趙娜

(開(kāi)封市中心醫(yī)院 輸血科 河南 開(kāi)封 475000)

?

化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法及ELISA法檢測(cè)在乙肝病毒及核心抗體定性檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值

趙娜

(開(kāi)封市中心醫(yī)院 輸血科 河南 開(kāi)封 475000)

目的 對(duì)比分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法及ELISA法檢測(cè)在乙肝病毒及核心抗體定性檢測(cè)中的應(yīng)用效果。方法 選取于2014年2月至2016年10月開(kāi)封市中心醫(yī)院收治的62例疑似肝炎患者，采集所有入選者血液樣本，對(duì)其乙肝病毒(HBV)及核心抗體IgG與IgM先實(shí)施ELISA法檢測(cè)，再實(shí)施化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢測(cè)，對(duì)比兩種檢測(cè)方法HBV檢出情況及對(duì)乙肝IgG與IgM檢出情況。結(jié)果 ELISA法HBV陽(yáng)性檢出率(95.16%)與化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法(98.39%)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；ELISA法對(duì)乙肝IgG與IgM抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為19.35%(12/62)、17.74%(11/62)，低于化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法69.35%(43/62)、80.65%(50/62)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 與ELISA法相比，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法對(duì)乙肝病毒的核心抗體檢出率較高。

乙肝病毒；化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法；核心抗體；ELISA法

乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)是一種DNA病毒，傳染范圍較為廣泛。據(jù)相關(guān)資料，我國(guó)約有9 300萬(wàn)人攜帶HBV，部分慢性肝炎患者可逐漸進(jìn)展為肝衰竭、肝硬化、肝癌等，危害患者生命安全[1]。既往研究表明，機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)HBV可針對(duì)性產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，而對(duì)HBV及核心抗體檢測(cè)是判定HBV感染、預(yù)后等主要依據(jù)[2]?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析法及ELISA法是檢測(cè)HBV及核心抗體主流方法，但關(guān)于其應(yīng)用價(jià)值存在一定爭(zhēng)議。本研究旨在對(duì)比分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法及ELISA法檢測(cè)在乙肝病毒及核心抗體定性檢測(cè)中的應(yīng)用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年2月至2016年10月開(kāi)封市中心醫(yī)院收治的62例疑似肝炎患者。其中男37例，女25例；病程為1～11 a，平均(5.16±3.04)a。本研究經(jīng)開(kāi)封市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 主要試劑和儀器 HBV核心IgM抗體試劑盒；HBV核心IgG抗體試劑盒；辣根過(guò)氧化酶；PBS緩沖液；100 μl 3%過(guò)氧化氫；100 μl 0.1 mol/L氫氧化鈉；100 μl 30 mol/L魯米諾；恒溫箱；發(fā)光儀；離心機(jī)。

1.2.2 樣本收集 于清晨收集所有受試者空腹靜脈血5 ml，確保標(biāo)本不溶血。4 h內(nèi)在4 ℃溫度條件下實(shí)施離心，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，得上清待測(cè)。

1.2.3 ELISA法 ①將試劑盒取出，瓶裝試劑與微孔反應(yīng)條放置于室溫下進(jìn)行0.5 h平衡。②微孔反應(yīng)條中加入待測(cè)樣本，并為各測(cè)試微孔板設(shè)置陰性對(duì)照、空白對(duì)照。③微孔反應(yīng)條采用封片進(jìn)行封鎖，放置恒溫(37 ℃)水浴中60 min。④打開(kāi)并棄去微孔反應(yīng)條中液體，將洗滌液加入進(jìn)行5次洗滌。⑤將反應(yīng)條各孔中加入試劑盒中A液和B液各50 μl，再次封板，37 ℃條件下水浴0.5 h，再加入終止液。⑥ 450 nm下對(duì)OD實(shí)施檢測(cè)，記錄HBV及核心抗體檢出情況。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為所測(cè)血清值≥臨界值(2×標(biāo)準(zhǔn)差+陰性樣品平均A值)。HBV抗體臨界值血清由各陽(yáng)性對(duì)照血清混合稀釋而得，HBV抗體陽(yáng)性對(duì)照由各試劑盒陽(yáng)性對(duì)照血清混合而得。所有操作過(guò)程均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.4 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法 在已包被HBV核心抗原IgG與IgM的聚苯乙烯試管中加入待測(cè)樣本，再將辣根過(guò)氧化酶(100 μl)標(biāo)記過(guò)的IgG與IgM抗體放置在37 ℃條件下2 h，應(yīng)用PBS緩沖液進(jìn)行3 min沖洗，共3次。然后將100 μl 0.1 mol/L氫氧化鈉、100 μl 30 mol/L魯米諾加入，完成室溫下10 min靜置后，將100 μl 3%過(guò)氧化氫加入，即刻對(duì)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，并觀察發(fā)光儀，讀取數(shù)據(jù)，記錄HBV及核心抗體檢出情況。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，定性資料以(n，%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV檢出情況 ELISA法檢出59例HBV陽(yáng)性，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢出61例HBV陽(yáng)性。ELISA法HBV陽(yáng)性檢出率(95.16%)與化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法(98.39%)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.258，P>0.05)。

2.2 乙肝IgG與IgM檢出情況 ELISA法檢出乙肝IgG抗體12例，IgM抗體11例；化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢出乙肝IgG抗體43例，IgM抗體50例。ELISA法對(duì)乙肝IgG與IgM抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為19.35%(12/62)、17.74%(11/62)，低于化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法的69.35%(43/62)、80.65%(50/62)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ12=31.400，χ22=49.077，P<0.05)。

3 討論

HBV感染臨床較為常見(jiàn)，對(duì)HBV-M和HBV-DNA的檢測(cè)可對(duì)HBV感染情況做出診斷。乙肝核心抗體包含IgG與IgM，其中IgM維持時(shí)間較短，一般在6～18周，IgG出現(xiàn)相對(duì)較晚，但其持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，兩者均可說(shuō)明近期有慢性感染或HBV感染病毒活動(dòng)。乙肝起病隱匿，常缺乏顯著癥狀，易出現(xiàn)誤診或漏診。而HBV感染能夠向慢性化轉(zhuǎn)變，增加了肝癌、肝硬化等嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，因此及早準(zhǔn)確診斷HBV感染對(duì)疾病早期干預(yù)具有積極意義。傳統(tǒng)診斷乙肝方法包含preS1診斷試劑等，比較耗時(shí)費(fèi)力。隨著生物技術(shù)發(fā)展進(jìn)步，ELISA法及化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法被廣泛用于臨床血清病毒的檢測(cè)中。辜彥等[3]研究指出，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法及酶聯(lián)免疫吸附法均可有效檢出乙型肝炎病毒。而張利[4]等研究指出，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法對(duì)抗體檢測(cè)敏感性較高。曾艷華等[5]Meta分析顯示，化學(xué)發(fā)光法用于血清HCV抗體檢測(cè)中，具有穩(wěn)定性、敏感性、特異性高優(yōu)點(diǎn)。本研究對(duì)比兩種方法對(duì)HBV及核心抗體IgG與IgM檢出情況，結(jié)果顯示ELISA法HBV陽(yáng)性檢出率(95.16%)與化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法(98.39%)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明兩種方法對(duì)HBV陽(yáng)性檢出情況相似。但ELISA法對(duì)乙肝IgG與IgM抗體檢測(cè)陽(yáng)性率低于化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢測(cè)靈敏性較高。ELISA法診斷試劑盒均采用合成多肽抗原或基因工程包被固相，操作簡(jiǎn)便，但以間接法測(cè)定，結(jié)果可能存在一定差異；而化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法所用試劑盒包被的抗體基本不受突變抗體影響，且其標(biāo)記物來(lái)源豐富，能夠識(shí)別多種逃逸變異株，使得人為因素影響較低，故結(jié)果重復(fù)性和穩(wěn)定性高。綜上，與ELISA法相比，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法對(duì)乙肝病毒的核心抗體檢出率較高。

[1] 王澤民.時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)在乙肝病毒血清學(xué)檢測(cè)中的研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,35(6):455-458.

[2] 安靜娜,李冬冬,陳其霞,等.電化學(xué)發(fā)光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2015,28(4):374-376

[3] 辜彥,王裕圯.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法及酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)抗-丙型肝炎病毒的對(duì)比研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(20):2891-2892.

[4] 張利,于冬男.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法及ELISA檢測(cè)抗-HCV的結(jié)果比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,13(1):18-20.

[5] 曾艷華,孟存仁,張朝霞.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HCV抗體診斷丙型肝炎價(jià)值的Meta分析[J].中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志,2014,14(6):707-715.

R 446

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.14.048

2017-02-11)