張園，孫榕，馮陽(yáng)春，黃艷春

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011；2 新疆博州人民醫(yī)院)

Th17細(xì)胞在宮頸癌患者外周血中的比例及臨床意義

張園1，孫榕2，馮陽(yáng)春1，黃艷春1

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011；2 新疆博州人民醫(yī)院)

目的 探討外周血Th17細(xì)胞數(shù)量與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。方法 選取宮頸癌初治患者50例(宮頸癌組)，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者25例(CIN組)，成年體檢健康女性25例(對(duì)照組)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組外周血Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例；分析Th17細(xì)胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌組、CIN組和對(duì)照組外周血Th17細(xì)胞比例分別為(2.02±0.46)%、(1.36±0.31)%、(0.58±0.19)%，組間兩兩比較P均<0.01；外周血Th17細(xì)胞比例與宮頸癌患者國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)均呈正相關(guān)(r分別為0.74、0.43、0.54，P均<0.05)，與組織分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 宮頸癌患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)量增多；Th17細(xì)胞增多可促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

宮頸癌；Th17細(xì)胞；外周血；流式細(xì)胞術(shù)

宮頸癌的發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中居首位，其發(fā)病率和病死率呈逐年升高的趨勢(shì)[1,2]。Th17細(xì)胞是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)輔助性T細(xì)胞，因能夠特異性地分泌細(xì)胞因子IL-17而得名。IL-17具有強(qiáng)烈的促炎癥作用，能夠招募中性粒細(xì)胞并使其活化，其與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系是近些年來(lái)腫瘤免疫領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題[3]。由于腫瘤類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的不同，目前關(guān)于Th17細(xì)胞在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用的觀點(diǎn)尚不統(tǒng)一。本研究探討Th17細(xì)胞在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用和意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1～12月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦科住院的宮頸癌初治患者50例作為宮頸癌組，年齡41～69(54.23±6.99)歲；鱗癌38例，腺癌12例；國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期15例，Ⅳ期10例。另選取同期住院的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者25例(CIN組)，年齡34～67(51.54±5.78)歲；其中CIN Ⅰ級(jí)8例，CIN Ⅱ級(jí)10例，CIN Ⅲ級(jí)7例。選取成年體檢健康女性25例作為對(duì)照組，年齡25～61(48.59±6.11)歲。三組年齡具有可比性。所有研究對(duì)象無(wú)自身免疫性疾病史，無(wú)傳染病史以及其他惡性腫瘤。

1.2 外周血Th17細(xì)胞比例檢測(cè) 采用流式細(xì)胞術(shù)。采集研究對(duì)象外周靜脈血3 mL，并肝素抗凝。在加入200 μL肝素鈉抗凝全血的無(wú)菌試管中，加入等量RPMI 1640培養(yǎng)基(Gibco公司)、含小牛血清(杭州四季青生物公司)混勻，加入2 μL Leukocyte Activation Cocktail(美國(guó)BD公司)，37 ℃、5% CO2刺激培養(yǎng)4～6 h(每2 h混勻一次)，加入10 μL CD4-PC5(美國(guó)Beckman coulter公司)及同型對(duì)照進(jìn)行細(xì)胞表面分子染色，加入溶血素500 μL混勻室溫避光10 min，PBS洗滌棄上清，經(jīng)固定和破膜后(固定破膜劑試劑盒為ebioscience公司)，加入IL-17-PC7抗體(美國(guó)BioLegend產(chǎn)品)20 μL及同型對(duì)照進(jìn)行胞內(nèi)抗體染色，室溫孵育30 min，加入500 μL PBS重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)(FC500流式細(xì)胞儀，美國(guó)Beckman coulter公司)。CD4+IL-17+細(xì)胞代表Th17細(xì)胞。分析外周血Th17細(xì)胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血Th17細(xì)胞比例比較 宮頸癌組、CIN組和對(duì)照組外周血中Th17細(xì)胞比例分別為(2.02±0.46)%、(1.36±0.31)%、(0.58±0.19)%，組間兩兩比較P均<0.01。見(jiàn)插頁(yè)Ⅱ圖6。

2.2 外周血Th17細(xì)胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 宮頸癌患者外周血Th17細(xì)胞水平與患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)有關(guān)(P均<0.05)，與組織分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)。Th17細(xì)胞比例與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)均呈正相關(guān)(r分別為0.74、0.43和0.54，P均<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 外周血Th17細(xì)胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染是WHO公認(rèn)的宮頸癌致病因素之一[4]。多數(shù)情況下HPV感染可通過(guò)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答被清除，當(dāng)機(jī)體免疫力失調(diào)，不能啟動(dòng)有效的免疫應(yīng)答時(shí)則無(wú)法徹底清除HPV感染，導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生[5]，故機(jī)體免疫功能的狀態(tài)與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。Th17細(xì)胞是2005年發(fā)現(xiàn)的能特異分泌IL-17的新型CD4+T細(xì)胞亞群[6]，近年來(lái)成為腫瘤免疫領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。

IL-17細(xì)胞因子包括六個(gè)同源性家族成員[7]，按其發(fā)現(xiàn)的順序依次命名為IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E(亦稱(chēng)IL-25)和IL-17F，目前僅IL-17A、IL-25和IL-17F的促炎性因子作用得以確認(rèn)，IL-17A與IL-17F在功能和數(shù)量上占主導(dǎo)地位，IL-17A是目前研究重點(diǎn)。本研究采用的流式細(xì)胞術(shù)抗體亦為抗IL-17A，能反映IL-17細(xì)胞因子的表達(dá)水平。Th17細(xì)胞被認(rèn)為與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系。Kryczek等[8]研究顯示，卵巢癌患者外周血及癌組織中Th17細(xì)胞表達(dá)明顯升高，并且通過(guò)IL-17和IFN-γ之間的協(xié)同作用，Th17細(xì)胞可刺激CXCL9和CXCL10生產(chǎn)招募效應(yīng)T細(xì)胞到腫瘤微環(huán)境中。有研究發(fā)現(xiàn)，從黑色素瘤[9]、乳腺癌[10]和結(jié)腸癌[11]的腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞(TILs)中發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞升高，提示CD4+Th17細(xì)胞增多可能是腫瘤患者的一般特征[12]。鼻咽癌患者外周血及腫瘤組織中Th17細(xì)胞明顯多于正常鼻咽組織和健康對(duì)照者外周血，說(shuō)明Th17細(xì)胞在鼻咽癌腫瘤微環(huán)境中的高表達(dá)可能與巨噬細(xì)胞抑制因子有密切關(guān)系[13]。

本研究CIN與宮頸癌患者外周血中Th17細(xì)胞數(shù)量均明顯高于對(duì)照組，提示Th17細(xì)胞在CIN及宮頸癌變的相關(guān)免疫機(jī)制中起到一定作用，且可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Kimura等[14]研究發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤細(xì)胞通過(guò)葡萄糖代謝產(chǎn)生大量的乳酸，激活I(lǐng)L-23/IL-17炎性通路，誘發(fā)炎癥，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)量隨臨床分期及分化程度的加重而升高，提示Th17細(xì)胞的在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中表現(xiàn)為促腫瘤生長(zhǎng)的作用，其數(shù)量在一定程度上反映腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移潛能，可能與宮頸癌生物學(xué)行為惡化及不良預(yù)后有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)[15]，腫瘤組織中Thl7細(xì)胞增多能增加組織微血管密度，促進(jìn)腫瘤血管上皮細(xì)胞生成。這可能是其促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一。本研究發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)宮頸癌患者Th17表達(dá)水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)者，提示Th17細(xì)胞數(shù)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)密切相關(guān)，Th17表達(dá)高者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和(或)脈管浸潤(rùn)；對(duì)于外周血Th17細(xì)胞增多的宮頸癌患者術(shù)前應(yīng)高度警惕淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與脈管浸潤(rùn)可能，需更徹底的手術(shù)治療。

綜上所述，宮頸癌患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)量與疾病的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，可作為宮頸癌的臨床分期和判斷患者機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)，對(duì)預(yù)測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能、判斷疾病預(yù)后具有一定意義。

[1] Siegel R, Miller K, Jemal A.Cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(1):7-30.

[2] Chen W, Zheng R, Baade P, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016,66(2):115-132.

[3] Guéry L, Hugues S. Th17 Cell Plasticity and Functions in Cancer Immunity[J]. Biomed Res Int, 2015,2015:314620.

[4] Molijn A, Jenkins D, Chen W, et al.The complex relationship between human papillomavirus and cervical adenocarcinoma[J]. Int J Cancer, 2016,138(2):409-416.

[5] Gutierrez-Xicotencatl L, Salazar-Pina DA, Pedroza-Saavedra A, et al. Humoral Immune Response Against Human Papillomavirus as Source of Biomarkers for the Prediction and Detection of Cervical Cancer[J]. Viral Immunol, 2016,29(2):83-94.

[6] Harrington LE, Hatton RD, Mangan PR, et al. Interleukin 17-producing CD4+effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages[J]. Nat Immunol, 2005,6(11):1123-1132.

[7] Han Q, Das S, Hirano M, et al. Characterization of Lamprey IL-17 Family Members and Their Receptors[J]. J Immunol, 2015,195(11):5440-5451.

[8] Kryczek I, Banerjee M, Cheng P, et al. Phenotype, distribution, generation, and functional and clinical relevance of Th17 cells in the human tumor environments[J]. Blood, 2009,114(6):1141-1149.

[9] Diller ML, Kudchadkar RR, Delman KA, et al. Complete response to high-dose IL-2 and enhanced IFNgamma+Th17 : TREG ratio in a melanoma patient, 2016[J]. Melanoma Res, 2016,26(5):535-539.

[10] Benevides L, Cardoso C, Tiezzi D, et al. Enrichment of regulatory T cells in invasive breast tumor correlates with the upregulation of IL-17A expression and invasiveness of the tumor[J].Eur J Immuno, 2013,43(6):1518-1528.

[11] Karczewski J, Mazur M, Rychlewska-Hanczewska A, et al. Role of Th17 lymphocytes in pathogenesis of colorectal cancer [J]. Postepy Hig Med Dosw (Online), 2014,22(68):42-47.

[12] Su X, Ye J, Hsueh EC, et al. Tumor microenvironments direct the recruitment and expansion of human Th17 cells[J]. J Immunol, 2010,184(3):1630-1641.

[13] Li J, Mo HY, Xiong G, et al. Tumor microenvironment macrophage inhibitory factor directs the accumulation of interleukin-17-producing tumor-infiltrating lymphocytes and predicts favorable survival in nasopharyngeal carcinoma patients[J]. J Biol Chem, 2012,287(42):35484-35495.

[14] Kimura Y, Nagai N, Tsunekawa N, et al. IL-17A-producing CD30(+) Vdelta1 T cells drive inflammation-induced cancer progression[J]. Cancer Sci, 2016,107(9):1206-1214.

[15] Hou F, Li Z, Ma D, et al. Distribution of Th17 cells and Foxp3-expressing T cells in tumor-infiltrating lymphocytes in patients with uterine cervical cancer[J]. Clin Chim Acta, 2012,413(23-24):1848-1854.

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(腫2014-04)。

黃艷春(E-mail： huangyanchun0619@sohu.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.04.013

R711.74

B

1002-266X(2017)04-0043-03

2016-05-24)