趙明禮等

同期排卵
——定時(shí)輸精對(duì)產(chǎn)后難配泌乳奶牛繁殖效率的影響

趙明禮等

奶牛理想的泌乳周期為一年，即產(chǎn)犢間隔365d。然而在實(shí)際生產(chǎn)中，奶牛場母牛的產(chǎn)犢間隔往往達(dá)不到理想水平。正常情況下，奶牛在產(chǎn)后30～70 d內(nèi)卵巢和生殖道恢復(fù)正常，表現(xiàn)出正常規(guī)律性的發(fā)情周期和明顯的發(fā)情癥狀，但是產(chǎn)后繁殖障礙疾病如產(chǎn)后不發(fā)情和久配不孕等使得產(chǎn)后泌乳母牛繁殖效率降低，從而延長了產(chǎn)犢間隔。

本試驗(yàn)選用前列腺素F2α（PGF2α）、黃體酮（P4）和促性腺激素釋放激素（GnRH）3種外源生殖激素，按照一定程序處理產(chǎn)后難配（產(chǎn)后不發(fā)情或久配不孕）奶牛，研究同期排卵-定時(shí)輸精技術(shù)對(duì)產(chǎn)后難配奶牛繁殖效率的影響，以期為解決奶牛繁殖障礙提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)?zāi)膛槟膛．a(chǎn)業(yè)技術(shù)體系大同綜合試驗(yàn)站（大同市四方高科農(nóng)牧有限公司）飼養(yǎng)的荷斯坦泌乳奶牛。選擇88頭健康、膘情適中（體況評(píng)分在2.5～4.25）、久配不孕（人工授精3次以上未妊娠母牛，占試驗(yàn)牛45.5%）或產(chǎn)后不發(fā)情（產(chǎn)后110 d內(nèi)未觀察到發(fā)情癥狀的泌乳母牛，占試驗(yàn)牛54.5%）的空懷荷斯坦泌乳奶牛（本試驗(yàn)統(tǒng)稱為難配泌乳奶牛），隨機(jī)分為3組，試驗(yàn)?；厩闆r見表1。經(jīng)直腸檢查，試驗(yàn)牛生殖道正常，卵巢除部分靜止以外無其他明顯異常。

表1 試驗(yàn)?；厩闆r表

試驗(yàn)期間，TMR全混合日糧，3次/d（早、中、晚各1次），自由飲水。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)分組及處理

試驗(yàn)牛隨機(jī)分為3組，分別記為試驗(yàn)1、2、3組。

試驗(yàn)1組，Ovsynch法：所有試驗(yàn)牛于發(fā)情周期任意一天（記為第0天）15：00—16：00第一次肌肉注射GnRH 100 μg，第7天15：00—16：00肌肉注射PGF2α 0.4 mg，第9天15：00—16：00第二次肌肉注射GnRH 100 μg，第10天07：00—08：00定時(shí)人工授精。

試驗(yàn)2組，CIDR+Ovsynch法：所有試驗(yàn)牛于發(fā)情周期任意一天（記為第0天）15：00—16：00陰道埋植CIDR且第一次肌肉注射GnRH 100 μg，第7天15：00—16：00撤出CIDR且肌肉注射PGF2α 0.4 mg，第9天15：00 —16：00第二次肌肉注射GnRH 100 μg，第10天07：00—8：00定時(shí)人工授精。

試驗(yàn)3組，CIDR+PG+GnRH法：所有試驗(yàn)牛于發(fā)情周期任意一天（記為第0天）15：00—16：00陰道埋植CIDR，第7天15：00—16：00撤出CIDR且肌肉注射PGF2α 0.4 mg，第9天15：00— 16：00肌肉注射GnRH 100 μg，第10天07：00—08：00定時(shí)人工授精。

各試驗(yàn)組操作流程見圖1。

圖1 試驗(yàn)分組及處理流程示意圖

發(fā)情鑒定

采用人工觀察法、尾根涂抹蠟筆法和計(jì)步器活動(dòng)量監(jiān)控相結(jié)合的方法監(jiān)測(cè)母牛發(fā)情。

人工授精

選擇1頭進(jìn)口荷斯坦種公牛的常規(guī)冷凍精液（公牛號(hào)為25HO00989），2名輸精人員按照同期排卵-定時(shí)輸精程序的固定時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)給處理母牛人工授精。每頭母牛使用一支冷凍精液，且解凍后15 min內(nèi)直腸把握將精液輸送到子宮體前端。

妊娠診斷

母牛輸精后40～45 d利用B超診斷儀進(jìn)行妊娠診斷。

2 結(jié)果與分析

2.1 同期排卵——定時(shí)輸精程序?qū)Ξa(chǎn)后難配泌乳奶牛人工授精的影響

表2結(jié)果表明，3種同期排卵-定時(shí)輸精程序處理產(chǎn)后難配奶牛后都獲得了較好的配種妊娠率，雖然試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組的不返情率略高于試驗(yàn)3組（P=0.06，P=0.09），試驗(yàn)2組的情期受胎率略高于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組（P=0.08，P=0.06），但是3種程序處理難配奶牛人工授精后的不返情率和情期受胎率之間無顯著差異（P＞0.05）。

表2 不同同期排卵——定時(shí)輸精程序?qū)﹄y配奶牛不返情率和情期受胎率的影響

2.2 同期排卵——定時(shí)輸精程序?qū)Ξa(chǎn)后難配奶牛血清中P4和E2含量的影響

由圖2可知，配種妊娠母牛與未妊娠母牛血清中P4含量的變化趨勢(shì)一致，即在CIDR埋植期，母牛血清中的P4含量逐漸增加，在撤栓時(shí)達(dá)到高峰（0.234±0.055）、（0.256±0.045）ng/mL，撤栓后迅速降低，輸精時(shí)降到最低（0.129±0.009）、（0.134±0.026）ng/mL，其中妊娠母牛血清P4的最低值低于未妊娠母牛，但差異不顯著（P＞0.05）；配種妊娠母牛與未妊娠母牛血清中E2含量變化趨勢(shì)差異較大，妊娠母牛血清中E2含量整體呈增加趨勢(shì)，定時(shí)輸精時(shí)達(dá)到最高7.402（±0.663）pg/mL，而配種未妊娠母牛血清中E2含量變化幅度較大，高峰值出現(xiàn)在定時(shí)輸精之前（第二次注射GnRH時(shí)），定時(shí)輸精時(shí)血清中E2含量降到較低水平（5.448±1.252）pg/mL，且極顯著低于配種妊娠母牛（P＜0.01）。

圖2 CIDR+Ovsynch程序處理母牛血清P4（A）和E2（B）含量變化趨勢(shì)

由圖3可知，CIDR+PG+GnRH程序處理過程中母牛血清中P4含量變化趨勢(shì)與CIDR+Ovsynch程序相似，即在CIDR埋植期，母牛血清中的P4含量逐漸增加，在撤栓時(shí)達(dá)到高峰（0.265±0.090）ng/mL、（0.247±0.032）ng/mL，撤栓后迅速降低，定時(shí)輸精時(shí)達(dá)到最低點(diǎn)（0.064±0.018）ng/mL、（0.117±0.024）ng/mL，且妊娠母牛血清P4的最低值顯著低于未妊娠母牛（P＜0.05）；CIDR+PG+GnRH程序處理過程中母牛血清中E2含量變化趨勢(shì)與CIDR+Ovsynch程序略有不同，配種妊娠母牛血清中E2含量從撤栓后才開始呈逐漸增加趨勢(shì)，定時(shí)輸精時(shí)達(dá)到最高值（8.226±5.253）pg/mL，配種未妊娠母牛血清E2含量的高峰值同樣出現(xiàn)在定時(shí)輸精之前（撤栓時(shí)），定時(shí)輸精時(shí)血清E2含量降到較低水平（5.103±0.966）pg/mL，且極顯著低于配種妊娠母牛（P＜0.01）。

圖3 CIDR+PG+GnRH程序處理母牛血清P4（A）和E2（B）含量變化趨勢(shì)

3 討論

泌乳母牛產(chǎn)后不發(fā)情和久配不孕是影響奶牛場繁殖效率的重要因素。奶牛繁殖受下丘腦-垂體-卵巢生殖軸的反饋調(diào)節(jié)，因此體內(nèi)生殖激素的規(guī)律性變化和調(diào)控是母牛具有正常發(fā)情周期和繁殖性能的基礎(chǔ)。正常情況下，卵泡期卵泡生長發(fā)育并分泌E2，低濃度E2正反饋調(diào)節(jié)下丘腦GnRH的合成與分泌，GnRH作用于垂體，促進(jìn)FSH和LH的釋放，促進(jìn)優(yōu)勢(shì)卵泡形成、排卵和黃體形成；黃體期黃體分泌P4，高濃度P4負(fù)反饋調(diào)控GnRH和FSH的分泌，抑制卵巢上卵泡發(fā)育，若母牛發(fā)情未配種或者配種未妊娠，則子宮內(nèi)膜細(xì)胞合成PGF2α溶解黃體，從而解除了P4對(duì)生殖軸的抑制作用，母牛開始新一輪的發(fā)情周期。因此，生殖激素紊亂是導(dǎo)致奶牛產(chǎn)后不發(fā)情、久配不孕的主要原因。

同期排卵-定時(shí)輸精技術(shù)不僅能夠提高發(fā)情周期正常奶牛的發(fā)情率和參配率，而且通過GnRH+PG或者孕激素+GnRH+PG聯(lián)合處理可誘導(dǎo)生殖激素紊亂的奶?；謴?fù)正常繁殖性能和發(fā)情周期，從而使難配奶牛如卵泡發(fā)育不良或產(chǎn)后不發(fā)情奶牛參加配種并妊娠。本試驗(yàn)中，3種同期排卵-定時(shí)輸精程序處理的難配母牛都獲得了較好的情期受胎率，表明應(yīng)用外源生殖激素處理難配母?？梢蕴岣吣膛鲭y配母牛的配種妊娠率。

血液中性腺類固醇激素（如雌激素和黃體酮）在奶牛發(fā)情周期中規(guī)律性分泌對(duì)下丘腦-垂體-卵巢生殖軸具有重要的反饋調(diào)節(jié)作用。血液中雌激素含量高低主要取決于奶牛卵巢上卵泡的數(shù)量和質(zhì)量，而黃體酮高低主要反映卵巢上黃體的質(zhì)量。

摘自“中國畜牧雜志”微信公眾號(hào)