 見表2。

表1 PLCE1表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

表2 RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

2.4 PLCE1和RFT2表達(dá)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的相關(guān)性

PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)為正相關(guān)(rs=6.544 8,P<0.05), 見表3。

表3 PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌中的相關(guān)性

3 討 論

食管癌分為兩種病理類型，一種是食管鱗狀細(xì)胞癌，一種是食管腺癌。據(jù)調(diào)查[8]顯示，在中國(guó)的食管癌患者中，大約90%的患者為食管鱗狀細(xì)胞癌。目前，手術(shù)治療是最主要的治療手段，化療及放療是常用的輔助治療方法，但常規(guī)化療或放療治療具有療效不佳，預(yù)后效果較差，且副作用大等缺點(diǎn)，經(jīng)治療后的食管癌患者5年生存率只有20%左右[9]。食管癌從發(fā)生到發(fā)展，再到浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與多種因素相關(guān)。隨著分子靶向治療的效果開始在食管癌治療中的顯現(xiàn)，尋找有效的分子靶標(biāo)成為了研究食管癌治療的熱點(diǎn)[10]。

PLCE1和RFT2在中國(guó)食管鱗狀細(xì)胞癌為易感基因已經(jīng)得到研究證實(shí)[11]。PLCE1是屬于磷脂酶C家族，具有較為復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)，包括特殊結(jié)構(gòu)域和保守結(jié)構(gòu)域。其中G蛋白能夠激活PLCE1的保守結(jié)構(gòu)的磷脂酶活性，催化水解多磷酸肌醇，從而產(chǎn)生出二脂酰甘油、三磷酸肌醇[12]。而二脂酰甘油可致使蛋白激酶C的過度表達(dá)，導(dǎo)致靶蛋白的蘇氨酸殘基磷以及絲氨酸等發(fā)生酸化，調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，三磷酸肌醇可以促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)鈣離子的釋放，進(jìn)一步結(jié)合蛋白激酶C, 調(diào)節(jié)立早基因表達(dá)及細(xì)胞增殖與分化，且PLCE1的特有結(jié)構(gòu)域還可作為Ras家族的效應(yīng)分子，參與到細(xì)胞、分化、繁殖，并參與到腫瘤的形成過程中[13]。RFT2是調(diào)節(jié)控制核黃素吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵基因，其產(chǎn)物是核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，具有將細(xì)胞外的核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)的功能。核黃素是機(jī)體新陳代謝和生命活動(dòng)不可缺少的存在。核黃素的缺失與食管癌具有密切的聯(lián)系，有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[14]表明，核黃素缺失可引起食管鱗狀上皮細(xì)胞受損，其結(jié)果與人類食管癌前病變類似。且有研究[15-18]證實(shí)，食管鱗狀細(xì)胞癌高發(fā)區(qū)的核黃素缺失較為明顯，補(bǔ)充核黃素能夠有效的減少食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生。

本研究通過研究PLCE1和RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響，從而為食管癌分子靶向治療以及預(yù)后判斷提供生物學(xué)的依據(jù)。研究結(jié)果顯示, PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)均高于正常食管組織，由此提示食管鱗狀細(xì)胞與PLCE1與RFT2的表達(dá)有關(guān)，其過度表達(dá)可能導(dǎo)致食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增大[19-20]。通過對(duì)PLCE1和RFT2表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床病例特征關(guān)系的分析可知, PLCE1和RFT2的表達(dá)與臨床病理特征中的腫瘤最長(zhǎng)徑、食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床T分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)系，而與患者食管鱗狀細(xì)胞癌的分化程度、患者年齡以及性別沒有關(guān)聯(lián)，由此提示PLCE1和RFT2可作為食管鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷指標(biāo)和判斷預(yù)后指標(biāo)[21-22]。且經(jīng)過對(duì)PLCE1和RFT2二者表達(dá)的相關(guān)性分析，結(jié)果顯示二者呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系，但二者在食管鱗狀細(xì)胞癌中的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究證實(shí)PLCE1和RFT2在食管鱗狀細(xì)胞癌中呈現(xiàn)出高表達(dá)，二者之間呈正相關(guān)，且PLCE1和RFT2表達(dá)與腫瘤最長(zhǎng)徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期關(guān)系密切，由此可推測(cè), PLCE1和RFT2的表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展具有較為密切的關(guān)聯(lián)，提示PLCE1和RFT2可作為食管鱗狀細(xì)胞癌早期診斷以及預(yù)后判斷的有效輔助指標(biāo)，在腫瘤侵襲性的預(yù)測(cè)以及評(píng)估腫瘤的轉(zhuǎn)移可能性方面具有一定的參考價(jià)值。

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Correlation between PLCE1, RFT2 expressions and esophageal squamous cell carcinoma and their effects on prognosis

HU Yanling, LIU Lufen, ZOU Hua

(DepartmentofPathology,ThePeople′sHospitalofJingshanCounty,Jingshan,Hubei, 431899)

Objective To analyze the correlation between PLCE1, RFT2 expressions and esophageal squamous cell carcinoma and their effects on prognosis. Methods Ninety esophageal cancer patients were selected. Immunohistochemical SP method was used to detect PLCE1 and RFT2 expressions in esophageal squamous cell carcinoma and adjacent normal esophageal tissues, and correlation between PLCE1, RFT2 expressions and clinicopathological features as well as relationship between PLCE1 and RFT2 were analyzed. Results Positive rates of PLCE1 and RFT2 in esophageal squamous cell tissue and normal esophageal tissues were 86.67%, 16.00% and 80.00%, 18.00% respectively, and there were significant differences (P<0.05). PLCE1 and RFT2 expressions were correlated with esophageal clinical T stage, lymph node metastasis and the longest diameter (P<0.05). PLCE1 expression was positively correlated with RFT2 expression in esophageal cancer tissue (rs=6.544 8,P<0.05). Conclusion PLCE1 and RFT2 are highly expressed in esophageal squamous cell carcinoma, and are closely correlated with tumor maximum diameter, lymph node metastasis and clinical stages.

PLCE1; RFT2; esophageal cancer; squamous cell carcinoma

2016-11-09

湖北省衛(wèi)生廳科研課題(1304568)

R 735.1

A

1672-2353(2017)01-037-04

10.7619/jcmp.201701011